天然黃酮Anastatin B的衍生物及制備和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明屬于新化合物制備和藥物領(lǐng)域，涉及天然黃酮Anastatin B的衍生物及制備和應(yīng)用，具體是兩個(gè)黃酮的衍生物制備及其在制備抗氧化和抗肝損傷藥物中的應(yīng)用，結(jié)構(gòu)式如下。本發(fā)明首次合成出天然黃酮Anastatin B的兩個(gè)衍生物，并首次利用體外化學(xué)評(píng)價(jià)法和細(xì)胞氧化損傷模型評(píng)價(jià)了化合物1和2的抗氧化活性，并運(yùn)用CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝損傷模型評(píng)價(jià)這兩個(gè)化合物的保肝活性。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于新化合物制備方法及藥物領(lǐng)域，尤其是天然黃酮Anastatin B的兩個(gè) 衍生物的制備及其在制備抗氧化和抗肝損傷藥物中的應(yīng)用。 天然黃酮Anastat i n B的衍生物及制備和應(yīng)用
【背景技術(shù)】
[0002] Anastatin B是含生草(Anastatica hierochuntica)中提取得到的一種黃酮類化 合物，有報(bào)道顯示Anastatin B衍生物具有良好的抗氧化活性，并對(duì)大鼠的原代肝細(xì)胞損傷 具有一定保護(hù)作用，有一定程度的對(duì)抗D-GalN誘導(dǎo)損傷的能力，在抗肝損傷藥物研究領(lǐng)域 也有應(yīng)用。
[0003] 由于Anastatin B本身具有良好的生物活性，所以可通過(guò)研究Anastatin B的衍生 物來(lái)尋找更好的抗氧化和抗肝損傷藥物。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供兩個(gè)黃酮的衍生物制備及其在制備抗氧化和抗肝損傷藥 物中的應(yīng)用，本發(fā)明合成出天然黃酮Anastatin B的兩個(gè)衍生物1和2,這兩個(gè)衍生物具有較 好的抗氧化活性及抗肝損傷活性，合成和純化方法簡(jiǎn)單。
[0005] 本發(fā)明所述Anastatin B的兩個(gè)衍生物1和2具有抗氧化活性，可以用于抗氧化治 療，可應(yīng)用于制備抗氧化藥物;所述天然黃酮Anastatin B的兩個(gè)衍生物1和2具有抗肝損傷 活性，可應(yīng)用于制備抗肝損傷藥物。
[0006] 本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0007] Anastatin B衍生物的結(jié)構(gòu)式如下：
[0008]
[0009] 而且，所述衍生物為4，8，9-三羥基-2-(4-羥基芐基)-2H-苯并呋喃并[2，3-g]苯并 呋喃-3-酮，（Z)-4,8,9-三羥基-2-(4-羥基亞芐基）-2H-苯并呋喃并[2,3-g]苯并呋喃-3-酮。
[00?0] Anastatin B兩個(gè)衍生物的制備。
[0011]
[0012] 兩個(gè)衍生物在制備治療抗氧化和抗肝損傷藥物中的應(yīng)用。所述化合物對(duì)抗氧化活 性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明此類化合物有抗氧化活性，同時(shí)所述化合物對(duì)保肝活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié) 果表明此類化合物有抗肝損傷活性。
[0013] 兩個(gè)衍生物在制備治療抗氧化和抗肝損傷藥物中的應(yīng)用。所述化合物用作制備治 療肝損傷藥物和抗氧化藥物。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果：
[0015] 1、本發(fā)明合所述的Anastatin B的兩個(gè)衍生物1和2的合成、純化方法簡(jiǎn)單。這類衍 生物具有抗氧化和抗肝損傷活性，本發(fā)明開(kāi)拓了一類新型抗氧化和抗肝損傷藥物的研究方 向。
[0016] 2、所述的Anastatin B的兩個(gè)衍生物1和2的制備及其在制備抗氧化和抗肝損傷藥 物中的應(yīng)用，其特征在于:所述化合物對(duì)抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明此類化合物有抗氧 化活性，同時(shí)所述化合物對(duì)保肝活性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果表明此類化合物有抗肝損傷活性。 [0017] 3、所述的Anastatin B的兩個(gè)衍生物1和2的制備及其在制備抗氧化和抗肝損傷藥 物中的應(yīng)用，其特征在于:所述化合物用作制備治療肝損傷藥物和抗氧化藥物。
【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1為compound 1的PC-12氧化損傷模型抗氧化活性測(cè)試結(jié)果；
