用于微嵌合檢測和個體識別的引物、探針、試劑盒及方法
【專利摘要】本發明屬于基因工程技術領域，公開了一種用于微嵌合檢測和個體識別的引物和探針組合、含有該引物和探針組合的試劑盒以及采用該引物和探針組合或試劑盒進行微嵌合檢測和個體識別的方法。本發明基于最新的InDel位點數據庫，以亞洲人群為基準，篩選出針對亞洲人群高個體識別率的15個InDel位點，并針對每一InDel位點，進一步設計特異性引物和探針組合。與現有技術相比，本發明方法具有多態性強、特異性好、靈敏度高和簡便快捷的優點，為亞洲人群進行微嵌合檢測和個體識別提供了非常重要的檢測手段。
【專利說明】
用于微嵌合檢測和個體識別的引物、探針、試劑盒及方法
技術領域
[0001] 本發明設及基因工程技術領域，具體設及用于微嵌合檢測和個體識別的引物、探 針、試劑盒及方法。
【背景技術】
[0002] 現代遺傳學家認為，基因是DNA(脫氧核糖核酸)分子上具有遺傳效應的特定核巧 酸序列的總稱，是具有遺傳效應的DNA分子片段。基因不僅可W通過復制把遺傳信息傳遞給 下一代，還可W使遺傳信息得到表達。運種遺傳信息蘊含在人的骨骼、毛發、血液等所有人 體組織或器官中。通過人類基因組多態性位點的差異，進行基因檢測來識別不同個體，目前 已被廣泛運用于法醫和臨床試驗。
[0003] 近來已開發出多種遺傳標記用于個體識別。其中，短串聯重復序列（Shod Tandem R邱eats,STR)由于檢測方法簡便、快速、準確性高、擴增片段大小適中，被認為是法醫DNA鑒 定中最標準、最權威的途徑和方法，能夠解決大多數的實際問題。但是，由于STR存在局突變 率(一般為1〇- 2~1〇-4)，檢測的片段較長（100~400bp)，不易實現對降解檢材的DNA分型，同 時嵌合率檢測靈敏度在5 %左右，而臨床上進行微移植或者微治療的時候，一般嵌合率需要 維持在1~2 % W下，無法滿足要求。
[0004] 嵌合體是指同一個體體內存在不同遺傳性狀的細胞嵌合現象，即含有兩套或兩套 W上染色體組的狀態。其中，微嵌合是指不同個體來源的細胞成分低于1%的現象。微嵌合 檢測要求更高靈敏度的檢測方法。因此，STR不能進行微嵌合分析。
[0005] 隨著基因組研究的進展，多態性位點相繼受到了廣泛的關注。其中，單核巧酸多態 性（Single Nucleotide Polymo巧Msm,SNP)具有相對較低的自發突變率（IQ-S);而單個的 SNP位點擴增產物可W控制在2(K)bpW下，有利于降解檢材的分型。然而SNP等位基因間差異 只有一個堿基，因此難W設計高靈敏度的檢測方案，檢測靈敏度只能達到1%，仍然不適用 于微嵌合檢測。而且SNP定量方法復雜，實驗儀器昂貴，使用成本高，操作繁瑣，通量小，并 不適合在常規的法醫學實驗室推廣。
[0006] 近年來新一代的多態性位點--插入或缺失多態性（Insertion or Deletion Polymorphisms , InDeI或DIP)，即基因組中插入或缺失不同類型和大小的DNA片段（4~ 2化P)所形成的多態性遺傳標記，在法醫物證鑒定、親子鑒定和其他醫學檢驗方面有著廣泛 運用。從法醫學物證檢驗的角度來看，InDel標記具有W下特點：（1)在人類基因組中含量豐 富，數量僅次于SNP; (2)與SNP具有相近的自然突變率(~2.3 X 1(T9); (3)InDel擴增片段更 短（低于160bp)，更適于檢測高度降解和低拷貝的DNA模板，增加 DNA降解檢材分型的成功 率；（4)InDel位點存在顯著的人群和種族差異；（5)可通過巧光PCR擴增技術進行InDel檢 ，技術平臺普遍適用性強；（6)基于InDel位點，使用雙色巧光定量PCR方法，確定區分供者 和受者的特異性位點后，進行定量PCR，最低嵌合率檢測可W達到0.01~0.05%。因此，近些 年來日漸引起國內外許多法醫學者的關注。然而，截止到目前為止，基于InDel遺傳標記的 商業上比較成熟的用于微嵌合檢測和個體識別的試劑盒還非常少見，只有荷蘭的 Investigator DIP試劑盒是比較成熟的商業化產品。同時，由于遺傳標記存在人群和種族 的差異，Investigator DIP試劑盒對于亞洲人群來說，適用性并不是特別強。因此，研發一 套適用于亞洲人群的用于微嵌合檢測和個體識別的InDel遺傳標記試劑盒就顯得非常必 要。
