具有脂肪酶抑制作用的綿馬次酸類化合物及其應用
【專利摘要】提供綿馬次酸類化合物sarothralen A、Rxj?43、Rxj?19或其藥用鹽，以其為有效成分和至少一種藥學上可接受的載體組成的藥物組合物，其制備方法，以及其在制備脂肪酶抑制藥物中的應用。Sarothralen A為已知結構，Rxj?43和Rxj?19為新化合物綿馬次酸類(二聚間苯三酚類衍生物)，具有較好的體外脂肪酶抑制活性，作為脂肪酶抑制藥物有較多優勢。
【專利說明】
具有脂肪酶抑制作用的綿馬次酸類化合物及其應用
技術領域：
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體地說，涉及具有脂肪酶抑制活性的綿馬次酸類化 合物sarothralen六、1?幻-43、1?幻-19及其制備方法，以該化合物為活性成分的藥物組合物， 以及其在治療肥胖病中的應用。
【背景技術】：
[0002] 胰和胃脂肪酶是腸道中脂肪消化吸收所必需的。食物中的脂肪被水解為單酰甘油 和游離脂肪酸后在腸道被吸收，然后在體內重新合成脂肪，造成脂肪堆積，最終導致肥胖。 應用脂肪酶抑制劑可有效抑制腸道中脂肪酶對脂肪的分解催化作用，達到減少脂肪吸收， 控制和治療肥胖的目的。因此，開發和應用有效的脂肪酶抑制劑受到人們的關注。
[0003] 金絲桃屬(Hypericum)是藤黃科(Gutt if erae)的一個大屬，全世界約400種，除南 北兩極地或荒漠地及大部分熱帶低地外世界廣布。我國約有55種8亞種，幾產于全國各地， 但主要集中在西南地區。除了用于觀賞，金絲桃屬植物具有抗抑郁、抗病毒、抗菌和抗腫瘤 等多種藥理活性。
[0004] 地耳草(H. japonicum Thunb.):《中藥大辭典》記載品種，另丨」名田基黃、雀舌草。一 年生草本，產于江蘇、浙江、四川、云南等地。具有清熱利濕，消腫解毒等功效，用于黃疸熱 淋，腫毒，毒蛇咬傷。文獻報道該植物的化學成分有黃酮、xanthone等。迄今為止，現有技術 中未有綿馬次酸類化合物sarothralen六、1^」-43、1^〇-19對脂肪酶抑制的生物活性的報 道。
【發明內容】
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[0005] 本發明目的在于提供從地耳草(H.japonicum)中分離得到的綿馬次酸類化合物 sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19,其制備方法，在藥物中特別是在治療肥胖病藥物中的應 用。
[0006] 為了實現本明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案：
[0007] 如下結構式所示的化合物Rxj -43、Rxj-19或其藥用鹽。
[0008]
[0009]含有治療有效量的綿馬次酸類化合物Rxj_43、Rxj-19任一種或兩種的混合物或其 藥用鹽和藥學上可接受的載體的藥物組合物。
[0010] 如下結構式所示的化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19或其藥用鹽在制備脂肪 酶抑制劑中的應用，
[0011]
[0012」化合物Sar0thralenA、RXj-43、R Xj-19或其藥用鹽在制備治療肥胖病的藥物中的 應用。
[0013] 如所述的綿馬次酸類化合物1^」-43、1^」-19、531'〇1:11抑16114或其藥用鹽，其中所 述的藥用鹽為是指藥學上可接受的鹽，是與有機酸形成的鹽，所述的有機酸為酒石酸、甲 酸、乙酸、乙二酸、丁酸、馬來酸、琥珀酸、己二酸、藻酸、檸檬酸、天冬氨酸、苯磺酸、樟腦酸、 樟腦磺酸、二葡糖酸、環戊烷丙酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、庚酸、己酸、 延胡索酸、2-羥基乙磺酸、乳酸、甲磺酸、煙酸、2-萘磺酸、撲酸、果膠酯酸、3-苯基丙酸、新戊 酸、丙酸、對 -甲苯磺酸和i 燒酸。