[0019] 圖2為compound 2的PC-12氧化損傷模型抗氧化活性測(cè)試結(jié)果；
[0020] 圖3為化合物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷血衆(zhòng)AST的影響；
[0021 ]圖4為化合物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷血衆(zhòng)ALT的影響；
[0022] 圖5為化合物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷血漿LDH的影響；
[0023] 圖6為化合物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷血清MDA的影響；
[0024] 圖7為化合物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷血衆(zhòng)GSH的影響；
[0025]圖8為4,8,9_三羥基-2-(4-羥基芐基)-2H-苯并呋喃并[2,3-g]苯并呋喃-3-酮的 核磁共振氫譜；
[0026] 圖9為(Z)-4,8,9-三羥基-2-(4-羥基亞芐基)-2H-苯并呋喃并[2,3-g]苯并呋喃- 3-酮的核磁共振氫譜。
【具體實(shí)施方式】
[0027]為了理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明；下述實(shí)施例是說(shuō)明性 的，不是限定性的，不能以下述實(shí)施例來(lái)限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0028] 本發(fā)明基于Anastatin B有很好的生物活性，首次合成出Anastatin B的兩個(gè)衍生 物1和2,這類衍生物具有較好的抗氧化活性及抗肝損傷活性。其總還原能力、DPPH ·自由基 清除能力和ABTS ·自由基清除均與Vc相當(dāng)，且均具有良好的細(xì)胞水平抗氧化損傷活性；同 時(shí)整體水平上對(duì)CCl4誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷體現(xiàn)出良好的保護(hù)作用，有效抑制了肝損傷指 標(biāo)ASL、ALT、LDH和MDA的活性及含量;提升了動(dòng)物體內(nèi)重要的保護(hù)酶GSH含量。
[0029]⑴利用體外化學(xué)法評(píng)價(jià)了 1和2的總還原能力、ABTS ·自由基清除能力及DPPH ·自 由基清除能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：1和2的總還原能力分別為221 · 56g/mol和193 · 66g/mol; ABTS ·自由基清除力的EC5q值分別為2.40mM和2.74mM;DPPH ·自由基清除力的Ec5q值分別 為0.13mM和0.16mM。以上結(jié)果說(shuō)明：1和2都具有良好的體外抗氧化活性和清除自由基的能 力。
[0030] ⑵進(jìn)一步在細(xì)胞水平上驗(yàn)證了 1和2的細(xì)胞毒性及對(duì)H2O2誘導(dǎo)PC-12細(xì)胞氧化損傷 的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:單獨(dú)使用1〇〇μΜ的1或2處理PC-12細(xì)胞48h后，細(xì)胞的存活率分 別為31.96%和60.77%，說(shuō)明2的細(xì)胞毒性較??；當(dāng)使用ΙμΜ的化合物對(duì)PC-12細(xì)胞進(jìn)行預(yù)保 護(hù)時(shí)，2處理組能有效的抑制H 2O2誘導(dǎo)的PC-12細(xì)胞氧化損傷，細(xì)胞存活率為93.75%，是1處 理組細(xì)胞存活率(35.77% )的2.6倍。以上結(jié)果說(shuō)明：與1相比較，2的細(xì)胞毒性更低，對(duì)H2O2誘 導(dǎo)PC-12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用更強(qiáng)。
[0031] ⑶利用四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型評(píng)價(jià)了 1和2的保肝活性。實(shí)驗(yàn) 結(jié)果顯示:與CCl4模型組相比，1預(yù)處理組和2預(yù)處理組的肝損傷指標(biāo)如ALT、AST、LDH、MDA的 活性和含量明顯降低，而對(duì)肝損傷起保護(hù)作用的GSH含量顯著升高，且2預(yù)處理組的保護(hù)效 果效果優(yōu)于I (p〈〇. 01)。
[0032]⑷Anastatin B的衍生物1和2合成、純化方法簡(jiǎn)單并具有較好的抗氧化及保肝活 性，在抗氧化和抗肝損傷藥物的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用方面具有廣闊的前景。
[0033]本發(fā)明所涉及的化合物在抗氧化及抗肝損傷藥物中的應(yīng)用，包括但不限于在治療 肝損傷藥物中的應(yīng)用。
[0034]本發(fā)明提供化合物1和2 LjrsLJ,、
