苦參堿衍生物、其制備方法及其應用
【專利摘要】本發明公開了一種苦參堿衍生物、其制備方法及其應用。本發明公開的苦參堿衍生物具有良好的抗腫瘤、抗真菌感染和細菌感染的活性。本發明公開的苦參堿衍生物的制備方法，包括步驟，培養粘性放線菌，收集菌絲體；將菌絲體，懸浮于水中，配制成靜息細胞懸液，加入苦參堿，進行生物轉化；生物轉化完成后，對轉化產物進行分離純化。本發明的制備苦參堿衍生物的方法，反應條件溫和，方法簡單可靠，極大的減少了化學試劑的用量，避免了化學方法中的環境污染問題。
【專利說明】
苦參堿衍生物、其制備方法及其應用
技術領域
[0001] 本發明涉及醫藥技術領域，具體地涉及苦參堿衍生物及其用途。
【背景技術】
[0002] 苦參（Radix Sophorae flavescentis)為豆科苦參屬的植物。別名：苦骨、地槐、 水槐、菟槐、驕槐、野槐或白莖。生長于海拔1，500米的地區，多生在山坡、沙地、草坡、灌木 林中及田野附近。可用于清熱燥濕、殺蟲、利尿。也可用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下， 陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風；外治滴蟲性陰道炎。
[0003] 苦參堿（Matrine，MT)是由苦參的干燥根、植株、果實經乙醇等有機溶劑提取制成 的生物堿。是傳統中藥苦參的主要活性成分之一，結構中含有一個四元稠環的喹諾里西啶， 是一類結構特異的生物堿。苦參堿的結構如下式所示，
[0004]
[0005] 研究表明，苦參堿具有廣泛的藥理作用，如有抗腫瘤、鎮痛、抗心律失常、防止肝纖 維化、抗乙型肝炎病毒等，臨床上廣泛用于治療慢性肝炎和肝纖維化。作為一種天然產物藥 品，苦參堿有很多的優點，如：毒副作用小，安全有效，藥用資源來源廣等；此外，研究者對 苦參堿的抗腫瘤作用進行了較為廣泛而深入的研究，結果顯示，苦參堿具有廣譜抗腫瘤作 用，對正常細胞不產生破壞作用，且能升高白細胞數、提高機體免疫功能。但是雖然苦參堿 的應用比較廣泛，但是由于活性較低，在一定程度上又限制了它的開發利用。因此本領域技 術人員致力于對其結構進行改造，以期獲得一種生物活性較強的苦參堿衍生物。申請號為 201010188491. 9的中國專利申請，報道了一類苦參堿衍生物，其具有良好的抗腫瘤活性。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種苦參堿衍生物及其用途。
[0007] 本發明的第一方面提供了一種苦參堿衍生物：其結構式如式I所示：
[0008]
[0009] 本發明的另一方面提供了式I所示化合物的用途，用于制備治療腫瘤、真菌感染、 細菌感染的藥物。
[0010] 本發明的第另一方面提供了一種式I所示苦參堿的制備方法，包括步驟：
[0011] (1)菌體培養
[0012] 培養粘性放線菌（Actinomyces viscosus)，收集菌絲體；
[0013] ⑵生物轉化
[0014] 將步驟（1)獲得的菌絲體，懸浮于水中，配制成靜息細胞懸液，加入苦參堿，進行 生物轉化；
[0015] (3)分離純化
[0016] 生物轉化完成后，對轉化產物進行分離純化。
[0017] 優選地，步驟（1)中的粘性放線菌菌株為粘性放線菌ATCC27044菌株。
[0018] 優選地，步驟（2)中的靜息細胞懸液體積為步驟（1)中培養粘性放線菌發酵液體 積的 30% -50%。
[0019] 優選地，步驟（2)中，生物轉化的pH為5. 5-6. 5,更優選地pH為6. 0。
[0020] 優選地，步驟（2)中，每升靜息細胞懸液中加入苦參堿0. 2-0. 6g。
[0021] 優選地，步驟（2)中，轉化溫度為20-35°C，更優選地為27°C。
[0022] 優選地，步驟（3)中，采用大孔吸附樹脂進行分離純化。
[0023] 本發明的苦參堿衍生物具有良好的抗腫瘤、抗真菌感染和細菌感染的活性。而且 本發明的制備上述苦參堿衍生物的方法，反應條件溫和，方法簡單可靠，極大的減少了化學 試劑的用量，避免了化學方法中的環境污染問題。
[0024] 應理解，在本發明范圍內中，本發明的上述各技術特征和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0025] 圖1顯示了本發明實施例中各實驗組的摩爾轉化率。
[0026] 圖2顯示了標準品共進樣的HPLC檢測圖譜。
【具體實施方式】
[0027] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條 件或按照制造廠商所建議的條件。
[0028] 除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意 義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用于本發明方法中。文 中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。
[0029] 實施例1
[0030] 發酵粘性放線菌制備靜息細胞懸液
[0031] 菌株：粘性放線菌（ATCC27044)購自廣東省微生物菌種保藏中心。
