用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒及方法
【專利摘要】本發明涉及一種用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒及方法。該試劑盒包括擴增引物、表面固定有捕獲探針的磁性微珠及檢測試劑。該用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒和方法針對12個黃嘌呤氧化酶過敏易感的SNP位點設計特異性擴增引物和捕獲探針，可分型檢測12個SNP位點的型別，特異性強，且使用磁性微珠固定捕獲探針，利用捕獲探針與擴增產物的雜交反應進行檢測，靈敏度高，能夠較為快速的檢測待測DNA樣本中12個SNP型別。
【專利說明】
用于檢測對黃標嶺氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒及方法
技術領域
[0001] 本發明設及生化檢測領域，尤其是設及一種用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏 性的試劑盒及方法。
【背景技術】
[0002] 高尿酸血癥是嚷嶺代謝異常、血尿酸生成過多或排泄障礙導致的代謝性疾病，不 僅是痛風的主要危險因素，同時也是代謝綜合征的重要組成部分。高尿酸血癥影響屯、臟、腎 臟等臟器功能，是高血壓、冠屯、病的獨立危險因素，也是慢性腎功能不全的重要危險因素， 對人類健康造成嚴重危害。
[0003] 黃嚷嶺氧化酶(xanthine oxidase，X0D)是嚷嶺分解代謝過程中的一種重要的酶， 其催化次黃嚷嶺轉化為黃嚷嶺及由黃嚷嶺形成尿酸的氧化過程，與尿酸生成增多引起的高 尿酸血癥及痛風等多種疾病相關。別嚷醇等黃嚷嶺氧化酶抑制劑，可W減少體內尿酸合成， 臨床應用于高尿酸血癥、痛風和痛風性關節炎等疾病的防治。但運類藥物存在嚴重的超敏 反應風險，包括重癥滲出性多形紅斑型藥疹(Stevens-Johnson綜合征，SJS)和中毒性表皮 壞死松解癥(TEN)，發生率約5%，約占藥疹病例的11.94%，致死率可達30 %~50 %。研究發 現，中國人群中化A-B*5801等位基因與黃嚷嶺氧化酶抑制劑引起嚴重皮膚過敏反應強相 關。攜帶HLA-B巧801等位基因的中國漢族患者服用別嚷醇發生皮膚過敏反應的風險較未攜 帶有此基因型的漢族人群風險比增加339倍。美國風濕病學會痛風指南指出中國漢族人和 泰國人應用別嚷醇前應做HLA-B巧801等位基因檢測。但由于HLA分型的血清學分型和基因 分型各有不足，難W在臨床工作中開展檢測。
[0004] 目前國內上市的用于臨床檢測HLA-B*5801的試劑盒只有2015年引進的中國臺灣 世基生物醫學股份有限公司的人類白細胞抗原B位點5801基因檢測試劑盒。該試劑盒通過 檢測巧光定量PCR染料法結合溶解曲線技術分析HLA-B巧801基因，但鑒于HLA-B基因的多態 性，難W保證該試劑盒在非特異擴增情況及HLA-B巧801陰性患者的過敏反應。
【發明內容】
[0005] 基于此，有必要提供一種具有較高檢測靈敏度和特異性的用于檢測對黃嚷嶺氧化 酶抑制劑過敏性的試劑盒及方法。
[0006] -種用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，包括擴增引物及表面固定 有捕獲探針的磁性微珠；
[0007] 所述擴增引物選自如下引物中的至少一對:序列為SEQ ID No. 1與SEQ ID No.2的 引物、序列為沈Q ID No.3與沈Q ID No.4的引物、序列為沈Q ID No.5與沈Q ID No.6的引 物、序列為SEQ ID No.7與沈Q ID No.8的引物、序列為SEQ ID No.9與沈Q ID No. 10的引 物、序列為SEQ ID No.11 與SEQ ID No.12的引物、序列為SEQ ID No.13與SEQ ID No.14的 引物、序列為沈Q ID No. 15與SEQ ID No. 16的引物、序列為沈Q ID No. 17與沈Q ID No. 18 的引物、序列為SEQ ID No.19與SEQ ID No.20的引物、序列為SEQ ID No.21與SEQ ID No. 22的引物及序列為SEQ ID No. 23與SEQ ID No. 24的引物;所述擴增引物的反向引物的 5'端連接有檢測標記物；
