富馬酸酮替芬的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用

富馬酸酮替芬的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【專利摘要】本發明公開了富馬酸酮替芬的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用，本發明提供的富馬酸酮替芬的藥物組合物中含有富馬酸酮替芬和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，富馬酸酮替芬、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對高泌乳素血癥具有治療作用；富馬酸酮替芬和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對高泌乳素血癥的治療效果顯著提高，可以開發成治療高泌乳素血癥的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
富馬酸酮替芬的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及富馬酸酮替芬的新用途，具體涉及富馬酸酮替芬 的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 富馬酸酮替芬兼有組胺H1受體拮抗作用和抑制過敏反應介質釋放作用，不僅抗過 敏作用較強，且藥效持續時間較長，故對預防各種支氣管哮喘發作及外源性哮喘的療效比 對內源性哮喘更佳。

【發明內容】

[0003] 本發明的目的在于提供一種富馬酸酮替芬的藥物組合物，該藥物組合物中含有富 馬酸酮替芬和一種結構新穎的天然產物，富馬酸酮替芬和該天然產物可以協同治療高泌乳 素血癥。
[0004] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0005] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0006]
[0007] -種富馬酸酮替芬的藥物組合物，包括富馬酸酮替芬、如權利要求1所述的化合物 (I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將華山參粉碎，用85~95%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用8 %乙醇洗脫10個柱體積，再用70 %乙醇洗脫12個柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療高泌乳素血癥的藥物中的應用。
[0015] 上述富馬酸酮替芬的藥物組合物在制備治療高泌乳素血癥的藥物中的應用。
[0016] 本發明的優點:本發明提供的富馬酸酮替芬的藥物組合物中含有富馬酸酮替芬和 一種結構新穎的天然產物，富馬酸酮替芬和該天然產物單獨作用時，具有治療高泌乳素血 癥作用;二者聯合作用時，治療高泌乳素血癥效果進一步提高，可以開發成治療高泌乳素血 癥的藥物。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。
[0018] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0019] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0020] 分離方法：（a)將華山參(2kg)粉碎，用90%乙醇熱回流提取(20LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫12 個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱 體積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用 正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0021] 結構確證:冊431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 263.1209，結合核磁特征可得分子式為 C15H18〇4,不飽和度為 7。核磁共振氫譜數據 SH(ppm，CD2Cl2,500MHz):H-la(2.14，dd，J=16.0， 13.5Hz)，H-lb(2.85,dd，J=16.0，3·7Ηζ)，Η-4(7·26,s)，H-5(2.74,d，J=10.6Hz)，H-8 (3.23，d，J = 10.3Hz)，H-9(1.55，m)，H-10(1.77，m)，H-12a(5.23，t，J = 2.0Hz)，H-12a (5.36，t，J = 2.0Hz)，H-13a(4.32，dd，J=13.4,2.0Hz)，H-13b(4.65，dd，J=13.4,2.0Hz)， !1-14(1.12，(1，了 = 6.4他），!1-15(1.84,8);核磁共振碳譜數據6。（卯111，〇)2(：1 2，1251抱）：42.5 (CH2d-C)，199.3(C，2-C)，136.5(C，3-C)，145.7(CH，4-C)，47.5(CH，5-C)，73.4(C，6-C)， 103.7(C，7-C)，73.4(CH，8-C)，42.4(CH，9-C)，40.5(CH，10-C)，146.7(C，11-C)，112.7(CH2， 12-C)，69.3(CH2，13-C)，15.5(CH3，14-C)，16.6(CH3，15-C)<JR 光譜（1675cm-1)以及紫外吸 收波長(238nm)表明該化合物含有一個α，β-不飽和酮羰基。氫譜顯示該化合物含有一個乙 烯甲基質子信號[知1.84(3!1，8，16-15)]，一個雙峰甲基信號％1.12(3!1，(1，1 = 6.4他，16-14)]，一組環外雙鍵信號[δH5·23(lH，t，J = 2·0Hz，H-12a)和5·36(lH，t，J = 2·0Hz，H-l2b)]，一個連氧亞甲基質子信號[δH4·32(lH，dd，J=13·4,2·0Hz，H-13a)和4·65(lH，dd，J =13.4,2.0抱，!1-1313)]，一個烯屬次甲基質子信號％7.26(1!1，8，!1-4)]以及一個連氧次甲 基質子信號[6 113.23(1!1，(1，1=10.3他，!1-8)]。該化合物的碳譜顯示15個碳信號，其中有兩 組雙鍵碳信號，一個羰基碳信號，一個半縮酮碳信號以及三個連氧碳信號。綜合高分辨質譜 和核磁數據顯示，該化合物可能為一個倍半萜類化合物。查閱文獻可知，該化合物和已知化 合物Lyophyllone Α具有相似的結構。比較兩者核磁數據可知，相較于已知化合物，新化合 物中C-6和C-7位的碳信號向高場位移，同時新化合物中多出了一個不飽和度。故而，猜測該 化合物還含有一個額外的環。比較新化合物和已知化合物的核磁數據可以發現，C-6和C-7 位的碳信號均向高場位移，結合高分辨數據，可以確認該化合物在C-6和C-7之間存在一個 三元氧環。N0ESY譜中，H-10與Me-14，H-5與H-9以及H-8與Me-14的相關性說明8-OH為α構型， Η-10與Me-14為β構型。同時，Ha-12與Η-10以及Ha-13與Η-8的相關性說明五元內酯環與六元 環是順式稠合的，C-6和C-7之間的三元氧環是α朝向的。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜， 以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD 試驗確定，理論值與實驗值基本一致。