[0032] 斜面培養基：酵母粉0.4%，蛋白胨0.7%，葡萄糖1.2%，瓊脂2. 5%，pH 7. 0-7. 2， 30°C培養4-5天。
[0033] 種子培養基：蔗糖2.5%，酵母粉0.3%，1(2冊040.1 %，1((：10.05%，]\%504.7!120 0· 05%，FeS04 · 7H20 0· 0002%，pH = 6. 8,3(TC 培養 1-2 天。
[0034] 發酵培養基：蔗糖2. 5 %，大豆柏粉1. 2 %，酵母粉0. 1 %，Κ2ΗΡ040. 1 %， MgS04 · 7Η200· 3 %，pH = 6. 8，30 °C 培養 2-3 天。
[0035] 配制2L發酵培養基，發酵培養完成后，離心獲得菌絲體。將菌絲體懸浮于水中，添 加0. 5%的氯化鈉，制成靜息細胞懸液，靜息細胞懸液終體積為1L。
[0036] 本發明實施例中苦參堿、式I所示的苦參堿衍生物標準品購自南京標科生物科技 有限公司。
[0037] 實施例2
[0038] 生物轉化
[0039] 按照下表配制生物轉化體系，并設置轉化條件，轉化時間均為5小時。
[0040] 表 1
[0041]
[0042]
[0043] 轉化完成后，離心，將離心液與甲醇1 : 1體積混合，HPLC定量檢測，并計算苦參 堿底物的摩爾轉化率；
[0044] HPLC檢測法的條件如下：
[0045] 流動相：0. 1%甲酸水溶液：乙腈=92 : 8 ;
[0046] 柱型號：C18,150X4. 60mm，3ym;
[0047] 柱溫：40°C ;
[0048] 流速：0· 7ml/min ;
[0049] 檢測波長：226nm。
[0050] 摩爾轉化率％ =苦參堿衍生物摩爾數/底物苦參堿摩爾數X 100%。
[0051] 實驗組A、B、C、D、E、F、G的摩爾轉化率如圖1所示，分別為76%、80%、86%、81%、 63%、92%、74%，從該結果可以看出，pH對轉化率的影響很大，最優化的轉化條件為：苦參 堿0. 4g/L，轉化體系pH6. 0,轉化溫度為27°C。
[0052] 轉化完成后，離心，將離心液過濾，濾液經大孔吸附樹脂純化，所得產品與標準品 按重量1 : 1混合制得檢測液，HPLC共進樣檢測，所得HPLC圖譜如圖2所示，標準品和本 發明所得產品的HPLC峰形完全重合，證明本發明所得產品，結構與標準品一致。經質譜檢 測，純化所得產品分子量大小與預期相符。
[0053] 在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨 引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可 以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范 圍。
【主權項】
1. 一種苦參堿衍生物，其特征在于，其結構式如式I所示：2. 如權利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，用于制備治療腫瘤、真菌感染、細 菌感染的藥物。3. -種權利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于，包括步驟： (1) 菌體培養 培養粘性放線菌（Actinomyces viscosus)，收集菌絲體； (2) 生物轉化 將步驟（1)獲得的菌絲體，懸浮于水中，配制成靜息細胞懸液，加入苦參堿，進行生物 轉化； (3) 分離純化 生物轉化完成后，對轉化產物進行分離純化。4. 如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（1)中的粘性放線菌菌株為粘性放線菌 ATCC27044 菌株。5. 如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟⑵中的靜息細胞懸液體積為步驟（1) 中培養粘性放線菌發酵液體積的30% -50%。6. 如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2)中，生物轉化的pH為5. 5-6. 5,更 優選地pH為6.0。7. 如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2)中，每升靜息細胞懸液中加入苦參 喊 0· 2-〇· 6g。8. 如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（2)中，轉化溫度為20-35°C。9. 如權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟⑵中，轉化溫度為27°C。10. 如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟（3)中，采用大孔吸附樹脂進行分離純 化。
【文檔編號】A61P35/00GK105884772SQ201410473178
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年9月6日
【發明人】楊鐘華
【申請人】瑞安市普羅生物科技有限公司