[000引對應的所述捕獲探針選自如下探針組中的至少一組:序列為SEQ ID No. 25與SEQ ID No. 26的探針組、序列為沈Q ID No. 27與沈Q ID No. 28的探針組、序列為SEQ ID No. 29 與沈Q ID No. 30的探針組、序列為沈Q ID No.31與SEQ ID No.32的探針組、序列為沈Q ID No. 33與SEQ ID No. 34的探針組、序列為SEQ ID No. 35與沈Q ID No. 36的探針組、序列為 沈Q ID No. 37與沈Q ID No. 38的探針組、序列為沈Q ID No.39與沈Q ID No.40的探針組、 序列為SEQ ID No.41與沈Q ID No.42的探針組、序列為沈Q ID No.43與SEQ ID No.44的探 針組、序列為SEQ ID No.45與SEQ ID No.46的探針組及序列為SEQ ID No.47與SEQ ID No. 48的探針組；
[0009] 對應的所述磁性微珠至少有兩種，不同的磁性微珠具有不同的編碼信息，每條捕 獲探針對應一種磁性微珠。
[0010] 在其中一個實施例，所述擴增引物選自如下兩組中的至少一組:其中一組包括如 下引物：序列為SEQ ID No. 1與沈Q ID No.2的引物、序列為沈Q ID No.3與SEQ ID No.4的 引物、序列為沈Q ID No.5與沈Q ID No.6的引物、序列為沈Q ID No.7與沈Q ID No.8的引 物、序列為SEQ ID No. 11與SEQ ID No. 12的引物及序列為SEQ ID No.21與SEQ ID No.22的 引物；
[0011] 另一組包括如下引物:序列為SEQ ID No.9與SEQ ID No. 10的引物、序列為SEQ ID No. 13與沈Q ID No. 14的引物、序列為沈Q ID No. 15與沈Q ID No. 16的引物、序列為沈Q ID No. 17與SEQ ID No. 18的引物、序列為SEQ ID No. 19與SEQ ID No.20的引物及序列為SEQ ID No.23與沈Q ID No.24的引物。
[0012] 在其中一個實施例，所述擴增引物有12對，對應的，所述捕獲探針有12組，所述磁 性微珠有24種。
[0013] 在其中一個實施例，所述捕獲探針通過其5'端帶有的氨基與所述磁性微珠表面的 活化簇基反應后包被在所述磁性微珠表面。
[0014] 在其中一個實施例，所述試劑盒還包括檢測試劑，所述檢測試劑含有能夠與所述 檢測標記物反應結合的巧光蛋白。
[0015] -種用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的方法，使用上述任一實施例所述的 用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，所述用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過 敏性的方法包括如下步驟：
[0016] 獲取待測DNA樣本；
[0017] 使用所述擴增引物對所述待測DNA樣本進行PCR擴增，得到擴增產物；
[0018] 將所述擴增產物加入至添加有所述磁性微珠的容器中，進行雜交解育反應，待反 應結束后，清洗所述容器；
[0019] 向所述容器中加入所述檢測試劑，震蕩反應，反應結束后，清洗所述容器；
[0020] 使用影像識別系統辨識所述磁性微珠的編碼信息，并檢測對應的巧光蛋白信號， 經分析處理得到檢測結果。
[0021] 在其中一個實施例中，所述PCR擴增是使用如權利要求3中的兩組擴增引物分別對 所述待測DNA樣本進行多重PCR擴增。