[0035]
[0036] 本發(fā)明特別包括化合物：
[0037] (1 )4，8，9-三羥基-2-(4-羥基芐基)-2H-苯并呋喃并[2，3-g]苯并呋喃-3-酮
[0038] (2)(2)-4,8,9-三羥基-2-(4-羥基亞芐基)-2!1-苯并呋喃并[2,31]苯并呋喃-3-酮
[0039] 化合物1和2的合成路線
[0040]
[0041] 說(shuō)明 1
[0042] (Z)-4,8,9-三羥基-2-(4-羥基亞芐基)-2H-苯并呋喃并[2,3-g]苯并呋喃-3-酮
[0043] 取(Z)-7-溴-4,6-二異丙氧基-2-(4-異丙氧基亞芐基)苯并呋喃-3(2H)_酮4.76g (lO.Ommol)，3,4_亞甲基苯棚酸1.83g(ll .Ommol)，Pd(PPh3)4l · 16g(l .Ommol)，Cs2C〇36.53g (20mmoI)，放入50mL支口反應(yīng)瓶中，加入20mL N，N-二甲基甲酰胺，氬氣保護(hù)下，加熱到100 °C下反應(yīng)12小時(shí)。TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，將反應(yīng)液冷卻至室溫，然后倒入200mL冰水中，用二 氯甲烷萃取（3X50mL)，合并有機(jī)相，經(jīng)飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，用展開(kāi)劑石油 醚 ：乙酸乙酯=30:1，200-300目硅膠柱層析純化，得(2)-7-(苯并[(1][1，3]二氧雜環(huán)戊烯- 5-基)-4,6-二異丙氧基-2-(4-異丙氧基亞芐基)苯并呋喃-3(2H)_酮3.88g，產(chǎn)率75%。
[0044] 取(Z)-7-(苯并[d][1， 3]二氧雜環(huán)戊烯-5-基)-4,6_二異丙氧基-2- (4-異丙氧基 亞芐基)苯并呋喃-3(2H)_酮5.17g(10.0mmol)，放入200mL圓底燒瓶中，加入20mL無(wú)水二氯 甲烷，冰浴攪拌下，緩慢滴加70mL三氯化硼溶液(70.0 mmoI，lmo 1/L的二氯甲烷溶液），滴加 完成后，將反應(yīng)液加熱到40°C冷凝回流4小時(shí)。TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，將反應(yīng)溶液冷卻至室 溫，再將反應(yīng)液慢慢倒入IOOmL冰水中，攪拌10分鐘，抽濾，并用水洗滌濾餅，再將濾餅干燥 后，得到（Z)-7-(3,4-二羥基苯基）-4,6_二羥基-2-(4-羥基亞芐基）苯并呋喃-3(2H)_酮 3.74g，產(chǎn)率 99%。
[0045] 取(Z)-7-(3，4_二羥基苯基)-4,6-二羥基-2-(4-羥基亞芐基)苯并呋喃-3(2H)_酮 378mg(lmmol)放入25mL圓底燒瓶中，加入IOmL N，N-二甲基甲酰胺，攪拌下加入Ag2〇 463mg (2mmol)，50°C加熱反應(yīng)4小時(shí)。TLC檢測(cè)反應(yīng)完全后，將反應(yīng)溶液冷卻至室溫，再向反應(yīng)溶液 中加入5mL無(wú)水甲醇，攪拌30分鐘。用硅藻土過(guò)濾掉反應(yīng)液中的固體，并用乙酸乙酯洗滌，收 集反應(yīng)液，將反應(yīng)液倒入100mL水中，用乙酸乙酯萃取(3X IOOmL)，合并有機(jī)相，經(jīng)飽和食鹽 水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓蒸干后，得到（Z)-4,8,9-三羥基-2-(4-羥基亞芐基)-2H-苯 并呋喃并[2，3-g]苯并呋喃-3-酮282mg，產(chǎn)率75%。
[0046] 4^^(4001^,01^0)311.18(8,111),10.25(8,111),9.48(8,111),9.44(8,1!!), 7.92(d，J = 8.4Hz，2H)，7.40(s，lH)，7.08(s，lH)，7.00(d，J = 8.0Hz，2H)，6.79(s，lH)，6.76 (s，lH)〇
[0047] 說(shuō)明 2
[0048] 4,8,9_三羥基-2-(4-羥基芐基)-2H-苯并呋喃并[2,3-g]苯并呋喃-3-酮 [0049] 取(Z)-4,8,9-三羥基-2-(4-羥基亞芐基)-2H-苯并呋喃并[2,3-g]苯并呋喃-3-酮 376mg(lmmol)，IOmL圓底燒瓶中，加入5mL無(wú)水乙醇，攪拌下加入Pd/C(10% )40mg，用氫氣球 提供氫氣和壓力，室溫下攪拌12小時(shí)。用硅藻土過(guò)濾掉反應(yīng)液中的固體，并用無(wú)水乙醇洗 滌，收集反應(yīng)液，減壓蒸干后，得到4，8，9-三羥基-2-(4-羥基芐基)-2H-苯并呋喃并[2，3-g] 苯并呋喃-3-酮370mg，產(chǎn)率98%。
[0050] 1H NMR(400MHz，DMS0)S10.88(s，1H)，9.32(s，1H)，9.23(s，1H)，9.20(s，1H)，7.11 (m,3H),7.01(s,lH) ,6.66(d ,J = 8.4Hz , 2H), 6.54(s, 1H), 5.04(m, 1H), 3.18(dd J= 14.8, 3.6Hz,lH),2.91(dd ,J = 14.8,8.0Hz,lH).