[0014] 制備所述的綿馬次酸類化合物Rx j-43、Rxj -19的方法，取地耳草干燥全草，粉碎， 用甲醇室溫下冷浸2次，每次24小時，合并提取液，減壓蒸餾濃縮，得浸膏，浸膏用100-200目 硅膠拌樣，硅膠柱層析，用氯仿洗脫得到氯仿段，氯仿段用1.5倍量的聚酰胺拌樣，過MCI柱， 以7:3-10:0的Me0H-H 20進行梯度洗脫，得到5個大段A-E，B段經硅膠柱層析，以1:0-0:1的石 油醚-丙酮進行梯度洗脫，得到4個小段B1-B4,其中B3段經制備HPLC，甲醇-水，95:5分離純 化后得到sarothralen A;同樣，B4部分經制備HPLC，甲醇-水，95:5分離純化后得到Rxj-19，C段用100-200目硅膠拌樣，硅膠柱層析，以1:0-0:1的石油醚-丙酮進行梯度洗脫，得到5 個部分C1-C5，其中C2部分經制備HPLC，甲醇-水，95:5分離純化后得到Rx j-43。
[0015] 制備綿馬次酸類化合物sarothralen A的方法，取地耳草干燥全草，粉碎，用甲醇 室溫下冷浸2次，每次24小時，合并提取液，減壓蒸餾濃縮，得浸膏，浸膏用100-200目硅膠拌 樣，硅膠柱層析，用氯仿洗脫得到氯仿段，氯仿段用1.5倍量的聚酰胺拌樣，過MCI柱，以7:3-10:0的Me0H-H 20進行梯度洗脫，得到5個大段A-E，B段經硅膠柱層析，以1:0-0:1的石油醚-丙酮進行梯度洗脫，得到4個小段B1-B4，其中B3段經制備HPLC，甲醇-水，95:5分離純化后得 到sarothralen A〇
[0016] Sarothralen A為已知結構，Rx j-43和Rxj-19為新化合物綿馬次酸類(二聚間苯三 酚類衍生物），具有較好的體外脂肪酶抑制活性，作為脂肪酶抑制藥物有較多優勢。 SarothralenA、Rxj-43、Rxj-19對脂肪酶有較強的抑制作用，可作為活性成分用于制備減肥 藥物制劑，具有較好藥用價值。
【附圖說明】： 圖1為本發明化合物sarothralen六、1^〇-43、1^〇-19的結構示意圖。
【具體實施方式】：
[0017] 下面結合附圖，用本發明的實施例來進一步說明本發明的實質性內容，但并不以 此來限定本發明。
[0018] 實施例1:
[0019] 1、化合物sarothralen A、Rxj_43、Rxj_19的制備及結構數據：
[0020] 地耳草干燥全草（14kg)，粉碎，用甲醇室溫下冷浸2次，每次24小時，合并提取液， 減壓蒸餾濃縮，得浸膏2.5kg。粗提物用100-200目硅膠拌樣，硅膠柱層析，用氯仿洗脫得到 氯仿段（164.2g)。氯仿段用1.5倍量的聚酰胺拌樣，過MCI柱，以Me0H-H 20(7:3-10:0)進行梯 度洗脫，得到5個大段(A-E)』段(25.5g)經硅膠柱層析，以石油醚-丙酮（1:0-0:1)進行梯度 洗脫，得到4個小段(B1-B4)。其中B3段(3.0g)經制備HPLC(甲醇-水，95:5)分離純化后得到 sarothralen A(520mg);同樣，B4部分(6.4g)經制備HPLC(甲醇-水，95: 5)分離純化后得到 Rxj-19(230mg) X段(25 · 5g)用100-200目硅膠拌樣，硅膠柱層析，以石油醚-丙酮（1:0-0:1) 進行梯度洗脫，得到5個部分(C1-C5)，其中C2部分(3.2g)最終經制備HPLC(甲醇-水，95:5) 分離純化后得到Rxj-43(850mg)。
[0021 ]化合物Rxj-43、Rxj-19的結構解析：
[0022] 化合物Rxj-43,無色膠狀物。ESI-MS譜給出準分子離子峰為m/z 581[M-H]_，結合 高分辨負離子^^51-]\^(111/2[]\1-!1]-581.3117，。31。(1€(^581.3114)及13(^^^?1'匪1?譜圖 提供的信息，確定其分子式為C34H46〇8，計算不飽和度為12。群光譜在204(4.45)，225(4.32)， 305(4.27)，340(4.11)處有吸收，說明分子中存在較長的共輒系統。分析咕和 13C NMR譜，再 結合HSQC譜表明化合物1中含有34個碳信號，包括9個甲基，5個亞甲基，4個次甲基(包括2個 烯碳），16個季碳(其中1個飽和季碳）。仔細分析這些數據表明Rxj-43為綿馬次酸類化合物， 且與已知化合物sarothralen A很相似。最終，Rxj-43被確定為sarothralen A的衍生物， sarothralen A中C-7位異丙基被2中的仲丁基取代。化合物Rxj-19為化合物2的15'氧化產 物，并伴隨著16'，17'雙鍵的形成，C-7位羰基上攜帶的是一個仲丁基。化合物的 1Η和13C NMR 譜數據如表1和2所示。