[0022] 在其中一個實施例中，進行多重PCR擴增時，其中一組擴增引物中的各引物的添加 量比例如下：SEQ ID No. 1: SEQ ID No. 2: SEQ ID No. 3:沈Q ID No. 4: SEQ ID No. 5: SEQ IDNo.6:SEQIDNo.7:SEQIDNo.8:SEQIDNo.ll:WQIDNo.l2:WQIDNo.21:WQID No. 22 = 0.5:0.15:1:0.2:0.5:0.15:0.5:0.15:0.5:0.15:0.5:0.1；
[0023] 另一組擴增引物中的各引物的添加量比例如下：SEQ ID No.9:沈Q ID No. 10:沈Q ID No.13:沈Q ID No.14:沈Q ID No.15:沈Q ID No.16:沈Q ID No.17:沈Q ID No.18:SEQ ID No. 19:沈Q ID No. 20:沈Q ID No. 23:沈Q ID No. 24 = 0.5:0.15 :0.5:0.1:0.5:0.15: 0.5:0.15:0.5:0.15:0.5:0.Io
[0024] 在其中一個實施例中，所述PCR擴增的條件是：50 °C、3min; 95 °C、15min; 94°C、30 秒，55 °C、30秒，72 °C、30秒，共45個循環;72 °C、7分鐘；最后4°C維持。
[0025] 上述用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒和方法針對12個黃嚷嶺氧 化酶過敏易感的SNP位點設計特異性擴增引物和捕獲探針，可分型檢測12個SNP位點的型 另IJ，特異性強，且使用磁性微珠固定捕獲探針，利用捕獲探針與擴增產物的雜交反應進行檢 測，靈敏度高，能夠較為快速的檢測待巧化NA樣本中12個SNP型別。
【附圖說明】
[0026] 圖1為本發明用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒的檢測原理圖；
[0027] 圖2為一實施例的用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的方法的流程示意圖。
【具體實施方式】
[0028] 為了便于理解本發明，下面將參照相關附圖對本發明進行更全面的描述。附圖中 給出了本發明的較佳實施方式。但是，本發明可W W許多不同的形式來實現，并不限于本文 所描述的實施方式。相反地，提供運些實施方式的目的是使對本發明的公開內容的理解更 加透徹全面。
[0029] 除非另有定義，本文所使用的所有的技術和科學術語與屬于本發明的技術領域 的技術人員通常理解的含義相同。本文中在本發明的說明書中所使用的術語只是為了描述 具體的實施方式的目的，不是旨在于限制本發明。本文所使用的術語"及/或"包括一個或多 個相關的所列項目的任意的和所有的組合。
[0030] 如圖1所示，一實施例的用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，包括擴 增引物、表面固定有捕獲探針的磁性微珠及檢測試劑。
[0031] 擴增引物選自下表1所示的12對引物中的至少一對。
[0032] 表1擴增引物
[00331
[0034J 擴增引物中的各反向引物的5'端連接有檢測標記物，W用于與檢測試劑中的巧光 蛋白反應結合。在一實施例中，該檢測標記物為生物素，該巧光蛋白為鏈霉親和素標記的藻 紅巧光蛋白。在其他實施例中，該試劑盒也可W不包含有該檢測試劑，檢測試劑可W在實驗 需要時經由其他方式獲取。
[0035] 捕獲探針選自如下表2所示的12組探針組中的至少一組，且捕獲探針與擴增引物 對應。
[0036] 表2捕獲探針
[0037]
[0038] 在本實施方式中，捕獲探針預先固定在磁性微珠的表面形成液相忍片。對應地，磁 性微珠至少有兩種，不同的磁性微珠具有不同的編碼信息，每條捕獲探針對應一種磁性微 珠。