[0051 ] 實(shí)施例1
[0052]體外化學(xué)法評(píng)價(jià)了 I和2的總還原能力、ABTS ·自由基清除能力及DPPH ·自由基清 除能力測(cè)試。根據(jù)常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)1和2的總還原能力、ABTS ·自由基清除能力及DPPH · 自由基清除能力，結(jié)果如表1所示。 「00531 丟1 ik會(huì)物優(yōu)孫水平的碰究 LUUDDJ 頭施觀
[0056] Compound 1和2對(duì)PC-12細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用研究
[0057]細(xì)胞培養(yǎng)使用的培養(yǎng)液為含1 %的青霉素-鏈霉素溶液，10 %的胎牛血清的PRMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)條件為37°C、含5%C02的恒溫培養(yǎng)箱。根據(jù)實(shí)驗(yàn)PC-12細(xì)胞氧化損傷 模型實(shí)驗(yàn)條件，對(duì)3個(gè)化合物進(jìn)行抗氧化測(cè)試。根據(jù)化合物溶解度及細(xì)胞活性測(cè)試常用濃 度，用DMSO作為溶劑將化合物稀釋為不同濃度梯度，在實(shí)驗(yàn)體系中，同時(shí)設(shè)置加入待測(cè)化合 后加入H 2O2組和H2O組作為對(duì)照組，加入H2O組用作測(cè)試化合物對(duì)PC-12細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。 根據(jù)構(gòu)建的氧化應(yīng)激模型，對(duì)compound 1和compound 2的細(xì)胞水平氧化損傷保護(hù)作用進(jìn)行 了測(cè)試，進(jìn)行三次平行實(shí)驗(yàn)，其實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1和圖2。
[0058] 實(shí)施例3
[0059] Compound 1和2對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用研究
[0060] (1)分組與給藥
[0061] 對(duì)72只小鼠（雌)進(jìn)行平均隨機(jī)分成9組，每組8只，分別為空白組、模型組、聯(lián)苯雙 酯滴丸組、compound 1高劑量組、compound 1中劑量組、compound 1低劑量組、compound 2 高劑量組、compound 2中劑量組、compound 2低劑量組。
[0062] 本實(shí)驗(yàn)給藥方式為灌胃給藥，在第一次給藥前禁食12小時(shí)，自由飲水。稱量后按照 下表對(duì)各組小鼠進(jìn)行給藥。
[0063] 表2小鼠給藥劑量
[0066] (2)造模與取樣
[0067]從第一次給藥開(kāi)始，每天給藥1次，連續(xù)給藥10天。第十天給藥1小時(shí)后，對(duì)非空白 組小鼠腹腔注射〇.3mL 0.25%四氯化碳花生油進(jìn)行染毒，對(duì)空白組小鼠腹腔注射0.3mL普 通花生油進(jìn)行染毒。
[0068] 染毒20h后對(duì)所有小鼠取血，放置于肝素鈉 EP管中，然后在4 °C 3000r/min離心10分 鐘后，吸取上層血清置于冰上待用。
[0069] 對(duì)每只小鼠取出0.1-0.2g肝臟。用移液槍吸取9倍肝臟樣本重量的0.86%預(yù)冷生 理鹽水，取其2/3加入玻璃勻漿器中。將肝臟樣本剪碎后倒入玻璃勻漿器中，將剩余的1/3預(yù) 冷的0.86%生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿器中。一手握住勻漿管 下端插入冰上，另一手將搗桿豎直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨6-8分鐘確保肝臟組織被充分 研碎，使組織勻漿化。在4°C3000r/min離心10分鐘后，吸取上層清液待用。
[0070] (3)AST/ALT/LDH/MDA/GSH 檢測(cè)試劑盒
[0071] 按照試劑盒說(shuō)明書測(cè)定AST/ALT/LDH/MDA/GSH的含量及活性。結(jié)果如圖3-圖7所 不。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 天然黃酮Anastatin B的衍生物，其特征在于:衍生物的結(jié)構(gòu)如下：2. -種制備權(quán)利要求1所述的天然黃酮A n a s t a t i η B的衍生物的方法，其特征在于：制 備方法如下：3. 天然黃酮Anastatin Β的衍生物，其特征在于:衍生物的結(jié)構(gòu)如下：4. 一種制備權(quán)利要求3所述的天然黃酮Anastatin B的衍生物的方法，其特征在于：制 備方法如下：5.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的Anastatin B的衍生物在制備治療抗氧化和抗肝損傷藥物 中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK105859737SQ201610325752
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年5月17日
【發(fā)明人】郁彭, 徐傳明, 潘國(guó)軍, 滕玉鷗, 向岑, 楊珂, 馬艷濤, 李旭哲, 陳明朗, 沈棣, 蘇超, 蘆逵
【申請(qǐng)人】天津科技大學(xué)