鹽酸文拉法辛的藥物組合物以及生物醫藥用圖
【專利摘要】本發明公開了鹽酸文拉法辛的藥物組合物以及生物醫藥用途，本發明提供的鹽酸文拉法辛的藥物組合物中含有鹽酸文拉法辛和一種從甘草的干燥根莖中分離得到的結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，鹽酸文拉法辛、化合物(Ⅰ)單獨作用時，具有促進骨折愈合的作用；鹽酸文拉法辛和化合物(Ⅰ)聯合作用時，促進骨折愈合的效果更為明顯，二者存在協同作用，可以開發成促進骨折愈合的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
鹽酸文拉法辛的藥物組合物以及生物醫藥用途
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及鹽酸文拉法辛的新用途，具體涉及鹽酸文拉法辛 的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 鹽酸文拉法辛是三種生物源性胺類(5-羥色胺，去甲腎上腺素和多巴胺）的再攝取 抑制劑，其中對5-羥色胺再攝取抑制作用最強，對去甲腎上腺素再攝取抑制作用也較強。文 拉法辛對毒蕈堿、煙堿、組胺和腎上腺素受體無作用，對單胺氧化酶無抑制作用。
[0003] 鹽酸文拉法辛主要通過同時阻斷NE和5-HT的再攝取，升高NE和5-HT濃度而發揮雙 重抗抑郁作用，對多巴胺(DA)的重攝取，僅有輕微的抑制作用。對Μ膽堿受體，腎上腺素 α1、α 2、β受體，組胺HI受體幾乎無親和力。其活性代謝產物0-去甲基文拉法辛亦可抑制5-HT和NE 的重攝取，活性比原形藥低。有研究表明，該品小劑量時主要抑制5-HT的再攝取，大劑量時 對5-HT和NE的再攝取均有抑制作用。該藥對5-HT再攝取的抑制作用弱于選擇性5-HT重攝取 抑制劑(SSRI);對NE再攝取的抑制作用也弱于某些三環類抗抑郁藥(TCA)或選擇性NE再攝 取抑制藥。但該品單次或多次給藥均可降低由異丙腎上腺素刺激大鼠松果體產生的cAMP濃 度，引起腎上腺素 β受體的快速下調，而TCA則需長期給藥才有此效應。現認為文拉法辛對腎 上腺素 β受體的快速下調作用與其起效快有關。
[0004] 迄今為止，尚未見鹽酸文拉法辛及其藥物組合物與骨折愈合的相關性報道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種鹽酸文拉法辛的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽 酸文拉法辛和一種結構新穎的天然產物，鹽酸文拉法辛和該天然產物可以協同促進骨折愈 合。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -種鹽酸文拉法辛的藥物組合物，包括鹽酸文拉法辛、如權利要求1所述的化合物 (I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011]進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012]上述化合物⑴的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將甘草的干燥根莖粉碎，用85 ~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁 醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫12個柱體積， 收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用 正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個 組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離， 用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃 縮得到化合物(I)。
[0013] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0015]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備促進骨折愈合的藥物中的應用。
[0017] 上述鹽酸文拉法辛的藥物組合物在制備促進骨折愈合的藥物中的應用。
[0018] 本發明的優點:本發明提供的鹽酸文拉法辛的藥物組合物中含有鹽酸文拉法辛和 一種從甘草的干燥根莖中分離得到的結構新穎的天然產物，鹽酸文拉法辛和該天然產物單 獨作用時，具有促進骨折愈合作用；二者聯合作用時，促進骨折愈合的效果進一步提高，可 以開發成促進骨折愈合的藥物。
【具體實施方式】
[0019] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。
[0020] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0021] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰。