[0023]表1.化合物 Rxj-43 和 Rxj-19的NMR 13C 譜數據(acetone)
[0024]
[0025]
[0026] 表2.化合物Rxj-43和Rxj-19的NMR 4譜數據(acetone)
[0027]
[0028]
[0029] 實施例2
[0030] Sarothralen六、1^」-43、1^」-19的脂肪酶抑制活性：
[0031 ] 試劑來源:豬胰脂肪酶(PPL)購自阿拉丁試劑公司；p-nitrophenyl butyrate(p-NPB)、0rlistat購自Sigma公司；D-PBS購自Hyclone公司；無水氯化f丐為成都市科龍化工試 劑廠產品。
[0032]實驗方法:在96孔酶標板上，將待測化合物與PPL溶液充分混合，每個濃度均設定3 個重復孔，37 °C，15min ;加入p-NPB，混合均勻，37 °C，15min，酶標儀測定0D值（400nm/ 630nm)，檢測波長為400nm，參考波長為630nm。實驗同時設置空白對照孔和Orlistat陽性對 照孔。
[0033]計算公式：
[0034] PPL活性抑制率（％ ) = (1-樣品0D值/實驗對照孔0D值）X 100%
[0035] IC5〇(50%concentration of inhibition)按Reed&Muench法計算。檢測結果見表3 所示。
[0036] 表3、Sarothralen八、1^」-43、1^」-19的脂肪酶抑制的1〇5〇值
[0039]由表3可見：331"〇1:11抑16114、1^」-43、1^」-19對脂肪酶有較強的抑制作用，可作為
[0037]
[0038] 活性成分用于制備減肥藥物制劑，具有較好藥用價值。
[0040] 實施例3:
[0041] 按實施例 1 制得化合物Sarothralen A、Rxj_43、Rxj_19,，按化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一種或任幾種混合與賦形劑重量比1:1或1:2的比例加入賦形劑，制粒 壓片。
[0042] 實施例4:
[0043] 按實施例1制得化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19,，按常規膠囊制劑方法制 成膠囊。
[0044] 實施例5:
[0045] 先按實施例1制得化合物Sar〇thra 1 en A、Rxj-43、Rxj-19，再按下述方法制成片 劑。
[0046] 片劑:化合物Sarothralen A、Rxj_43、Rxj_19任一種或任幾種混合100mg，淀粉適 量，玉米漿適量，硬脂酸鎂適量。制備方法:將化合物與助劑混合，過篩，在合適的容器中均 勻混合，把得到的混合物制粒壓片。
[0047] 實施例6:
[0048] 膠囊劑:化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一種或任幾種混合100mg，淀粉 適量，硬脂酸鎂適量。
[0049] 制備方法:將化合物1-4任一種或任幾種混合與助劑混合，過篩，在合適的容器中 均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊。
[0050] 實施例7:
[0051 ] 片劑：實施例1所得化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一種或任幾種混合 l〇mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸鎂5mg;
[0052] 制備方法:將化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一種或任幾種混合、乳糖和 淀粉混合，用水均勻濕潤，把濕潤后的混合物過篩并干燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然后將 混合物壓片，每片重250mg，化合物含量為10mg。