[0022] 該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0023]
Q
[0024] 實施例2:藥理作用
[0025]本實施例使用背部皮下注射鹽酸甲氧氯普胺注射液制備高泌乳素血癥(HPRL)大 鼠模型，觀察藥物降低血清泌乳素(PRL)，升高雌二醇(Ε2)、孕酮(Ρ)水平等方面的抗高泌乳 素血癥作用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動物
[0028] 雌性未孕Wi star大鼠60只，SPF級，體質量200~220g，購于湖北省實驗動物研究中 心。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 富馬酸酮替芬購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例 1。鹽酸甲氧氯普胺注射液(滅吐靈，徐州萊恩藥業有限公司，規格lmL:10mg);甲磺酸溴隱亭 (Switzerland，2.5mg/片，研碎后用蒸餾水溶解為0.045mg/mL的水溶液，使用時充分搖勻）。 E2、P、PRLELISA酶聯免疫試劑盒(上海麗臣生物有限公司）。
[0031] 1.3儀器
[0032] J2714恒溫箱(武漢大江電器儀表廠）；Rayt〇RT-6000酶標儀、RaytoRT-3100全自動 洗板機(深圳雷杜生命科學股份有限公司）。
[0033] 1.4大鼠分組及模型制備
[0034] 大鼠隨機分為6組，每組10只，分別為正常對照組、模型對照組、陽性對照組（甲磺 酸溴隱亭組，50mg · kg-4和富馬酸酮替芬組(80mg · kg-Ο、化合物（I)組(80mg · kg-1富馬 酸酮替芬與化合物（I)組合物組【40mg · kg<富馬酸酮替芬+40mg · kg-1化合物（I)】。正常組 每只大鼠背部皮下注射生理鹽水lmL，其他組大鼠背部皮下注射鹽酸甲氧氯普胺注射液 50mg/kg體質量，每天上午下午分別定時注射1次，連續5d。各組動物在造模成功后，灌胃相 應藥物或蒸餾水，每日1次，連續20d。正常對照組與模型對照組大鼠灌胃給予純化水。
[0035] 1.5PRL水平測定實驗
[0036] 含量測定采用酶聯免疫分析方法，嚴格按照ELISA試劑盒說明書中實驗操作流程 進行。
[0037] 1·6Ε2、Ρ水平測定實驗
[0038]采用酶聯免疫分析方法，嚴格按照ELISA試劑盒說明書中實驗操作流程進行。
[0039] 1.7統計學方法
[0040]實驗數據用均數土標準差(X土s)表示，應用SPSS18.0版統計軟件進行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。
[0041 ] 2、實驗結果
[0042] 2.1對高泌乳素血癥(HPRL)模型大鼠 PRL水平的影響
[0043]與正常對照組比較，模型對照組大鼠 PRL水平明顯升高(P<0.01);與模型對照組 比較，富馬酸酮替芬與化合物（I)組合物組和甲磺酸溴隱亭組PRL水平顯著降低(P<0.01); 與模型對照組比較，富馬酸酮替芬組、化合物（I)組PRL水平降低(P<0.05)。結果見表1。 [0044] 2.2對高泌乳素血癥模型大鼠 E2、P水平的影響
[0045] 與正常對照組比較，模型對照組大鼠 E2、P水平明顯降低(P<0.01)。與模型對照組 比較，富馬酸酮替芬與化合物（I)組合物組和甲磺酸溴隱亭組E2、P水平顯著提高（P< 〇.〇 1);與模型對照組比較，富馬酸酮替芬組、化合物（I)組E2、P水平提高(P<0.05)。見表1。 [0046] 表1對HPRL大鼠 PRL、E2、P含量的影響
[0047]
[0048] 血清PRL濃度的增高會擾亂下丘腦-垂體-性腺軸的功能，使下丘腦促性腺激素釋 放激素(GnRH)合成和分泌受阻，并減弱了垂體對GnRH的敏感性，導致促FSH和LH分泌低下， 繼而卵巢分泌E2、P不足，造成卵泡發育不良和黃體功能不足而致月經失調、閉經和不孕等。
[0049] 上述結果表明，富馬酸酮替芬、化合物（I)單獨作用時，對高泌乳素血癥具有治療 作用；富馬酸酮替芬和化合物（I)聯合作用時，對高泌乳素血癥的治療效果顯著提高，可以 開發成治療高泌乳素血癥的藥物。
[0050] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種富馬酸酬替芬的藥物組合物，其特征在于:包括富馬酸酬替芬、如權利要求1所 述的化合物(I)和藥學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的富馬酸酬替芬的藥物組合物，其特征在于:藥學上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的富馬酸酬替芬的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將華 山參粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗 脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和 2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得至Ij3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療高泌乳素血癥的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的富馬酸酬替芬的藥物組合物在制備治療高泌乳素血癥的 藥物中的應用。
【文檔編號】A61P15/00GK105906648SQ201610335380
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月15日
【發明人】劉雨
【申請人】劉雨