【發明內容】
[0007] 本發明針對現有技術中存在的上述缺陷，基于最新的InDel位點數據庫，并W亞洲 人群為基準，重新設計了用于微嵌合檢測和個體識別的引物和探針W及檢測方法。本發明 的檢測方法多態性強、特異性好、靈敏度高且簡便快捷。
[0008] 為此，本發明一方面提供了一種用于微嵌合檢測和個體識別的引物和探針組合， 其由SEQ ID NO. 1-75所示的引物和探針組成。
[0009] 在本發明優選的實施方案中，該引物和探針組合進一步由第1-15組引物和探針組 成，其中第1組由SEQ ID NO. 1-4所示的引物和SEQ ID NO.5所示的探針組成，第2組由SEQ ID NO.6-9所示的引物和沈Q ID NO. 10所示的探針組成，第3組由沈Q ID NO. 11-14所示的 引物和SEQ ID NO. 15所示的探針組成，第4組由SEQ ID NO. 16-19所示的引物和SEQ ID NO.20所示的探針組成，第5組由SEQ ID NO.21-24所示的引物和SEQ ID NO.25所示的探針 組成，第6組由沈Q ID NO.26-29所示的引物和SEQ ID NO.30所示的探針組成，第7組由沈Q ID NO.31-34所示的引物和沈Q ID NO.35所示的探針組成，第8組由沈Q ID NO.36-39所示 的引物和SEQ ID NO. 40所示的探針組成，第9組由SEQ ID NO.41-44所示的引物和SEQ ID NO.45所示的探針組成，第10組由SEQ ID NO.46-49所示的引物和SEQ ID NO.50所示的探針 組成，第11組由SEQ ID NO.51-54所示的引物和SEQ ID NO.55所示的探針組成，第12組由 沈Q ID NO.56-59所示的引物和沈Q ID NO.60所示的探針組成，第13組由沈Q ID NO.61-64 所示的引物和SEQ ID NO.65所示的探針組成，第14組由SEQ ID NO.66-69所示的引物和SEQ ID NO. 70所示的探針組成，第15組由SEQ ID NO. 71-74所示的引物和SEQ ID NO. 75所示的 探針組成。
[0010] 本發明基于最新的InDel位點數據庫，W亞洲人群為基準，從中篩選出針對亞洲人 群高個體識別率的15個InDel位點，它們分別為:化-1片32308010)、化-2片334855933)、化-3(rs4646006)、N2-l(rs3042783)、N5-l(rsl610937)、N5-4(rsl610932)、N7-l(rsl6458)、 N9-l(rs2308112)、Nll-l(rs2307696)、Nll-2(rsl40790)、N13-l(rs3038530)、N13-2 (rs3049448)、N14-l(rs56024302)、N16-2(rs2067204)和 N21-l(rsl6663)，括號中的 rs 號表 示該位點在化SNP數據庫的編號。
[0011] 本發明進一步針對上述每一個InDel位點，分別設計一條共用的上游引物(F)、下 游引物(R)、插入特異性引物F( + )和缺失特異性引物F(-)，其中擴增片段長度(Amplified Fragment Length,AFL)為該引物與對應的上游引物或下游引物配對所得到的擴增片段長 度，例如F( + )與R用來特異性擴增插入片段，R(-)與F用來特異性擴增缺失片段，F與R用來擴 增非特異性片段(其中：灰色底色代表插入/缺失的特異性堿基）。
