9-位取代的吡啶并[3,4-b]吲哚衍生物及其制備方法和作為SIRT蛋白抑制劑的用圖

9-位取代的吡啶并[3,4-b]吲哚衍生物及其制備方法和作為SIRT蛋白抑制劑的用圖
【專利摘要】本發明公開了一類9-位取代的吡啶并[3,4-b]吲哚衍生物，還公開了所述化合物的制備方法和作為SIRT5抑制劑的用途。本發明的化合物可以用于治療多種疾病，如腫瘤、神經退行性疾病、代謝性疾病等。
【專利說明】
9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物及其制備方法和作 為SIRT蛋白抑制劑的用途
技術領域
[0001] 本發明涉及9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物，還涉及其制備方法和作為 SIRT蛋白抑制劑的用途。
【背景技術】
[0002] 蛋白翻譯后修飾是蛋白功能調控的重要手段之一，其中賴氨酸殘基是一系列翻譯 后修飾過程的主要作用位點，較為常見的翻譯后修飾形式有酰基化，包括乙酰化、琥珀酰化 和丙二酰化等，以上幾種酰基化修飾形式均受到沉默信息調節因子2蛋白（Sirtuin，SIRT) 家族直接調控。Sirtuin (Silent information regulator 2family，SIRT)是一種煙酰胺腺 嘌呤二核苷酸（NAD)依賴的蛋白賴氨酸脫乙酰化酶及單個ADP-核糖基轉移酶，在多種組織 和器官中表達，如肝臟、心臟、腦和胰腺。基于氨基酸序列的相似性，哺乳動物體內SIRT蛋 白共分為7種亞型，即SIRT1-SIRT7。
[0003] 現有研究表明，SIRT在DNA損傷修復、細胞存活和凋亡、能量代謝等細胞進程方面 發揮著重要作用。因此，目前SIRT被認為是多種疾病，如腫瘤、神經退行性疾病、代謝性疾 病等藥物開發的重要靶點。
[0004] 其中，SIRT5作為多種疾病的治療靶點受到了高度關注。它恰好位于線粒體內能量 代謝的交叉點，可同時感知細胞內氧化還原狀態以及代謝需求。并且，除賴氨酸乙酰化外， SIRT5催化的蛋白去琥珀酰化也涉及到多種代謝過程中關鍵酶的翻譯后修飾，包括三羧酸 循環、氨基酸降解及脂肪酸代謝。近年來隨著對SIRT5蛋白功能的進一步研究發現，SIRT5 具有新穎的蛋白翻譯后修飾功能，參與了多種細胞進程，與多種疾病相關。
[0005] 但是，目前暫時沒有較好的SIRT5抑制劑類藥物的報道。

【發明內容】

[0006] 為解決上述問題，本發明主要提供了一類新型的SIRT抑制劑類藥物一一SIRT5蛋 白小分子抑制劑，它們均是9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物。
[0007] 具體地說，本發明提供了一種化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述 化合物的結構如式（I)所示：
[0008] 其中，
[0009] A表示無、
環上相鄰的一個-OH和一個-C00H取代、
I環上的一個 或多個取代基；所述取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、非甲基的烷基、烷氧基、酯基、-〇H、-C 00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2或-BOOH ;
[0010]
在任意位置并合的芳環或取代的芳環、五元芳香或非芳香雜環、 六元芳香或非芳香雜環、五元飽和環或六元飽和環；
[0012] 當B表示無時，L的一端與吡啶并[3, 4-b]吲哚結構中吡咯環上的氮原子相連，另
[0013]
在任意位置并合的芳環或取代的芳環、五元芳香或非芳香雜環、 六元芳香或非芳香雜環、五元飽和環或六元飽和環時，L的一端與啦啶并[3, 4-b]吲噪結構 中吡咯環上的氮原子相連，
環或者環B相連；
[0014] X表示碳或者氮；
[0015] &和R2分別獨立地表示無或是環上的一個或多個取代基，所述取代基選自鹵素、 三氟甲基、甲基、非甲基的烷基、硝基.
或氮取代胺酰基；
[0016] 其中，私和R4分別獨立地選自為H、C C6的脂肪烴基、C C 6的飽和環烷烴基、 的飽和雜環烴基或
；
[0017] 其中，η表示1、2、3或4 ;R5選自
或取代的芳香基。
[0018] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I a)所示：
[0019]
[0020] 其中，R!、R2、A和X均具有式（I )中所述的含義。
[0021] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I aa)、式（I ab)或式（I ac)所示：
[0022]
[0023] 其中，A表示無、或環上相鄰的一個-OH和一個-C00H取代、或環上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH。
[0024] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I b)所示：
[0025]
[0026] 其中，H A和X均具有式（I )中所述的含義。
[0027] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I ba)或式（I bb)所示：
[0028]
[0029] 其中，A表示無、或環上相鄰的一個-OH和一個-C00H取代、或環上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH。
[0030] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I c)所示：
[0031]
[0032] 其中，R^R^A和X均具有式（I )中所述的含義。
[0033] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I ca)所示：
[0034]
[0035] 其中，A表示無、或環上相鄰的一個-OH和一個-C00H取代、或環上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH。
[0036] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I d)所示：
[0037]
[0038] 其中，Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-C00H取代、或苯環上的一個或多個取 代基；所述取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、c2~C 6的烷基、C C 6的烷酯基、C C 6的 烷氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2或-Β00Η。
[0039] &、1?2均具有式（I )中所述的含義。
[0040] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I da)所示：
[0041 ]
[0042] 其中，Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-C00H取代、或苯環上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -B00H。
[0043] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I e)所示：
[0044]
[0045] 其中，Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-C00H取代，或苯環上的一個或多個取 代基；所述取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、c2~C 6的烷基、C C 6的烷酯基、C C 6的 烷氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2或-Β00Η ;
[0046] &、1?2均具有式（I )所述的含義。
[0047] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I ea)所示：
[0048]
[0049] 其中，Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-C00H取代、或苯環上的一個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH。