[0022] 分離方法：（a)將甘草的干燥根莖(2kg)粉碎，用90%乙醇熱回流提取(20L X 3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4LX3次）、乙酸乙酯(4LX3次)和水飽和的 正丁醇(4LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇 洗脫12個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙 醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組 分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個 柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (275mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0023] 結構確證:冊431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 219.1346，結合核磁特征可得分子式為 &4Η18〇2，不飽和度為6。核磁共振氫譜數據δΗ( ΡΡπι，CDC13，500MHz): H-4(6 · 32，d，J = 9 · 6Hz)， H-5(6.21，dd，J=9.6,3.1Hz)，H-6(2.39，m)，H-7(3.73，m)，H-8a(1.78，m)，H-8b(1.55，dd，J = 12.2,8.1Hz)，H-10a(2.53，d，J=15.8Hz)，H-10b(2.31，d，J=15.8Hz)，H-ll(10.13，s)， !1-13(0.84，(1，了 = 7.3抱），!1-14(1.04,8)，!1-15(1.17,8);核磁共振碳譜數據6。(卯111，〇)(：1 3， 125MHz):199.8(C，卜C)，141.2(C，2-C)184.8(C，3-C)，132.3(CH，4-C)，154.7(CH，5-C)， 31.1(CH，6-C)，52.7(CH，7-C)，45.3(CH2,8-C)，37.7(C，9-C)，51.2(CH2，10-C)，186.9(CH， 11-C)，19.2(CH 3，13-C)，28.3(CH3，14-C)，29.1(CH3，15-C)。紅外波譜表明該化合物含有羰 基（1735cm-醛基1628cm-O^C-NMRJEPT和HSQC譜中顯示有14個碳信號，包括三個甲基， 兩個亞甲基，五個次甲基(一個醛基和兩個烯烴碳），以及四個季碳(兩個烯烴碳和一個羰基 碳），以上功能結構再結合不飽和數表明該化合物為雙環結構。 1H-NMR譜結合HSQC譜顯示三 個甲基質子信號知0.84(3!1，(1，1 = 7.3抱）、1.04(3!1，8)、1.17(3!1，8)，兩組亞甲基質子信號 δΗ 1.78( lH，m)與1.55( lH，dd，J= 12.2，8.1Hz)、2.53( lH，d，J= 15·8Ηζ)與 2.31( lH，d，J = 15.8抱），一對烯烴質子信號5[16.32(1!1，(1，了 = 9.6!^)與6.21(1!1，(1(1，了 = 9.6,3.1抱），一個 醛基質子信號知10.13(lH，s)，兩個次甲基質子信號δΗ 2.39(lH，m)與3. COSY譜中存在H-4/H-5/H-6/H-7/H2-8相關信號，同時HMBC譜中顯示有H-4與C-2和C-3，H-5 與 C-4、C-6 和 C-7，H-6 與 C-1 和 C-4，H-7 與 C-5，H2-10 與 C-l、C-7、C-8 和 C-14，H-11 與 C-l、C-2 和C-3，H3-13與C-5和C-7，H3-14與C-8、C-9和C-10，H 3-15與C-9和C-10相關信號，通過上述 匪R譜中的相關信息可以構建該化合物的連接方式，并且上述波譜數據表明該化合物為12 位碳缺失的notremulane型倍半萜。HMBC譜中Η-ll和H-4與C-3的相關性表明C-3為酮羰基。 在notremulane型倍半砲中，H-6與H-7位一般為β構型，出 -14構型通常處是β位，出-15構型為 α位。在該化合物的Ν0Ε試驗中體現的Η-6/Η-7與Η-7/Η3-14相關信號符合tremulane型倍半 萜的構型關系。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基 本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。
[0024] 該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0025]
[0026] 實施例2:藥理作用 [0027] 1、材料與方法
[0028] 1.1動物
[0029] 青紫蘭健康家兔50只，體質量2.0~2.5kg，雌雄兼用。兔標準顆粒飼料喂養。均由 蘭州生物制品研究所提供。
[0030] 1.2試劑與樣品
[0031 ]鹽酸文拉法辛購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例 1。仙靈骨葆膠囊：由淫羊藿、續斷、補骨脂等藥物組成。貴州仙靈藥業有限責任公司生產。硫 噴妥鈉，麻醉用藥，上海新亞藥業有限公司生產。使用時用生理鹽水配制成2%的溶液供腹 腔注射。青霉素鈉，哈爾濱制藥總廠生產。
[0032] 1.3家兔分組及模型制備