[0012] 針對上述亞洲人群高個體識別率的15個InDel位點，本發明設計的具體引物和探 針情況如表1所示。
[001引表1、本發明的引物和探針情況表
[0015]
[0016] 本發明另一方面提供了一種用于微嵌合檢測和個體識別的試劑盒，其包含本發 明所述的引物和探針組合。該試劑盒保存于-20°C，并由W下試劑組成。
[0017] 1、全血基因組DNA提取試劑，購于QIAamp DNA Blood Mini kit試劑盒；
[001 引 2、RNase-Free ddH20;
[0019] 3、2XS叩er Real PreMix反應液，購于天根生化科技（北京）有限公司，貨號： FP206；
[0020] 4、50XR0X Reference Dye,購于天根生化科技(北京)有限公司，貨號:FP206;
[0021] 5、分別分裝在相應編號離屯、管中的引物和探針組合。
[0022] 在本發明優選的實施方案中，試劑盒中每種引物的濃度為6iiM，每種探針的濃度為
[0023] 本發明另一方面提供了本發明所述的引物和探針組合在制備微嵌合檢測和個體 識別試劑盒中的應用。
[0024] 本發明再一方面提供了本發明所述的引物和探針組合，或者本發明所述的試劑盒 在微嵌合檢測和個體識別中的應用。
[0025] 本發明最后一方面提供了一種微嵌合檢測和個體識別的方法，其包含W下步驟：
[0026] 1、獲取待測樣品的DNA。
[0027] DNA提取可W采用QIAamp DNA Blood Mini kit試劑盒。
[0028] 2、采用本發明所述的引物和探針組合，或采用本發明所述的試劑盒，W步驟1中獲 取的DNA為模板，進行巧光PCR擴增，并收集巧光信號。
[00巧]巧光PCR擴增的體系為20化：IOuL 2 XS叫er Real PreMix反應液(天根生化科技 (北京)有限公司，貨號:FP206);0.化L 50XR0X Reference Dye(天根生化科技(北京)有限 公司，貨號：FP206);luL 6uM 引物 F( + )/F(-);luL 6uM 引物 R;luL 4uM 探針；IuL 20ng/uL DNA;用RNase-Free d地2〇補足反應體系。
[0030] 巧光PCR的反應條件為:95。(：預變性15min，然后95。(：變性3s-6(TC退火延伸32s， 共進行40個循環，在6(TC處收集巧光信號。
[0031] 3、根據Ct值判斷待測樣品在15個InDel位點上的多態性差異，從而對待測樣品進 行微嵌合檢測和個體識別。
[0032] 通過Ct值來判斷每個遺傳標記陽性樣本和陰性樣本的Ct值區間范圍，陽性樣本Ct 值落在24-29之間，陰性樣本Ct值在38W上，陽性樣本和陰性樣本Ct值相差12W上，表示引 物和探針的特異性良好。
[0033] 在本發明優選的實施方案中，采用的引物和探針是針對亞洲人群高個體識別率的 15個InDel位點設計的。
[0034] 在本發明進一步優選的實施方案中，每種引物的濃度為6測，每種探針的濃度為化 M。
[0035] 由上述描述可知，與現有技術相比，本發明具備如下優點。
[0036] 1、多態性強:通過本發明篩選的15個InDel位點，對隨機選取的94個樣本進行基因 頻率測試，結果表明運15個InDe 1位點等位基因頻率分布均衡，多態性強。根據運15個InDe 1 位點的多態性信息，能夠進行微嵌合檢測和個體識別。
[0037] 2、特異性好:通過本發明篩選的15個InDel位點，對陽性樣本和陰性樣本進行檢 ，結果表明特異性好、穩定性強、重復性好，分型結果準確(在測序結果基礎上進行比較）。