[0039] 磁性微珠具有磁性。磁性微珠上設有用于供影像識別系統辨識的編碼信息，如不 同的磁性微珠具有不同的顏色或不同顏色的組合，該不同的顏色或不同顏色的組合即構成 編碼信息，W區分不同的磁性微珠。磁性微珠的表面具有修飾層，如物理修飾層或化學修飾 層，優選化學修飾層。其中化學修飾層可W但不限于經由簇化作用處理形成的修飾層。對于 經簇化作用處理的磁性微珠可藉EDC(l-Ethyl-3-(3-dimethylaminop;ropyl) carbodiimide ,1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺)活化簇基與捕獲探針連接的氨基 (如，NHS (N-Hyhowsuccinimide,N-徑基班巧酷亞胺））進行反應，將帶有氨基的捕獲探針 結合于磁性微珠表面，形成捕獲探針包被的磁性微珠。磁性微珠容量高，可作為多元載體。 當需要能夠檢測多種SNP位點時，磁性微珠可W針對性的設計為多種，W包被不同的捕獲探 針。
[0040] 捕獲探針包被的磁性微珠可采用但不限于如下方法制備：
[0041 ] 取出40iil (1 X IO7個)磁性微珠，用磁棒吸附磁性微珠后，吸去上清，加入扣1 0.1 M MES pH4.5，混勻。將所用的捕獲探針稀釋至0.1 mM，在偶聯體系中加入化1。第一次加入2.化 1 lOmg/ml邸C，混勻后避光放置30min。重復再加入一次抓C，混勻避光放置30min。用0.2ml 0.02 % Tween和0.1 % SDS各洗一次，最后將磁性微珠重新懸浮于IOiil TE (pH 8.0)溶液中， 混勻后使用血細胞計數器計數磁性微珠數量(計數四角4個大方格的數目后換算為每微升 磁性微珠個數）d4°C避光保存。混合偶聯好捕獲探針的磁性微珠，使用1.5XTMAC稀釋至每 種磁性微珠的濃度是150個AU待用。
[0042] 如圖1所示，本實施方式的試劑盒針對人類基因組DNA中黃嚷嶺氧化酶過敏易感基 因的 12 個 SNP 位點：rs2734583，rs3117583，rs2855804，rsl 150793，rs3094011，rs3131643， rs9267445，rs9263726，rs9263733，rs9263745，rs4084090 及 rsl634776 設計特異性的擴增 引物和捕獲探針，其中特異性的擴增引物用于擴增目的DM獲得有關12個SNP位點的擴增產 物。捕獲探針偶聯固定在液相忍片的磁性微珠上，根據最終捕獲碳探針與擴增產物的雜交 信號，可W對各個SNP位點的堿基型別進行判定。
[0043] 如圖2所示，本實施方式還提供了一種用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的 方法，該方法使用上述用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，具體包括如下步 驟：
[0044] 步驟S110,獲取待測DNA樣本。
[0045] DNA樣本可W采集自但不限于外周血樣本、全血樣本、唾液樣本等含有人體基因組 DNA的樣本。
[0046] 步驟S120,使用擴增引物對待巧化NA樣本進行PCR擴增，得到擴增產物。
[0047] PCR擴增可W是使用各擴增引物進行單重PCR擴增，也可W使用含有不同擴增引 物構成的組合進行多重PCR擴增。如在一實施例中，在進行多重PCR擴增時，其中一組擴增引 物中的各引物的添加量比例如下：SEQ ID No.l:SEQ ID No.2:SEQ ID No.3:SEQ ID No.4: WQIDNo.5:SEQIDNo.6:SEQIDNo.7:SEQIDNo.8:WQIDNo.ll:WQIDNo.l2:SEQ ID No.21:沈 Q ID No.22 = 0.5:0.15:1:0.2:0.5:0.15:0.5:0.15:0.5:0.15:0.5:0.1;另一 組擴增引物中的各引物的添加量比例如下：SEQ ID No.9:SEQ ID No. 10:沈Q ID No. 13: SEQ ID No.14:SEQ ID No.15:SEQ ID No.16:SEQ ID No.17:SEQ ID No.18:SEQ ID No. 19:沈Q ID No.20:沈Q ID No.23:沈Q ID No.24 = 0.5:0.15:0.5:0.1:0.5:0.15:0.5: 0.15:0.5:0.15:0.5〇