[0050] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構為下述結構之一：
[0053] 進一步地，所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構為下述結構之一：
[0054]
[0055] 本發明的化合物分別通過下述幾種路線合成：
[0058] 具體地，本發明還提供了前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0059]
[0060] 其中，&和R2分別獨立地表示無或環上的一個取代基，所述取代基選自甲基或甲 氧基；X選自碳或氮；A表示無或環上的一個取代基，所述取代基選自鹵素或(；~C 6的烷酯 基；
[0061] (1)以化合物lx和化合物2為原料，在堿性環境下反應制備得到化合物3 ;
[0062] (2)將化合物3x進行酯水解反應，制備得到化合物4x ;
[0063] (3)以化合物4x為原料，與化合物4a發生縮合反應，即得所述化合物或其中間體。
[0064] 或者，制備前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0065]
[0066] 其中，&和R2分別獨立地表示無或環上的一個取代基，所述取代基選自4-甲氧 基苯基-氨甲酰基；X選自碳或氮；A表示無或環上的一個取代基，所述取代基選自-C00H 或 _S03H ;
[0067] (1)以氨基保護的化合物6為原料，制備得到化合物7 ;
[0068] (2)將上步所得化合物7與化合物lx在堿性條件下反應，制備得到化合物8x ;
[0069] (3)將化合物8x脫去氨基保護基團，制備得到化合物9x ;
[0070] (4)以化合物9x為原料，在酸性條件下與化合物4b或其鈉鹽發生縮合反應，即得 所述化合物或其中間體。
[0071] 或者，制備前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0072]
[0073] 其中，A表示無或環上的一個-C00H取代；
[0074] (1)以氨基保護的化合物6為原料，制備得到化合物7 ;
[0075] (2)將上步所得化合物7與化合物lb在堿性條件下反應，制備得到化合物8b ;
[0076] (3)將化合物8b脫去氨基保護基團，制備得到化合物9b ;
[0077] (4)以化合物9b為原料，與化合物4c發生縮合反應，即得所述化合物或其中間體。
[0078] 或者，制備前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0079]
[0080] 其中，Y表示無或苯環上的一個(^~(：6的烷酯基；
[0081] (1)以氨基保護的化合物6為原料，制備得到化合物7 ;
[0082] (2)將上步所得化合物7與化合物lb在堿性條件下反應，制備得到化合物8b ;
[0083] (3)將化合物8b脫去氨基保護基團，制備得到化合物9b ;
[0084] (4)以化合物9b為原料，與化合物4d反應，即得所述化合物或其中間體。
[0085] 或者，制備前述化合物或其中間體的方法，包括以下步驟：
[0086]
[0087] Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-C00H取代、或苯環上的一個或多個取代基； 所述取代基選自鹵素、二氣甲基、甲基、C2~C6的烷基、C C6的燒酯基、C C6的烷氧基、 -OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-S02NH 2S -BOOH ;
[0088] (1)將化合物1與1，2-二溴乙烷在強堿催化下，制備得到化合物20 ;
[0089] (2)將上步所得化合物20與化合物4e在堿性條件下反應，即得所述化合物或其中 間體。
[0090] 本發明所述的鹵素包括但不限于氟、氯、溴、碘。
[0091] 本發明所述的烷酯基指的是具有1~6個碳原子的直鏈或支鏈的酯基，例 如-cooch3、-cooch2ch3、-cooch (ch3) 2、-cooch2ch2ch2ch3、-cooch (ch3) )2、-C00CH2CH2CH2CH2CH 3、-C00CH (CH3) CH2CH2CH3、-C00CH2CH (CH3) CH2CH3、-cooch2ch2ch (ch3) 2、-C00CH(CH3)CH(CH3)2和-cooch(ch 2ch3)2等。本發明所述c c6的烷氧基具有類似的含義， 即相應的酯基是氧原子。
[0092] 在本發明提供的制備方法中，所述中間體指的是目標化合物前一步的合成中間 體，例如對于化合物14b而言，化合物14a即是其合成中間體，通過本發明的制備方法合成 14a后，再進一步通過本領域常規的酯水解技術手段，即可由化合物14a制備得到。在本發 明具體的實施例中，類似的情況還包括化合物l〇g、化合物19b、化合物19a與化合物22a。 即對于這些化合物而言，上述方法制備得到是其中間體而不是其本身。其中，酯水解技術手 段包括在強堿性條件下水解的技術手段，例如通過化合物21制備化合物22a。
[0093] 本發明還提供了所述化合物、或其藥學上可接受的鹽、或其前藥、或其溶劑合物在 制備沉默信息調節因子2蛋白抑制劑類藥物上的用途。
[0094] 其中，所述沉默信息調節因子2蛋白抑制劑是SIRT5抑制劑。
[0095] 其中，所述藥物是治療或預防代謝性疾病、腫瘤或神經退行性急性病的藥物。所述 代謝性疾病包括糖尿病。
[0096] 本發明還提供了一種藥物組合物，它是以本發明提供的化合物、或其藥學上可接 受的鹽、或其前藥、或其溶劑合物為活性成分，加上藥學上可接受的輔料制備而成的制劑。
[0097] 其中，所述組合物是治療或預防代謝性疾病、腫瘤或神經退行性急性病的藥物。
[0098] 所述前藥是前述化合物的衍生物，它們自身可能具有較弱的活性或甚至沒有活 性，但是在給藥后，在生理條件下（例如通過代謝、溶劑分解或另外的方式）被轉化成相應 的生物活性形式。
[0099] 所述的制劑可以包括注射劑或口服制劑。
[0100] 本發明中的關鍵中間體和化合物進行分離和純化，所使用的方式是有機化學中常 用的分離和純化方法。
[0101] 本發明的一種或多種化合物可以彼此聯合使用，也可選擇將本發明的化合物與任 何其它的活性試劑結合使用，用于制備SIRT抑制劑。如果使用的是一組化合物，則可將這 些化合物同時、分別或有序地對受試對象進行給藥。
[0102] 本發明所述藥學上可接受的輔料，是指除活性成分以外包含在劑型中的物質。
[0103] 經試驗證明，本發明提供的9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物本法對SIRT5 具有優異的抑制作用，可以用于治療多種疾病，如腫瘤、神經退行性疾病、代謝性疾病等。
[0104] 同時，本發明提供的9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物，該結構是全新的化 學結構，即將吡啶并[3, 4-b]吲哚結構與另一環狀結構通過L所示的橋聯結構合并在同一 分子中。目前具有吡啶并[3, 4-b]吲哚結構的化合物主要用于治療認知障礙、精神病性精 神障礙、神經遞質-介導的障礙和/或神經元障礙等疾病（CN 102083830 A、CN 102724875 A)，從未見作為SIRT抑制類藥物用途的報道。因此，本發明也為吡啶并[3, 4-b]吲哚結構 提供了新的衍生化方向和用途。
[0105] 顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0106] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容 所實現的技術均屬于本發明的范圍。
【具體實施方式】
[0107] 實施例1本發明化合物關鍵中間體的制備
[0108] 1、化合物2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酸乙酯（3)的合成
[0109]
[0110] 將購買于百靈威CAS號為244-63-3 ;產品編號為230515的原料化合物1 (0. 50g， 2. 98mmol)和NaH(0. 24g，5. 96mmol)置于圓底燒瓶中，再用lOmLDMF將其溶解，常溫攪拌2h 后，將化合物2 (0. 49mL，4. 46mmol)滴加到上述反應液中，室溫反應5h，TLC檢測原料基本反 應完全。