[0038] 3、靈敏度高:進行嵌合狀態分析時，利用本發明篩選的15個InDel位點，進行巧光 PCR擴增，當模板量僅為14化g時，即可進行精確的定量分析，最低嵌合率檢測可達0.025%。
[0039] 4、本發明的檢測方法采用雙巧光標記擴增技術，該技術簡便、快捷，只需一臺 Applied Biosystems 7500 Real Time PCR System即可，結果進行自動分析，能夠保證不 同實驗室數據的準確性。
【附圖說明】
[0040] 圖1:本發明用于檢測引物和探針特異性的PCR擴增結果圖。
[0041] 圖2:本發明試劑盒用于個體識別檢測的PCR擴增結果圖。
[0042] 圖3:本發明遺傳標記N13-U + )的檢測結果圖。
[0043] 圖4:本發明遺傳標記 N13-U + )的標準品（100%、90%、50%、10%、1%、0.1%、 0.05%、0.025%)擴增曲線圖。
【具體實施方式】
[0044] 下面通過實施例對本發明作進一步的詳細說明，旨在用于說明本發明而非限定 本發明。應當指出，對于本領域技術人員而言，在不脫離本發明原理的前提下，還可W對本 發明進行若干改進和修飾，運些改進和修飾也同樣落入本發明的保護范圍之內。
[0045] 實施例1:引物的設計與合成
[0046] ( -HnDel 位點篩選
[0047] 采用如下原則對InDel位點進行篩選：
[004引 UInDel等位基因片段長度差異(插入或缺失堿基數目）大于3bp小于30bp;
[0049] 2、位于人類22條常染色體上；
[(K)加]3、同一條染色體上的InDel位點間距大于5Mb;
[0化1] 4、最小等位基因頻率(Minimum allele打equency,MAF)介于0.30到0.50之間（W 東亞人群為基準）；
[0052] 5、總位點數不少于30個，累積個體識別率達到0.9999W上；
[0053] 6、同一染色體上不形成連鎖，在人群中的分布符合化rdy-Weinbe巧遺傳平衡；
[0054] 7、避免InDel位點與某些特殊的疾病表型相關聯，多態性位點最好位于內含子區 域。
[0055] 采用上述原則，分別通過http : //www . ensembl . org/index . html和http : // www.ncbi .nlm.nih.gov/projects/SNP/所示的網址，對多態性較強的InDel位點進行初步 篩選，最終選定了 15個InDel位點，分別為:Nl-l(rs2308010)、Nl-2(rs：34855933)、Nl-3 (rs4646006)、N2-l(rs3042783)、N5-l(rsl610937)、N5-4(rsl610932)、N7-l(rsl6458)、N9-1(rs2308112)、N11-1(rs2307696)、N11-2(rs140790)、N13-l(rs3038530)、N13-2 (rs3049448)、N14-l(rs56024302)、N16-2(rs2067204)、N21-l(rsl6663)，括號中的 rs 號表 示該位點在化SNP數據庫的編號。
[0056] (二)樣本選擇、基因頻率測試和引物序列修改
[0057] 隨機選取94個中國人群DNA樣本，進行擴增和基因測序。采用初步選定的引物對94 個健康人基因組DNA樣本進行檢測，用W評估引物的擴增效率和各位點的基因頻率。
[0化引 UDNA提取
[0059] DNA提取按照QIAamp DNA Blood Mini kit試劑盒進行，隨后采用RNase-^ee d地2〇稀釋到20ng/uL備用。
[0060] 2、PCR擴增體系