[004引如在一實施例中，在進行多重PCR時，12個SNP位點分為單獨A、B管進行一次獨立的 PCR反應(A管擴增編號第1、2、3、4、6及11的SNP位點;B管擴增編號第7、8、9、10、12及5的5肥 位點），反應的體系為總體積，包含濃度為5-20ngAil的待測DNA樣本模板化1、10 X PCR 反應緩沖液（含Mgh)2.化1、5M Betain化1、酶系化1(包括25mM dNTP混合液0.化laOivVl 熱啟動化q酶0.化1、化八UDG酶0.化1、熱啟動酶稀釋液1.化1)、A管反應引物包括的正 向引物l(0.5iil)，反向引物l(0.15iil)，正向引物2(化1)，反向引物2(0.2iil)，正向引物3 (0.541)，反向引物3(0.1541)，正向引物4(0.541)，反向引物4(0.1541)，正向引物11(0.5^ 1)，反向引物11(0.1化1)，正向引物6(0.541)，反向引物6(0.化1)，補去離子水到2541;8管 反應引物包括20咖的正向引物7(0.扣1)，反向引物7(0.化1)，正向引物8(0.扣1)，反向引物 8(0.15iU)，正向引物9(0.5iU)，反向引物9(0.15iU)，正向引物10(0.5iU)，反向引物10 (O.lSiil)，正向引物5(0.5山），反向引物5(0.15山），正向引物12(0.5山），反向引物12(0.化 1)，補去離子水到25iil。
[0049] PCR擴增的條件可 W是但不限于:50°C、3min; 95°C、15min; 94°C、30秒，55°C、30秒， 72 °C、30秒，共45個循環;72 °C、7分鐘;最后4°C維持。
[(K)加]步驟S130,將擴增產物加入至添加有磁性微珠的0.2ml離屯、管中，在PCR儀上進行 58 °C反應10分鐘，待反應結束后，清洗容器。
[0051] 清洗容器時，將0.2ml離屯、管置于磁性裝置上，通過磁性裝置磁性吸引該磁性微 珠，防止被清洗出去。W上或W下設及到的添加有磁性微珠的容器的清洗操作同理。
[0052] 步驟S140,向0.2ml離屯、管中加入檢測試劑，仍然在PCR儀上58°C反應5分鐘，反應 結束后，將離屯、管置入液相忍片檢測儀中進行檢測。
[0053] 步驟S150,使用影像識別系統辨識磁性微珠的編碼信息，并檢測對應的巧光蛋白 信號，經分析處理得到檢測結果。
[0054] 如在一實施例中，可W將雜交產物上機檢測(Luminex液相忍片檢測儀參數設置為 Count 100!Doublet Discriminator Gate Value為5437-24807)。若捕獲探針的巧光信號 強度都高于背景巧光信號強度3倍W上，則該捕獲探針對應的DNA樣本檢出為陽性。
[0055] 結果分析:一般在檢測報告中會提供12個SNP型別結果，檢測突變型的SNP型別對 應的結果顯示為突變型"Positive"，野生型"Negative";檢測為雜合型別的SNP對應的結果 顯示為突變型"Positive",野生型"Positive";檢測為野生型型別的SNP對應的結果顯示為 突變型"Negative"，野生型"Positive"。
[0056] 上述用于檢測對黃嚷嶺氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒和方法針對12個黃嚷嶺氧 化酶過敏易感的SNP位點設計特異性擴增引物和捕獲探針，可分型檢測12個SNP位點的型 另IJ，特異性強，且使用磁性微珠固定捕獲探針，利用捕獲探針與擴增產物的雜交反應進行檢 測，靈敏度高，能夠較為快速的檢測待巧化NA樣本中12個SNP型別。
[0057] W下為一具體實施例部分：
[0058] 采用上述擴增引物、捕獲探針包被的磁性微球及檢測試劑等制備的試劑盒對已知 SNP型別的25個DNA樣本(樣本來源于中山大學附屬第S醫院風濕免疫科，通過Sanger測序 方法進行測序確認SNP型別)進行檢測，檢測結果如下表3和表4所示。從表3和表4可W看出， 各SNP位點基因型檢測經本發明所檢出的基因型吻合率非常高。
[0059] 表3樣本檢測結果
[0060]
[0066] 注：吻合率計算公式：（12個SNP位點分型都正確的人數*1化基因型非全部正確的 人數*基因分型正確的SNP位點個數)/(25*12)。
[0067] W上所述實施例的各技術特征可W進行任意的組合，為使描述簡潔，未對上述實 施例中的各個技術特征所有可能的組合都進行描述，然而，只要運些技術特征的組合不存 在矛盾，都應當認為是本說明書記載的范圍。