[0111] 加水，用乙酸乙酯萃取3次，有機層經硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經硅膠柱層析 (CH2C1 2:CH30H = 60 :1)純化，得淡黃色固體化合物3(0. 40g，收率54% )。
[0112] 化合物 3 JH NMR(400MHz, DMS0-d6) : δ 8· 85 (s, 1H)，8· 51 (d, J = 9. 6Hz, 1H) , 8. 17 (d, J = 7. 6Hz, 1H) , 7. 99 (d, J = 5. 2Hz, 1H) , 7. 63 (t, J = 7. 6Hz, 1H)，7. 42 (d, J = 8. 4Hz, 1H)。
[0113] 2、化合物2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酸（4)、的合成
[0114]
[0115] 用 5mL 水和 5mL 乙醇將化合物 3(0. 20g，0. 79mmol)和 Na0H(0. 10g，2. 37mmol)溶 解，升溫至l〇〇°C反應2h，TLC檢測原料反應完全。
[0116] 之后將反應液冷卻至室溫，減壓蒸餾除去溶劑，加水，用稀HC1將pH調至6~7時 有白色固體析出，過濾，真空干燥箱干燥得白色固體化合物4(0. 16g，收率90% )。
[0117] 3、化合物（1_(叔-丁氧羰基）氨基）乙醇-(4-甲苯磺酸）酯（7)的合成
[0118]
[0119] 將購買于瑞歐克科技CAS號為26690-80-2 ;產品編號為R0K11845-2的原料化合 物 6(5. 00g，31. 06mmol)和 TsCl(ll. 88g，62. 12mmol)溶解在 20mL 吡啶中，室溫攪拌反應 12h，TLC檢測反應完全。
[0120] 減壓蒸餾除去一部分吡啶，加水，用乙酸乙酯萃取3次，有機層經硫酸鎂干燥、濃 縮后粗品經硅膠柱層析（石油醚：乙酸乙酯=3 :1)純化得白色固體化合物7(4. 89g，收率 50% ) 〇
[0121] 4、化合物叔-丁基（2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基甲酸酯（8) 的合成
[0122]
[0123] 將化合物 1(0. 50g，2. 98mmol)和 NaH(0. 24g，5. 96mmol)置于圓底燒瓶中，再用 lOmLDMF將其溶解，45°C攪拌2h后，再將化合物6 (2. 81g，8. 94mmol)加入上述反應液中，室 溫攪拌16h，TLC檢測原料基本反應完全。
[0124] 加水，用乙酸乙酯萃取3次，有機層經硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經硅膠柱層析 (CH2C1 2:CH30H = 30 :1)純化得淡黃色固體化合物8 (0· 74g，收率77% )。
[0125] 化合物 8 JH NMR(400MHz, DMS0-d6) : δ 8. 92 (s, 1H)，8. 49 (d, J = 5. 2Hz, 1H) , 8. 17 (d, J = 8. 0Hz, 1H) , 7. 98 (d, J = 5. 2Hz, 1H) , 7. 62 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 55 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 33 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 4. 65 (s, br, 1H), 4. 59 (t, J = 5. 6Hz, 2H), 3. 62 (q, J = 6. 0Hz, 2H), 1. 45 (s, 9H) ppm.
[0126] 5、化合物2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基-1-氨基（9)的合成
[0127] 先用10mL的012(：12將化合物8(0. 21g，0. 66mmol)溶解，在室溫攪拌下加入1. 60mL 三氟乙酸，反應5h后，TLC檢測原料反應完全。
[0128] 減壓蒸餾除去溶劑，用飽和NaHC03調至PH為8,乙酸乙酯萃取3次，有機層經 硫酸鎂干燥、濃縮后得淡黃色固體化合物9(0. 12g，收率86% )。實施例2化合物N-芐 基-2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰胺（5a)的合成
[0129]
[0130] 先用2mLCH2CU#化合物4(0. 05g，0. 22mmol)溶解，在0°C攪拌下逐步加入芐 胺（0.05mL，0.44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDCI，0.05g， 0. 27mmol)、1-羥基苯并三氮唑（H0BT，0. 04g，0. 27mmol)和N、N-二異丙基乙胺 (DIEA，0. 09mL，0. 44mmol)，加畢，升溫至室溫攪拌反應12h，TLC檢測顯示反應完全。
[0131] 加水，用二氯甲烷萃取三次，有機層經硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經硅膠柱層析 (CH2C1 2:CH30H = 60 :1)純化得白色固體化合物5a(0. 04g，收率58% )。
[0132] 化合物 5a :純度：HPLC 測試為 98 % NMR(400MHz, CDC13) : δ 8. 91 (s, 1H) ,8. 55(d, J = 8. 4Hz, 1H), 8. 19(d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 99 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 67 (t, J =7. 6Hz, 1H), 7. 49(d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 40 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 70-7. 08 (m, 5H) ,6.04(s，br，lH)，5.11(s，2H)，4.44(d，J = 4.0Hz，2H)ppm.13C 匪R(100MHz，CDC13) :δ 167. 3, 141. 1, 140. 3, 137. 3, 136. 5, 131. 7, 129. 2, 128. 7, 127. 6, 127. 3, 122. 2, 121. 7, 12 1. 1, 114. 8, 109. 4, 47. 2, 43. 4 ；LC-MSm/z: 316. 13[M+H] 〇
[0133] 實施例3化合物N-(吡啶-3-亞甲基）-2- (9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙 酰胺（5b)的合成
[0134]
[0135] 先用2mLCH2CU#化合物4 (0. 03g，0. 13mmol)溶解，在0 °C攪拌下逐步加入 P比啶_3_甲胺（0. 03g，0. 26mmol)、1_ (3_二甲氛基丙基）_3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI，0. 03g，0. 16mmol)、l-羥基苯并三氮唑（ΗΟΒΤ,Ο. 02g，0. 16mmol)和 N、N-二異丙基乙 胺（DIEA，0. 06mL，0. 26mmol)，加畢，升溫至室溫后攪拌反應12h，TLC檢測反應完全。
[0136] 加水，用二氯甲烷萃取三次，有機層經硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經硅膠柱層析 (CH2C1 2:CH30H = 10 :1)純化得白色固體化合物5b(0. 03g，收率71% )。