[0061] 采用25uL的PCR擴增體系：2.5uL 10 Xbuffer反應液；0.7加 L IOmM dNTP; IuL SuM 引物F;1.8uL 加 M引物R;1.4uL 加 M引物F( + )/F(-);化L DNA;0.2uL Hot Stad Taq;luL Mg2+;0.1 uL DMSO，用RNase-Free d地2〇補足反應體系。
[0062] 3、PCR反應條件
[0063] 采用如下的PCR反應條件:95°C預變性30s，然后95°C變性30s-58°C退火30s-68 。(:延伸30s，共進行30個循環，最后68 °C延伸5min。
[0064] 4、電泳檢測和引物序列修改
[0065] PCR產物經2%瓊脂糖電泳30min后進行檢測，驗證設計的特異性引物是否合適。W 一代測序結果為準，針對電泳假陽性和假陰性的情況，修改引物序列，重新進行檢測。
[0066] 經過檢測和修改之后，最終確定的15個InDel位點的引物及探針序列如表1所示， 委托上海英驗生物技術有限公司合成上述引物和探針。
[0067] 分別用15個InDel位點的引物和探針對94個樣本進行檢測，結果表明等位基因頻 率分布比較均衡，具體多態性信息如表2所示。其中：V'代表插入多態性；代表缺失多態 性；"+/+"代表插入純合子多態性；代表插入/缺失雜合子多態性；代表缺失純合 子多態性。
[006引表2 15個InDel位點的多態性信息（測序結果）
[0069]
[0070]
[0071 ] 實施例2:引物和探針特異性測試
[0072]在實施例1的測序結果下，分別選取5個插入純合子、缺失純合子和雜合子，進行巧 光PCR，用于檢測引物和探針的特異性。
[0073] I、巧光PCR擴增體系
[0074] 采用20uL的巧光PCR擴增體系：IOuL 2 X Super Real PreMix反應液(天根生化科 技(北京)有限公司，貨號:FP206);0.2uL 50XR0X Reference Dye快根生化科技(北京)有 限公司，貨號：FP206);luL 6uM引物F( + )/F(-);luL 6uM引物R;luL 4uM探針；IuL 20ng/uL DNA;用RNase-Free d地2〇補足反應體系。
[00巧]2、巧光PCR反應條件
[0076] 采用如下的巧光PCR反應條件:95°C預變性15min，然后95°C變性3s-60°C退火延 伸32s，共進行40個循環，在6(TC處收集巧光信號。
[0077] 3、引物和探針特異性判斷
[0078] 通過Ct值來判斷每個遺傳標記陽性樣本和陰性樣本的Ct值區間范圍，陽性樣本Ct 值落在24-29之間，陰性樣本Ct值在38W上，陽性樣本和陰性樣本Ct值相差12W上，表示引 物和探針的特異性良好。
[0079] WNl-2( + )插入遺傳標記為例，陽性樣本(插入純合子和雜合子)的Ct值落在范圍 26-28內（參見說明書附圖la)，陰性樣本(缺失純合子)的Ct值檢測不到（即在40個PCR循環 數下，沒有檢測到巧光信號，Ct值大于40)(參見說明書附圖Ib),表明引物和探針的特異性 良好。
[0080] 實施例3:本發明試劑盒的組成
[0081] 本發明用于微嵌合檢測和個體識別的InDel遺傳標記試劑盒，保存于-20°C，由W 下試劑組成。
[0082] 1、全血基因組DNA提取試劑:購于QIAamp DNA Blood Mini kit試劑盒。
[0083] 2、RNase-Free (1地2〇。
[0084] 3 JXSuper Real PreMix反應液，購于天根生化科技（北京）有限公司，貨號： FP206。
[0085] 4、50XR0X Reference Dye,購于天根生化科技(北京)有限公司，貨號:FP206。
[0086] 5、分別分裝在相應編號離屯、管中的引物和探針組合，每種引物的濃度為6uM，每種 探針濃度為4uM。