[0068] W上所述實施例僅表達了本發明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并 不能因此而理解為對發明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來 說，在不脫離本發明構思的前提下，還可W做出若干變形和改進，運些都屬于本發明的保護 范圍。因此，本發明專利的保護范圍應W所附權利要求為準。
【主權項】
1. 一種用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，其特征在于，包括擴增引物 及表面固定有捕獲探針的磁性微珠； 所述擴增引物選自如下引物中的至少一對：序列為SEQ ID No. 1與SEQ ID No.2的引 物、序列為SEQ ID No.3與SEQ ID No.4的引物、序列為SEQ ID No.5與SEQ ID No.6的引物、 序列為SEQ ID No.7與SEQ ID No.8的引物、序列為SEQ ID No.9與SEQ ID No. 10的引物、序 列為SEQ ID No.11 與SEQ ID No.12的引物、序列為SEQ ID No.13與SEQ ID No.14的引物、 序列為SEQ ID No. 15與SEQ ID No. 16的引物、序列為SEQ ID No. 17與SEQ ID No. 18的引 物、序列為SEQ ID No. 19與SEQ ID No. 20的引物、序列為SEQ ID No.21 與SEQ ID No. 22的 引物及序列為SEQ ID No.23與SEQ ID No.24的引物;所述擴增引物的反向引物的5'端連接 有檢測標記物； 對應的所述捕獲探針選自如下探針組中的至少一組：序列為SEQ ID No. 25與SEQ ID No. 26的探針組、序列為SEQ ID No. 27與SEQ ID No. 28的探針組、序列為SEQ ID No. 29與 SEQ ID No. 30的探針組、序列為SEQ ID No. 31與SEQ ID No. 32的探針組、序列為SEQ ID No. 33與SEQ ID No. 34的探針組、序列為SEQ ID No. 35與SEQ ID No. 36的探針組、序列為 SEQ ID No. 37與SEQ ID No. 38的探針組、序列為SEQ ID No.39與SEQ ID No.40的探針組、 序列為SEQ ID No.41與SEQ ID No.42的探針組、序列為SEQ ID No.43與SEQ ID No.44的探 針組、序列為SEQ ID No.45與SEQ ID No.46的探針組及序列為SEQ ID No.47與SEQ ID No. 48的探針組； 對應的所述磁性微珠至少有兩種，不同的磁性微珠具有不同的編碼信息，每條捕獲探 針對應一種磁性微珠。2. 如權利要求1所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，其特征在于， 所述擴增引物選自如下兩組中的至少一組:其中一組包括如下引物:序列為SEQ ID No.1與 SEQ ID No.2的引物、序列為SEQ ID No.3與SEQ ID No.4的引物、序列為SEQ ID No.5與SEQ ID No.6的引物、序列為SEQ ID No.7與SEQ ID No.8的引物、序列為SEQ ID No. 11與SEQ ID No. 12的引物及序列為SEQ ID No.21與SEQ ID No.22的引物； 另一組包括如下引物：序列為SEQ ID No. 9與SEQ ID No. 10的引物、序列為SEQ ID No. 13與SEQ ID No. 14的引物、序列為SEQ ID No. 15與SEQ ID No. 16的引物、序列為SEQ ID No. 17與SEQ ID No. 18的引物、序列為SEQ ID No. 19與SEQ ID No.20的引物及序列為SEQ ID No.23與SEQ ID No.24的引物。3. 