[0137] 化合物 5b :純度：HPLC 測試為 98% JH NMR(400MHz, CDC13) : δ 8. 80 (s, 1H)，8. 50 ( d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 39 (d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 28 (s, 1H), 8. 14 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 92 (d, J =5. 2Hz, 1H), 7. 65 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 46-7. 43 (m, 2H), 7. 38 (t, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 16 (q, J =4. 8Hz, J = 2. 8Hz, 1H), 6. 42 (s, br, 1H), 5. 10 (s, 2H), 4. 41 (d, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100MHz, CDC13) : δ 167. 6, 148. 8, 148. 7, 141. 1，140. 1，136. 4, 135. 3, 133. 3, 131. 5, 129. 3， 123. 5, 122. 2, 121. 6, 121. 1, 114. 7, 109. 3, 47. 1, 40. 8. LC-MS m/z :317. 12[M+H] 〇
[0138] 實施例4化合物N-(4-氯苯基）-2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰胺（5c) 的合成
[0139]
[0140] 先用2mLCH2CU#化合物4 (0. 03g，0. 13mmol)溶解，在0 °C攪拌下逐步加入 (4-氯苯）甲胺（0.04g，0.26mmol)、l-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI，0. 03g，0. 16mmol)、l-羥基苯并三氮唑（ΗΟΒΤ,Ο. 02g，0. 16mmol)和 N、N-二異丙基乙 胺（DIEA，0. 06mL，0. 26mmol)，加畢，升溫至室溫攪拌反應12h，TLC檢測反應完全。
[0141] 加水，用二氯甲烷萃取三次，有機層經硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經硅膠柱層析 (CH2C12:CH30H = 40 :1)純化得白色固體化合物5c(0. 03g，收率65% )。
[0142] 化合物 5b :純度：HPLC 測試為98%;1!1匪1?(4001抱，0)(：13):5 8.70(8，1!1)，8· 34-8. 30 (m, 2H), 8. 19 (s, 1H), 8. 08 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 83 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 63 (t, J =7. 6Hz, 1H), 7. 44 (t, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 35 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 13 (q, J = 4. 8Hz, J = 2. 8Hz, 1H), 6. 84 (t, J = 6. 0Hz, 1H), 5. 02 (s, 2H), 4. 37 (d, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100M Hz, CDC13) : δ 167. 3, 141. 1，140. 3, 136. 4, 135. 6, 133. 4, 131. 6, 129. 3, 129. 2, 128. 8, 128. 7 ,122. 3, 121. 7, 121. 2, 114. 8, 109. 4, 47. 2, 42. 6. LC-MS m/z :350. 10[M+H] 〇
[0143] 實施例5化合物3-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰氨基）甲基）苯 甲酸乙酯（5d)的合成
[0144]
[0145] 先用3mLCH2C1^3-胺甲基-苯甲酸-乙酯（0. 04g，0. 22mmol)溶解，在0°C攪 拌下逐步加入化合物4 (0. 10g，0. 44mmol)、1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽 (EDCI, 0· 05g，0. 27mmol)、1_ 羥基苯并三氮唑（Η0ΒΤ，0· 04g，0. 27mmol)和 N、N-二異丙基乙 胺（DIEA，0. 09mL，0. 44mmol)，加畢，升溫至室溫，攪拌反應12h，TLC檢測反應完全。
[0146] 加水，用二氯甲烷萃取三次，有機層經干燥、濃縮后粗品經柱層析（CH2C1 2:CH30H = 30 :1)純化得白色固體5d(0. 05g，收率63%)。結構經? NMR確認，純度：HPLC測試為98%。
[0147] 實施例6化合物3-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰氨基）甲基）苯 甲酸（5e)的合成
[0148]
[0149] 用 2mL 水和 2mL 乙醇將化合物 5d(0. 05g，0. 22mmol)和 Na0H(0. 03g，0. 67mmol)溶 解，升溫至l〇〇°C回流反應2h，TLC檢測原料反應完全。
[0150] 將反應液冷卻至室溫，減壓蒸餾出去溶劑后，加水，用稀HC1將pH調至6~7時有 白色固體析出，過濾，真空干燥箱干燥得白色粉末5e(0. 04g，收率85% )。
[0151] 化合物 5e :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 9. 23 (s, 1H)， 8. 94(t,J = 5. 6Hz, 1H), 8. 40(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 28 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 8. 14 (d, J =5. 2Hz, 1H), 7. 91 (s, 1H), 7. 84 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 66-7. 59 (m, 2H), 7. 52 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 45(t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 31 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 5. 26 (s, 2H), 4. 40 (d, J = 6. 0Hz, 2H)ppm. 13C NMR(100MHz, DMSO) : δ 167. 8, 167. 6, 144. 8, 140. 1, 139. 2, 137. 3, 133. 3, 132. 2, 131. 5, 129. 1, 128. 8, 128. 6, 128. 4, 128. 0, 122. 3, 121. 1, 120. 2, 115. 0, 110. 6, 46. 2, 42. 6. LC-MS m/z:358. 12[M-H]〇
[0152] 實施例7化合物4-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙酰氨基）甲基）苯 甲酸5f的合成
[0153]
[0154] 按照實施例5的方法合成化合物5g，區別在于以4-胺甲基-苯甲酸-乙酯替代 3_胺甲基-苯甲酸-乙酯，得化合物5g(0. 06g，收率86% )。按照實施6的方法合成化合 物5f，區別在于以化合物5g替代化合物5d。得化合物5f (0. 05g，收率88% )。