[0087] 實施例4:本發明試劑盒用于個體識別的檢測
[0088] 隨機選取兩個不同來源的DNA樣本(分別命名為A和B)，用本發明試劑盒中的InDel 遺傳標記進行多態性檢測。
[0089] 巧光PCR擴增體系及反應條件同實施例2"PCR擴增反應后，對于每一個遺傳標記， 擴增后可能出現四種結果，具體參見說明書附圖2。圖2a中，樣本A和B均為陽性；圖化中，樣 本A和B均為陰性；圖2c中，樣本A為陽性，樣本B為陰性；圖2d中，樣本A為陰性，樣本B為陽性。 圖2a和2b沒有多態性差異，圖2c和2d具有多態性差異，根據多態性差異即可判斷出樣本是 否來源于不同個體。
[0090] 根據Ct值進行判斷，在15個InDel位點中，樣本A和樣本B有14個遺傳標記(N1-1 (+)、Nl-2(-)、Nl-3(-)、N2-l(+)、N2-l(-)、N5-4(+)、N7-l(+)、N9-l(+)、Nll-l(-)、Nll-2 (-)、N13-l( + )、N13-l(-)、N14-l( + )、N16-2(-))具有多態性差異。因此，可判斷樣本A和樣本 B來源于不同的個體。
[0091 ] 實施例5:引物和探針準確性和靈敏性測試
[0092] 選取40對DNA樣本進行InDel遺傳標記定性檢測，W獲得每對樣本的InDel位點多 態性信息。
[0093] 針對每一對樣本，選出可用的遺傳標記（可用遺傳標記需符合W下特點：Ct<28陽 性樣本定為受者，Ct〉38陰性樣本定為供者），W不同比例混合，得到不同比例的標準品，通 過巧光PCR進行靈敏度和準確性檢測。同時，為了達到ICT 5的檢測靈敏度，初始DNA模板的量 至少為140ng。
[0094] 選擇其中一對樣本為例(樣本命名為C和D)，具體實施方法如下。
[0095] 1、對樣本C和樣本D進行InDel位點多態性測試
[0096] 巧光PCR反應體系及條件同實施例2。W樣本C為受者，樣本D為供著，按照Ct值的大 小(C: Ct<28陽性樣本;D: Ct〉38陰性樣本），選出可用的遺傳標記。
[0097] 2、標準品構建
[009引針對樣本C和樣本D，W不同比例混合（受者C/供者0:90%、50%、10%、1%、 0.1%、0.05%、0.025%)，得到不同比例的濃度為20ng/uL的標準品。
[0099] 3、通過定量分析的方法檢測引物和探針的準確性和靈敏性
[0100] 將制備的嵌合比例分別為 100%、90%、50%、10%、1%、0.1%、0.05%、0.025% 的 標準品作為定量分析的模板，同時WRNase-Free d加 2〇為模板作為空白對照。為了達到 14化g DNA初始模板（1〇-5的檢測靈敏度），需添加7uL 20ng/uL的標準品，其它巧光PCR反應 體系及條件同實施例2。
[0101] 4、定量分析
[0102] 通過巧光PCR，獲得不同比例的標準品檢測所得的遺傳標記和內參基因的Ct值，并 計算兩者所得Ct值的差值（A Ct)。
[0103] 說明書附圖3為遺傳標記N13-U + )的檢測結果。看圖3可W看出，遺傳標記N13-1 (+ )和內參基因擴增曲線形態良好，PCR產物特異性高、無非特異性擴增，同時對照空白組無 擴增。
[0104] 說明書附圖4為遺傳標記N13-U + )的標準品擴增曲線。圖中顯示，標準品擴增曲線 形態良好。WC作為手術移植前的樣本，CD作為移植后的樣本，根據移植后與移植前A Ct的 差值（A A Ct)，可W計算獲得CD嵌合率％ = X 100%，其中A A Ct= A Ct移醋-A Ct纖節 =(Ct極鑑g-Ct膨標IOTfBtrC咕。通過比較理論值和巧光PCR計算獲得 的測試值，可W用來判斷各個遺傳標記的靈敏度和準確性。