如權利要求2所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，其特征在于， 所述擴增引物有12對，對應的，所述捕獲探針有12組，所述磁性微珠有24種。4. 如權利要求1~3中任一項所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒， 其特征在于，所述捕獲探針通過其5 '端帶有的氨基與所述磁性微珠表面的活化羧基反應后 包被在所述磁性微珠表面。5. 如權利要求1~3中任一項所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒， 其特征在于，還包括檢測試劑，所述檢測試劑含有能夠與所述檢測標記物反應結合的熒光 蛋白。6. 如權利要求5所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，其特征在于， 所述檢測標記物為生物素，所述熒光蛋白為鏈霉親和素標記的藻紅熒光蛋白。7. -種用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的方法，其特征在于，使用如權利要求1 ~6中任一項所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的試劑盒，所述用于檢測對黃 嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的方法包括如下步驟： 獲取待測DNA樣本； 使用所述擴增引物對所述待測DNA樣本進行PCR擴增，得到擴增產物； 將所述擴增產物加入至添加有所述磁性微珠的容器中，進行雜交孵育反應，待反應結 束后，清洗所述容器； 向所述容器中加入所述檢測試劑，震蕩反應，反應結束后，清洗所述容器； 使用影像識別系統辨識所述磁性微珠的編碼信息，并檢測對應的熒光蛋白信號，經分 析處理得到檢測結果。8. 如權利要求7所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的方法，其特征在于，所 述PCR擴增是使用如權利要求2中的兩組擴增引物分別對所述待測DNA樣本進行多重PCR擴 增。9. 如權利要求8所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的方法，其特征在于，進 行多重PCR擴增時，其中一組擴增引物中的各引物的添加量比例如下：SEQ ID No. 1:SEQ ID No.2:SEQ ID No.3:SEQ ID No.4:SEQ ID No.5:SEQ ID No.6:SEQ ID No.7:SEQ ID No.8: SEQ ID No.ll:SEQ ID No.l2:SEQ ID No.21:SEQ ID No.22=0.5:0.15:1:0.2:0.5:0.15: 0.5:0.15:0.5:0.15:0.5:0.1； 另一組擴增引物中的各引物的添加量比例如下：SEQ ID No.9:SEQ ID No. 10:SEQ ID No.13:SEQ ID No.14:SEQ ID No.15:SEQ ID No.16:SEQ ID No.17:SEQ ID No.18:SEQ ID No. 19:SEQ ID No.20: SEQ ID No.23:SEQ ID No.24 = 0.5:0.15:0.5:0.1:0.5:0.15:0.5: 0.15:0.5:0.15:0.5:0.l〇10. 如權利要求7~9中任一項所述的用于檢測對黃嘌呤氧化酶抑制劑過敏性的方法， 其特征在于，所述PCR擴增的條件是：50 °C、3min; 95 °C、15min; 94°C、30秒，55°C、30秒，72°C、 30秒，共45個循環;72 °C、7分鐘;最后4°C維持。
【文檔編號】C12Q1/68GK105861670SQ201610258032
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月21日
【發明人】杜予和, 陳萌萌, 楊劍鋒, 曾憲鍫, 馬淑雯
【申請人】廣州和康醫療技術有限公司, 廣州達安臨床檢驗中心有限公司, 廣州云康醫學科技研究院有限公司