[0155] 化合物 5f :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 12. 87(s, b r, 1H), 9. 08(s, 1H), 8. 96(t, J = 6. 0Hz, 1H), 8. 44 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 32 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 24 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 89 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 70-7. 63 (m, 2H), 7. 39 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 34 (t, J = 6. 8Hz, 1H), 5. 30 (s, 2H), 4. 40 (d, J = 5. 6Hz, 2H) ppm. 13C NMR (100M Hz, DMSO) : δ 167. 8, 167. 6, 144. 7, 142. 1, 138. 2, 137. 2, 132. 5, 131. 7, 129. 8, 129. 2, 128. 7, 127. 7, 122. 6, 121. 0, 120. 5, 115. 3, 110. 8, 46. 3, 42. 6. LC-MS m/z :358. 12 [M-H] 〇
[0156] 實施例8化合物N-芐基-2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基-1-氨基 (10a)的合成
[0157]
[0158] 先用 8mLCH2CU#化合物 9(0. 03g，0. 14mmol)、化合物苯甲醛（0. 04mL，0. 42mmol) 和二氫吡啶酯（0.05g，0. 20mmol)溶解，在室溫攪拌下加入催化量的4A分子篩和三氟乙 酸（0. 003mL，0. 03mmol)加畢升溫至40°C反應10h，TLC檢測反應完全。過濾，濾液減壓蒸 餾后經硅膠柱層析（CH2C1 2:CH30H = 50 :1)純化得白色固體目標化合物10a(0. 012g，收率 30% ) 〇
[0159] 化合物 10a :純度：HPLC 測試為 98 % 4 NMR (400MHz, DMSO) : δ 9. 08 (s, 1H) ,8. 37(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 28(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 27 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 13 (d, J =5. 2Hz, 1H), 7. 90(s, 1H), 7. 78(d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 74(d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 42 (d, J =7. 6Hz, 1H), 7. 35 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 28 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 4. 60 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 3. 77 (s, 2H), 2. 97 (t, J = 6. 4Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 302. 16 [M+H] 〇
[0160] 實施例9化合物3-( ((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基）甲基） 苯甲酸（10b)的合成
[0161]
[0162] 先用 4mL 的 012(：12將化合物 9(0. 03g，0. 14mmol)、3-甲酰基-苯甲酸（0. 03g， 0. 21mmol)和二氫吡啶酯（0.05g，0. 20mmol)溶解，在室溫攪拌下加入催化量的4A分子篩 和三氟乙酸（0. 003mL，0. 03mmol)加畢，升溫至40°C反應10h，TLC檢測反應完全。過濾，濾 液經減壓蒸餾后經硅膠柱層析（CH2C1 2:CH30H = 10 :1)純化得白色固體10b(0. 026g，收率 54% ) 〇
[0163] 化合物 10b :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 9. 08 (s, 1H) ,8. 37(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 28(d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 27 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 13 (d, J =5. 2Hz, 1H), 7. 90(s, 1H), 7. 78(d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 74(d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 42 (d, J =7. 6Hz, 1H), 7. 35 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 28 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 4. 60 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 3. 77 (s, 2H), 2. 97 (t, J = 6. 4Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 344. 15 [M-H] 〇
[0164] 實施例10化合物4-( ((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基）甲基） 苯甲酸（10c)的合成
[0165]
[0166] 按照實施例9的方法合成化合物10c，區別在于以4-甲酰基-苯甲酸替代3-甲酰 基-苯甲酸。得化合物10c(0.036g，收率58% )。
[0167] 化合物 10c :純度：HPLC 測試為 99 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 9. 11 (s, 1H) ,8. 45(d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 32(d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 21 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 98 (d, J =8. 4Hz, 2H), 7. 77 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 67 (t, J = 7. 2Hz, 1H), 7. 57 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 35(t, J = 7. 2Hz, 1H), 4. 80 (t, J = 6. 8Hz, 2H), 4. 26 (s, 2H), 3. 45 (t, J = 6. 4Hz, 2H)ppm. 13C NMR(100MHz, DMSO) : δ 167. 8, 167. 6, 144. 7, 142. 1, 138. 2, 137. 2, 132. 5 ,131. 7, 129. 8, 129. 2, 128. 7, 127. 7, 122. 6, 121. 0, 120. 5, 115. 3, 110. 8, 46. 3, 42. 6. LC-MS m/z:344. 15[M-H]〇
[0168] 實施例11化合物N-(2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）苯甲酰胺（lOd) 的合成
[0169]
[0170] 先用2mLCH2CU#化合物9(0. 03g，0. 14mmol)溶解，在0°C攪拌下逐步加入苯 甲酸（0.038,0.28臟〇1)、1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽伍0(：1，0.03 8， 0. 17mmol)、1-羥基苯并三氮唑（Η0ΒΤ，0. 025g，0. 17mmol)和N、N-二異丙基乙胺 (DIEA，0. 06mL，0. 28mmol)，加畢，升溫至室溫反應12h，TLC檢測反應完全。加水，用二氯甲 烷萃取三次，有機層經硫酸鎂干燥、濃縮后經硅膠柱層析（CH 2C12:CH30H = 15 :1)純化得淡 黃色固體10d(0. 03g，收率68% )。