[0105] 對于N13-U + )遺傳標記，測試值分別為93.34% (理論90%)、65.19% (理論50%)、 13.25% (理論10% )、0.9452% (理論1%)、0.1053% (理論0.!%)、0.0598%(理論0.05%) W及0.0282% (理論0.025 % )，表明引物和探針測試準確性良好，靈敏度可W達到0.025% JjL -?" O
【主權項】
1. 一種用于微嵌合檢測和個體識別的引物和探針組合，其由SEQ ID NO.1-75所示的引 物和探針組成。2. 根據權利要求1所述的引物和探針組合，其進一步由第1-15組引物和探針組成，其中 第1組由SEQ ID NO. 1-4所示的引物和SEQ ID NO.5所示的探針組成，第2組由SEQ ID NO.6-9所示的引物和SEQ ID NO. 10所示的探針組成，第3組由SEQ ID NO. 11-14所示的引物和SEQ ID NO. 15所示的探針組成，第4組由SEQ ID NO. 16-19所示的引物和SEQ ID NO.20所示的探 針組成，第5組由SEQ ID NO.21-24所示的引物和SEQ ID NO.25所示的探針組成，第6組由 SEQ ID NO.26-29所示的引物和SEQ ID NO.30所示的探針組成，第7組由SEQ ID NO.31-34 所示的引物和SEQ ID NO.35所示的探針組成，第8組由SEQ ID NO.36-39所示的引物和SEQ ID NO.40所示的探針組成，第9組由SEQ ID NO.41-44所示的引物和SEQ ID NO.45所示的探 針組成，第10組由SEQ ID NO.46-49所示的引物和SEQ ID NO.50所示的探針組成，第11組由 SEQ ID NO.51-54所示的引物和SEQ ID NO.55所示的探針組成，第12組由SEQ ID NO.56-59 所示的引物和SEQ ID NO.60所示的探針組成，第13組由SEQ ID NO.61-64所示的引物和SEQ ID NO.65所示的探針組成，第14組由SEQ ID NO.66-69所示的引物和SEQ ID NO.70所示的 探針組成，第15組由SEQ ID NO.71-74所示的引物和SEQ ID NO.75所示的探針組成。3. 根據權利要求1或2所述的引物和探針組合，其是針對亞洲人群高個體識別率的15個 InDel位點設計的。4. 一種用于微嵌合檢測和個體識別的試劑盒，其包含權利要求1-3中任一項所述的引 物和探針組合。5. 根據權利要求4所述的試劑盒，其中每種引物的濃度為6μΜ，每種探針的濃度為4μΜ。6. 權利要求1-3中任一項所述的引物和探針組合在制備微嵌合檢測和個體識別試劑盒 中的應用。7. 權利要求1-3中任一項所述的引物和探針組合，或者權利要求4或5所述的試劑盒在 微嵌合檢測和個體識別中的應用。8. -種微嵌合檢測和個體識別方法，其包含以下步驟： (1) 獲取待測樣品DNA; (2) 采用權利要求1-3中任一項所述的引物和探針組合，或采用權利要求4或5所述的試 劑盒，以步驟(1)中獲取的DNA為模板，進行熒光PCR擴增，并收集熒光信號； (3) 根據Ct值判斷待測樣品在15個InDel位點上的多態性差異，從而對待測樣品進行微 嵌合檢測和個體識別。9. 根據權利要求8所述的方法，其中采用的引物和探針是針對亞洲人群高個體識別率 的15個InDel位點設計的。10. 根據權利要求8或9所述的方法，其中每種引物的濃度為6μΜ，每種探針的濃度為4μ Μ〇
【文檔編號】C12N15/11GK105861675SQ201610268840
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月27日
【發明人】鄭仲征, 杜金偉, 謝桂貞, 翼麗軍, 潘捷
【申請人】上海荻碩貝肯生物科技有限公司