[0033] 將上述50只家兔適應性飼養3d后，腹腔注射2 %硫噴妥鈉40mg/kg麻醉。取橈骨中 段縱行切口，顯露橈骨中段，用牙科鉆的圓砂輪將橈骨鋸成3mm寬的骨缺損標準橫斷骨折。 不做固定，術后每天肌注青霉素鈉4X10 4U/kg，連用3d，動物造模后隨機分為5組，分別為空 白對照組、陽性對照組(仙靈骨葆膠囊，280mg · kg<)和鹽酸文拉法辛組(20mg · kg<)、化合 物（I)組（20mg · kg<)、鹽酸文拉法辛與化合物（I)組合物組【10mg · kg<鹽酸文拉法辛+ 10mg · 1?1化合物⑴】。藥物混懸液灌胃法給藥，術后第1天開始灌胃。陽性對照組灌服仙靈 骨葆0.28g/kg，均以10ml/kg蒸餾水稀釋，空白對照組灌服10ml/kg生理鹽水。各兔灌胃1次/ d，連續至處死日期為止。
[0034] 1.4標本采集與處理
[0035] 灌胃后第3周于耳中央動脈采血檢測血清堿性磷酸酶(ALPase)。于灌胃第14天用 空氣栓塞法處死第一批兔子，每組內也用隨機法分為2個亞組，每個亞組5只。于肘關節離斷 前臂，置同一膠片盒攝X線片，然后完整分離橈骨，剔除附著的軟組織及骨膜，用生理鹽水紗 布塊包裹橈骨標本，置_20°C冰箱冷藏備用。將另一側橈骨標本于骨折部上下方各lcm處鋸 斷，4%甲醛固定備用。第31天同前法處死第二批兔子，采集標本。
[0036] 1.5血清 ALPase 測定
[0037] 采用比色法測定血清堿性磷酸酶[S_ALP(IU/L)]。
[0038] 1 · 6骨痂生物力學測試
[0039]將橈骨標本于測試前2h取出，自然解凍，置萬能材料實驗機，作三點彎曲實驗，測 試橈骨骨痂力學強度。跨距50mm，加載速度10mm/min，以最大載荷作為橈骨愈合程度的標 志。視骨折斷面為橢圓，用游標卡尺測量骨折部最大直徑(dl)和最小直徑(d2)，得出最大半 徑(a)和最小半徑(b)，求出橢圓的橫截面積，計算出最大應力。計算公式如下：
[0040]橫截面積:F = Jiab(單位:mm2);最大應力=最大載荷/橫截面積(單位:N · mnf2)
[00411 1.7統計學方法
[0042] X線片評分結果按分數編秩，SPSS19.0軟件進行組間秩和檢驗。其余各數據均以X ± s表示，用SPSS19.0軟件進行方差分析，LSD法進行顯著性檢驗。
[0043] 2、實驗結果
[0044] 2.1對骨折家兔模型血清ALPase檢測結果。
[0045] 和空白對照組相比，陽性對照組血清ALPase含量升高(P〈0.05);與空白對照組相 比，鹽酸文拉法辛與化合物（I)組合物組血清ALPase含量顯著升高(P〈0.01);鹽酸文拉法辛 和化合物（I)組血清ALPase含量升高(P〈0.05)。結果見表1。
[0046] 2.2對骨折家兔模型骨生物力學測試結果
[0047] 14天時，和空白對照組相比，陽性對照組最大應力升高(P〈0.05)，最大載荷顯著升 高(P〈0.01);和空白對照組相比，鹽酸文拉法辛與化合物（I)組合物組最大應力和最大載荷 明顯升高(P〈〇.01);鹽酸文拉法辛組、化合物（I)組最大應力和最大載荷升高(P〈〇.05) ;31 天時，和空白對照組相比，鹽酸文拉法辛與化合物（I)組合物組與陽性對照組最大應力和最 大載荷明顯升高（p〈0.01);鹽酸文拉法辛組、化合物（I)組最大應力和最大載荷升高（p〈 0.05)。結果見表2和表3。
[0048] 表1對骨折家兔模型血ALPase的影響
[0049]
[0050]表2對骨折家兔模型骨生物力學的影響（14天）
[0051]
[0052]表3對骨折家兔模型骨生物力學的影響(31天）
[0053]
[0054] 上述結果表明，鹽酸文拉法辛、化合物（I)單獨作用時，具有促進骨折愈合的作用； 鹽酸文拉法辛和化合物（I)聯合作用時，促進骨折愈合的效果更為明顯，二者存在協同作 用，可以開發成促進骨折愈合的藥物。
[0055]上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種鹽酸文拉法辛的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸文拉法辛、如權利要求1所 述的化合物(I)和藥學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的鹽酸文拉法辛的藥物組合物，其特征在于:藥學上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的鹽酸文拉法辛的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將甘 草的干燥根莖粉碎，用85~95 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用 70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b) 中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比 為8:1、5:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備促進骨折愈合的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的鹽酸文拉法辛的藥物組合物在制備促進骨折愈合的藥物 中的應用。
【文檔編號】C07C45/78GK105906497SQ201610240959
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月18日
【發明人】潘立, 李義高, 李小彪, 趙陽
【申請人】鎮江高海生物藥業有限公司