[0171] 化合物 10d :純度：HPLC 測試為 99 % NMR(400MHz, CDC13) : δ 8. 93 (s, 1H)， 8.38(d，J = 5·2Ηζ，1Η) ,8.16 (d，J = 7·6Ηζ，1Η) ,7.96 (d，J = 5·2Ηζ，1Η) ,7.62-7. 56 (m ，4H)，7.47(t，J = 7·2Ηζ，1Η) ,7.38-7. 30 (m，3H) ,6.69 (t，J = 5·2Ηζ，1Η) ,4.72 (t，J = 6. 0Hz, 2H), 3. 95 (q, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 316. 14 [M+H] 〇
[0172] 實施例12化合物3-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨甲酰基）苯 甲酸（l〇e)的合成
[0173]
[0174] 先用2mLCH2Cl^#化合物9(0. 03g，0. 14mmol)溶解，在0°C攪拌下逐步加入間苯 二甲酸（0.07g，0.41mmol)、1-(3_二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDCI，0.03g， 0· 17mmol)、1-羥基苯并三氮唑（1-羥基苯并三氮唑（Η0ΒΤ，0· 025g，0· 17mmol)和N、N-二 異丙基乙胺（N、N-二異丙基乙胺（DIEA，0. 06mL，0. 28mmol)，加畢，升溫至室溫反應12h，TLC 檢測反應完全。加水，用二氯甲烷萃取三次，有機層經硫酸鎂干燥、濃縮后粗品經硅膠柱層 析（CH2C1 2:CH30H = 5 :1)純化得淡黃色固體10e(0. 02g，收率40% )。
[0175] 化合物 10e :純度：HPLC 測試為 99 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 9. 03 (s, 1H)， 8. 84(t, J = 6. 0Hz, 1H), 8. 35(d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 26 (d, J = 4. 4Hz, 2H), 8. 12 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 03 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 85 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 7. 72 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 58- 7. 50 (m, 2H), 7. 26 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 4. 71 (t, J = 6. 0Hz, 2H), 3. 74 (q, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z:358. 13[M-H]〇
[0176] 實施例13化合物4-((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨甲酰基）苯 甲酸（l〇f)的合成
[0177]
[0178] 按照實施例12的方法合成化合物10f，區別在于以對苯二甲酸替代間苯二甲酸。 得化合物l〇f (〇· 〇3g，收率31% )。
[0179] 化合物 10f :純度：HPLC 測試為 99 % JH NMR(400MHz，DMS0) : δ 12. 98(s， br, 1H), 9. 15(s, 1H), 8. 81 (t, J = 5. 6Hz, 1H), 8. 42 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 29 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 92 (d, J = 6. 8Hz, 2H), 7. 79 (d, J = 4. 4Hz, 1H), 7. 69-7. 61 (m, 3H), 7. 31 (t, J = 7. 6Hz，1H)，4· 75 (t，J = 6. 4Hz，2H)，3· 76 (q，J = 6· OHz，2H) ppm. LC-MS m/z: 358. 13 [M-H] 〇
[0180] 實施例14化合物2- ((2- (9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基）喹 啉-6-羧酸（10h)的合成
[0181]
[0182] 具體的合成步驟如上述路線所示，中間體化合物9 (0. 042g, 0. 2mmol)與上海書亞 醫藥科技有限公司購買的CAS號為849996-80-1 ;產品編號為B167393的原料化合物2-氯 喹啉-6-羧酸（0. 047g, 0. 2mmol)在叔丁醇鉀催化下于DMF做溶劑在60°C下反應8h后得化 合物10g(0. 041g，收率68% );接著按照實施例6中的方法，水解得化合物10g(0. 03g，收 率 84% )。
[0183] 化合物 10h :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz，DMS0) : δ 13. 01(s， br, 1H), 9. 18(s, 1H), 8. 85(t, J = 5. 6Hz, 2H), 8. 42 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 30 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 96 (d, J = 6. 8Hz, 2H), 7. 82 (d, J = 4. 4Hz, 1H), 7. 69-7. 61 (m, 3H), 7. 30 (t, J = 7. 6Hz, 1H)，4. 76 (t, J = 6. 4Hz, 2H)，3. 75 (q, J = 6. 0Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 381. 13 [M-H] 〇
[0184] 實施例15化合物4-( ((2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）氨基）甲基） 苯磺酸（l〇i)的合成
[0185]
[0186] 按照實施例10的方法合成化合物10i，區別在于以3-甲酰基-苯磺酸鈉替代3-甲 酰基-苯甲酸。得化合物l〇i (0. 〇28g，收率48% )。
[0187] 化合物 10i :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0-d6) : δ 9. 08 (s, 1H ),8. 46(d, J = 5. 6Hz, 1H), 8. 28(d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 07 (d, J = 4. 8Hz, 1H), 7. 98 (d, J =8. 4Hz, 2H), 7. 78 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 66 (t, J = 7. 2Hz, 1H), 7. 57 (d, J = 8. 0Hz, 2H), 7. 35(t, J = 7. 2Hz, 1H), 4. 80 (t, J = 6. 8Hz, 2H), 4. 26 (s, 2H), 3. 45 (t, J = 6. 4Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 380. 11 [M-H]。
[0188] 實施例16化合物3-((2-(7-甲氧基-1-甲基-9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基） 乙酰氨基）甲基）苯甲酸（14b)的合成
[0189]
[0190] 按照實施例1中類似化合物4的方法制備化合物13。