[0053] 實施例8:
[0054] 安瓿劑:實施例1所得化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一種或任幾種混合 2mg，氯化鈉 10mg;
[0055] 制備方法:將化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一種或任幾種混合和氯化 鈉溶解于適量的注射用水中，過濾所得溶液，在無菌條件下裝入安瓿瓶中。
[0056] 實施例9:
[0057] 膠囊劑:實施例1所得化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一種或任幾種混合 1 〇mg，乳糖187mg，硬脂酸鎂3mg;
[0058] 制備方法:將化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19任一種或任幾種混合與助劑 混合，過篩，均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊，每個膠囊重200mg，活性成分含量 為10mg。
【主權項】
1. 如下結構式所示的化合物Rxj-43、Rxj-19或其藥用鹽。2. 含有治療有效量的權利要求1所示的綿馬次酸類化合物任一種或兩種的混合物或其 藥用鹽和藥學上可接受的載體的藥物組合物。3. 如下結構式所示的化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19或其藥用鹽在制備脂肪酶 ^出I商I出的庶田4. 化合物Sarothralen A、Rxj-43、Rxj-19或其藥用鹽在制備治療肥胖病的藥物中的應 用。5. 如權利要求1或2或3或4所述的綿馬次酸類化合物Rx j-43、Rxj-19、Sar0thra 1 en A或 其藥用鹽，其特征在于所述的藥用鹽為是指藥學上可接受的鹽，是與有機酸形成的鹽，所述 的有機酸為酒石酸、甲酸、乙酸、乙二酸、下酸、馬來酸、班巧酸、己二酸、藻酸、巧樣酸、天冬 氨酸、苯橫酸、精腦酸、精腦橫酸、二葡糖酸、環戊燒丙酸、十二烷基硫酸、乙橫酸、葡庚糖酸、 甘油憐酸、庚酸、己酸、延胡索酸、2-徑基乙橫酸、乳酸、甲橫酸、煙酸、2-糞橫酸、撲酸、果膠 醋酸、3-苯基丙酸、新戊酸、丙酸、對-甲苯橫酸和十一燒酸。6. 制備權利要求1所述的綿馬次酸類化合物Rxj-43、Rxj-19的方法，取地耳草干燥全 草，粉碎，用甲醇室溫下冷浸2次，每次24小時，合并提取液，減壓蒸饋濃縮，得浸膏，浸膏用 100-200目硅膠拌樣，硅膠柱層析，用氯仿洗脫得到氯仿段，氯仿段用1.5倍量的聚酷胺拌 樣，過MCI柱，^7:3-10:0的MeOH-出0進行梯度洗脫，得到5個大段A-E，B段經硅膠柱層析，W 1:0-0:1的石油酸-丙酬進行梯度洗脫，得到4個小段B1-B4,其中B3段經制備HPLC，甲醇-水， 95: 5分離純化后得到sarothralen A;同樣，B4部分經制備HPLC，甲醇-水，95:5分離純化后 得到Rx j-19，C段用100-200目硅膠拌樣，硅膠柱層析，W1:0-0:1的石油酸-丙酬進行梯度洗 脫，得至化個部分C1-C5，其中C2部分經制備HPLC，甲醇-7jC，95:5分離純化后得到Rx j-43。7. 制備權利要求3或4所述應用中所設及到的綿馬次酸類化合物sarothralen A的方 法，取地耳草干燥全草，粉碎，用甲醇室溫下冷浸2次，每次24小時，合并提取液，減壓蒸饋濃 縮，得浸膏，浸膏用100-200目硅膠拌樣，硅膠柱層析，用氯仿洗脫得到氯仿段，氯仿段用1.5 倍量的聚酷胺拌樣，過MCI柱，^7:3-10 :0的MeOH-此0進行梯度洗脫，得到5個大段A-E，B段 經硅膠柱層析，如：0-0:1的石油離-丙酬進行梯度洗脫，得到4個小段B1-B4,其中B3段經制 備HPLC，甲醇-水，95:5分離純化后得到saro化ralen Ao
【文檔編號】A61K31/122GK105906500SQ201610255786
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月22日
【發明人】許剛, 楊興偉, 李艷萍, 白雪
【申請人】中國科學院昆明植物研究所