[0191] 按照實施例5的方法合成化合物14a，區別在于用化合物13替代化合物4。得化 合物14a(0. 032g，收率60% )。將獲得的化合物14a按照實施例6的方法水解后獲得化合 物14b，區別在于化合物14a替代化合物5d。得化合物14b (0. 026g，收率92% )。
[0192] 化合物 14b :純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0_d6) : δ 1 2. 84 (s, br, 1Η), 8. 98 (t, J = 5. 6Hz, 1H), 8. 51 (d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 22 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 8. 14 (d, J = 5. 2Hz, 1H) ,7.91 (s, 1H), 7. 86 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 66-7. 5 9(m, 2H), 7. 51 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 16 (t, J = 7. 6Hz, 1H), 5. 26 (s, 2H), 4. 40 (d, J = 6. 0Hz, 2H), 3. 89 (s, 3H), 2. 87 (s, 3H) ppm. LC-MSm/z: 402. 15 [M-H] 〇
[0193] 實施例17化合物3-(((2-(3-((4-甲氧基苯基）氨甲酰基）-9H-吡啶并[3, 4-b] 吲哚-9-基）乙基）氨基）甲基）苯甲酸（19b)的合成
[0194]
[0195] 按照實施例1中類似化合物4的方法制備化合物18a。
[0196] 按照實施例5的方法合成化合物19a，區別在于化合物18a替代化合物4,以甲氧 基苯胺替代3-胺甲基-苯甲酸-乙酯。得化合物19a(0.054g，收率64%)。將獲得的化 合物19a按照實施例6的方法水解后獲得化合物19b，區別在于化合物19a替代化合物5d。 得化合物19b (0. 042g，收率73% )。
[0197] 化合物 19b:純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0-d6) : δ 12. 84(s， br, 1H), 10. 01 (s, 1H), 9. 10 (s, 1H), 8. 37 (s, 1H), 8. 26 (d, J = 4. 8Hz, 1H), 8. 22 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 13 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 7. 90-7. 74 (m, 3H), 7. 42 (d, J = 7. 6Hz, 1H), 7. 35 (t, J = 7. 6Hz, 2H), 7. 26-7. 17 (m, 4H), 4. 61 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 3. 89 (s, 3H), 3. 78 (s, 2H), 2. 96 (t, J =6. 4Hz, 2H) ppm. LC-MS m/z: 493. 20 [M-H] 〇
[0198] 實施例18化合物2-(2-(9H-吡啶并[3, 4-b]吲哚-9-基）乙基）-1, 2, 3, 4-四氫 異喹啉-6-甲酸（22a)的合成
[0199]
[0200] 將購買于上海書亞醫藥科技有限公司CAS號為185057-00-5 ;產品編號為B27871 的 1,2,3,4-四氫異喹啉-6-羧酸甲酯（0. 038g，0. 2mmol)和 NaH(0. 018g，0. 4mmol)在 3mL 的DMF做溶劑的條件下，活化lh，接著加入合成的中間體化合物20(0. 054g，0. 2mmol)后升 高溫度至80°C繼續反應，反應約12h，經TLC檢測，反應完畢后加入100mL冰水，調節PH為 7后，經乙酸乙酯萃取3次，有機層經硫酸鎂干燥后，經硅膠柱層析（CH 2C12:CH30H = 50 :1) 純化后得化合物21 (0. 035g.收率46% )。將獲得的化合物21按照實施例6的方法水解后 獲得化合物22,區別在于化合物21替代化合物5d。得化合物22 (0. 028g，收率83% )。
[0201] 化合物 22:純度：HPLC 測試為 98 % JH NMR(400MHz, DMS0) : δ 12. 87, 9. 10 (s, 1Η), 8. 39 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 27 (d, J = 8. 0Hz, 1H), 8. 24 (d, J = 5. 2Hz, 1H), 8. 00 (d, J =8. 4Hz, 2H), 7. 77 (d, J = 8. 4Hz, 1H), 7. 35 (t, J = 7. 2Hz, 1H), 4. 80 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 4. 68(t, J = 6. 4Hz, 2H), 4. 28 (t, J = 6. 4Hz, 2H), 4. 26 (s, 2H), 3. 45 (t, J = 6. 4Hz, 2H)ppm. LC-MS m/z:370. 16[M-H]〇
[0202] 實施例19本發明化合物對體外SIRT5蛋白的抑制活性
[0203] 具體的測試方法如下：
[0204] 1)實驗材料：
[0205] 購買于圣路易斯，密蘇里州Sigma-Aldrich公司的煙酰胺（產品編號：72340); BPS公司的組蛋白去乙酰化酶（HDAC)緩沖液（產品編號：50031) ;BPS公司的SIRT顯影劑 (產品編號：50089) ;BPS公司的Sirtuin 5蛋白底物（產品編號：50126)以及受試化合物。
[0206] 2)實驗方法：
[0207] 首先，制備反應母液：于每個測試孔中加入5 μ 1牛血清白蛋白（BSA, lmg/ mL)，0. 5mM煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+，lmg/mL)，14. 5 μ LSIRT緩沖溶液和5 μ 1稀釋的 SIRT底物（100 μΜ/L)。然后，將所有受試化合物及陽性對照化合物煙酰胺溶解于100%的 DMS0中配制成10mM/L的溶液后用含有10 % DMS0的HDAC緩沖溶液分別將其稀釋成100 μ M/ L、30 μ M/L和10 μ M/L。隨后，取配制好化合物溶液5 μ 1，加入不同的測試孔中；再向每個 測試孔中加入20 μ 1SIRT5蛋白后于37°C下培養30分鐘。接著，每孔中加入50 μ 1的2χ SIRT顯影劑于常溫繼續培養15min。最后使用Biotek Synergy酶標儀在激發光為380ηΜ和 440ηΜ發射光波長處測試以上反應液的發光強度從而根據"抑制活性％ = (F-Fb) AFt-Fb) xlOO% "確定化合物對SIRT5的抑制活性，其中F為含有受試化合物的熒光強度，Fb為不含 SIRT蛋白的熒光強度；Ft為不含測受試化合物的熒光強度。
[0208] 3)實驗結果：
[0209] 通過以上實驗方法，測試了本發明中的化合物針對SIRT5的抑制活性。具體部分 化合物在1〇μΜ、30μΜ、100μΜ濃度下的抑制活性見表1.其中A表示抑制率大于85%、B 表示抑制率為大于70%、C表示抑制率為大于55%，D表示抑制率為大于40% ;E表示抑制 率為大于20% ;NA表示無活性；-表示未測試。
[0210] 表1.受試化合物對SIRT5的抑制活性
[0211]
[0212] 綜上所述，本發明提供的9-位取代的吡啶并[3, 4-b]吲哚衍生物，對SIRT5具有 優異的抑制作用，可以用于治療多種疾病，如腫瘤、神經退行性疾病、代謝性疾病等。
【主權項】
1. 一種化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結構如式（I )所 示：其中， A表示無、或：環上相鄰的一個-OH和一個-COOH取代、或?環上的一個或多 個取代基；所述取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、非甲基的烷基、烷氧基、酯基、-OH、_C00H、 -C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH2S -BOOH ; B表示無或胃￡任意位置并合的芳環或取代的芳環、五元芳香或非芳香雜環、六元 芳香或非芳香雜環、五元飽和環或六元飽和環； L表當B表示無時，L的一端與吡啶并[3, 4-b]吲哚結構中吡咯環上的氮原子相連，另一端 」環相連； 當B表示±E任意位置并合的芳環或取代的芳環、五元芳香或非芳香雜環、六元 芳香或非芳香雜環、五元飽和環或六元飽和環時，L的一端與P比啶并[3, 4-b] Π 引噪結構中P比 咯環上的氮原子相連，另一端與環或者環B相連； X表示碳或者氮；RJPR2分別獨立地表示無或是環上的一個或多個取代基，所述取代基選自鹵素、三氟 甲基、甲基、非甲基的烷基、硝基.或氮取代胺酰基； 其中，RjPR4分別獨立地選自H、（^~C6的脂肪烴基、（^~C6的飽和環烷烴基、（^~ C6的飽和雜環烴基或其中，η表示1、2、3或4 ;R5選自：取代的芳香基。2. 權利要求1所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I a)所示：其中，札、R2、A和X均具有權利要求1中所述的含義。3. 權利要求2所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I aa)、式（I ab)或式（I ac)所示：其中，A表示無、或環上相鄰的一個-OH和一個-COOH取代、或環上的一個取代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。4. 權利要求1所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I b)所示：其中，Ri、R2、A和X均具有權利要求1中所述的含義。5. 權利要求4所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I ba)或式（I bb)所示：其中，A表示無、坱外上《郊的一個-UH和一個-⑶UH耿代、坱外上的一個耿代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。6. 權利要求1所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I c)所示：其中，札、R2、A和X均具有權利要求1中所述的含義。7. 權利要求6所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I ca)所示：其中，A表示無、或環上相鄰的一個-OH和一個-COOH取代、或環上的一個取代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。8. 權利要求1所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I d)所示：其中，Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-COOH取代、或苯環上的一個或多個取代 基；所述取代基選自??素、二氣甲基、甲基、C2~C 6的烷基、C廣C 6的燒酯基、C廣C 6的燒 氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S0 3H、-SO2NH2或-BOOH ; &、私均具有權利要求1中所述的含義。9. 權利要求8所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I da)所示： f其中，Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-COOH取代、或苯環上的一個取代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。10. 權利要求1所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的結 構如式（I e)所示：其中，Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-COOH取代，或苯環上的一個或多個取代 基；所述取代基選自??素、二氣甲基、甲基、C2~C 6的烷基、C廣C 6的燒酯基、C廣C 6的燒 氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S0 3H、-SO2NH2或-BOOH ; &、私均具有權利要求1中所述的含義。11. 權利要求10所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述化合物的 結構如式（I ea)所*其中，Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-COOH取代、或苯環上的一個取代基；所述 取代基選自鹵素、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基J1-C6的烷酯基、C ^C6的烷氧基、-OH 、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO2NH 2或-Β00Η。12. 權利要求1-11任一項所述的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，所述 化合物的結構為下述結構之一：13. 制備權利要求1-12任一項所述化合物或其中間體的方法，其特征在于：包括以下 步驟：其中，&和R 2分別獨立地表示無或環上的一個取代基，所述取代基選自甲基或甲氧基； X選自碳或氮；A表示無或環上的一個取代基，所述取代基選自鹵素或(；~C 6的烷酯基； (1) 以化合物Ix和化合物2為原料，在堿性環境下反應制備得到化合物3 ; (2) 將化合物3x進行酯水解反應，制備得到化合物4x ; (3) 以化合物4x為原料，與化合物4a發生縮合反應，即得所述化合物或其中間體； 或者，包括以下步驟：其中，&和R2分別獨立地表示無或環上的一個取代基，所述取代基選自4-甲氧基 苯基-氨甲酰基；X選自碳或氮；A表示無或環上的一個取代基，所述取代基選自-COOH 或-SO3H ; (1) 以氨基保護的化合物6為原料，制備得到化合物7 ; (2) 將上步所得化合物7與化合物Ix在堿性條件下反應，制備得到化合物Sx ; (3) 將化合物8x脫去氨基保護基團，制備得到化合物9x ; (4) 以化合物9x為原料，在酸性條件下與化合物4b或其鈉鹽發生縮合反應，即得所述 化合物或其中間體； 或者，包括以下步驟：其中，A表示無或環上的一個-COOH取代； (1) 以氨基保護的化合物6為原料，制備得到化合物7 ; (2) 將上步所得化合物7與化合物Ib在堿性條件下反應，制備得到化合物8b ; (3) 將化合物8b脫去氨基保護基團，制備得到化合物9b ; (4) 以化合物9b為原料，與化合物4c發生縮合反應，即得所述化合物或其中間體； 或者，包括以下步驟：其中，Y表示無或苯環上的一個Ci~C 6的烷酯基； (1) 以氨基保護的化合物6為原料，制備得到化合物7 ; (2) 將上步所得化合物7與化合物Ib在堿性條件下反應，制備得到化合物8b ; (3) 將化合物8b脫去氨基保護基團，制備得到化合物9b ; (4) 以化合物9b為原料，與化合物4d反應，即得所述化合物或其中間體； 或者，包括以下步驟：Y表示無、或苯環上相鄰的一個-OH和-COOH取代、或苯環上的一個或多個取代基；所 述取代基選自鹵素 、三氟甲基、甲基、C2~C6的烷基的烷酯基、C1-C 6的烷氧基、-OH、-C00H、-C0NH0H、-CH2C00H、-S03H、-SO 2NH2S -BOOH ; (1) 將化合物1與1，2-二溴乙烷在強堿催化下，制備得到化合物20 ; (2) 將上步所得化合物20與化合物4e在堿性條件下反應，即得所述化合物或其中間 體。14. 權利要求1-12任一項所述化合物、或其藥學上可接受的鹽、或其前藥、或其溶劑合 物在制備沉默信息調節因子2蛋白抑制劑類藥物上的用途；優選地，所述沉默信息調節因 子2蛋白抑制劑類藥物是SIRT5抑制劑類藥物。15. 根據權利要求14所述的用途，其特征在于：所述藥物是治療或預防代謝性疾病、月中 瘤或神經退行性急性病的藥物。
【文檔編號】C07D471/04GK105884767SQ201510823698
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2015年11月24日
【發明人】楊羚羚, 王周玉, 錢珊, 何彥穎, 陳泉龍
【申請人】西華大學