一種結合層層組裝技術和主客體相互作用構建生物活性表面的方法
【專利摘要】本發明涉及生物醫用工程以及高分子材料領域，提供了一種結合層層組裝技術和主客體相互作用構建生物活性表面的方法。本發明通過簡單的共聚合技術將客體分子金剛烷（Ada）基團引入到聚丙烯酸（PAA）上得到丙烯酸單體與丙烯酸金剛烷甲醇酯單體的共聚物（P(AA?Ada)）；而后利用層層組裝（LbL）技術在多種氨基化的基材表面沉積P(AA?Ada)和聚丙烯胺（PAH）的聚電解質多層膜。利用聚電解質多層膜上所含有的大量金剛烷基團可以高密度地固定修飾了不同生物分子的β?環糊精（β?CD）衍生物，從而得到具有對應功能的生物活性表面。本發明的突出特點是：該方法具有普適性，可應用于多種不同化學性質、形狀的基材；且構建的生物活性表面性能可調，適用于較廣的生物醫用領域。
【專利說明】
一種結合層層組裝技術和主客體相互作用構建生物活性表面的方法
技術領域
[0001]本發明涉及生物醫用功能高分子材料領域，具體涉及一種結合層層組裝技術和主客體相互作用在多種基材上構建生物活性表面的制備方法。
【背景技術】
[0002]生物活性表面是指將蛋白質、多肽、核酸、多糖等生物功能分子通過物理或化學方法固定在合成材料表面，進而賦予表面特定的生物活性功能(比如生物分子識別性能，殺菌性能，抗凝血性能，抗污性能等)，這在諸多生物醫用工程和生物技術領域有著廣泛應用。因此，如何簡單、高效、普適地對生物材料進行表面改性以構建生物活性表面具有重要意義。通常生物活性表面的構建是首先在材料表面形成一層基質，而后將生物功能分子固定或負載在基質中。聚合物由于其生物相容性好，具有多個活性位點，功能性強，易于表面改性等優點被廣泛采用作為基質。通常采用的聚合物基質制備方法主要包括自組裝，Langmuir-Blodgett膜，聚合物涂層，表面引發聚合，層層組裝技術等。這其中，層層組裝技術是一種基于靜電相互作用將帶有不同電荷的聚合物交替層層吸附在基材表面的改性方法。與其他方法相比，層層組裝技術具有操作簡單、聚合物膜參數方便控制，幾乎可以適用于任何形狀和物理性質的基材等多種優點。特別地，層層組裝技術形成的聚合物膜具有三維結構，非常適合負載固定生物活性分子，通過簡單地改變多層膜的厚度，便可以有效地控制固定生物分子的數量。
[0003]將生物分子固定在材料表面的常見方法是采用化學方法將生物分子通過共價鍵結合在基質上。雖然該方法結合力較強，但通常需要復雜的操作和采用有機溶劑等。近年來，采用基于弱相互作用的親和固定受到廣泛地關注。主客體相互作用是一種常見的超分子化學作用，事先將主體分子(或客體分子)進行生物分子后修飾，便可以通過主客體相互作用在溫和的條件下簡便地實現生物分子的固定。環糊精(β-CD)是一種常見的主體分子，其疏水性的空腔方便多種客體小分子的嵌入。β-CD本身具有多個方便活化的羥基，可以實現在一個分子上結合多個生物小分子配體，從而提高局部配體密度進而使得后修飾的β-CD具有更高的生物活性。此外，從化學角度出發，我們可以對β-CD進行后修飾得到具有不同功能的⑶衍生物。應用主客體相互作用，可以通過簡單地混合兩種甚至多種生物分子后修飾的β-⑶衍生物，實現賦予同一表面上雙功能甚至多功能。
[0004]本發明選用層層組裝常用的聚陰離子/聚陽離子對聚丙烯酸/聚丙烯胺(ΡΑΑ/ΡΑΗ)和典型的主客體對環糊精/金剛烷(β-CD/Ada)作為模型。首先通過簡單的共聚合技術將Ada基團引入到聚陰離子PAA上得到共聚物P(AA-Ada)，而后利用層層組裝技術在多種基材表面沉積P(AA-Ada)/PAH多層膜，最后通過主客體相互作用將修飾有生物活性分子的β-⑶引入到聚電解質多層膜中得到具有對應功能的生物活性表面。
【發明內容】
[0005]本發明所要解決的技術問題是:針對目前生物活性表面制備方法所存在的反應過程復雜、基材有限、固定生物活性分子種類有限、功能單一的問題，提供一種操作簡單、具有普適性的，可以固定多種生物活性分子，賦予表面多種生物功能的表面改性方法。
[0006]本發明解決其技術問題采用以下的技術方案:
本發明提供的一種構建具有對應生物功能的材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
(1)聚電解質多層膜改性表面的制備:
將氨基化的基材浸泡在丙烯酸單體與1-丙烯酸金剛烷甲醇酯單體的共聚物(P(AA-Ada))的溶液中一段時間，然后再浸泡在聚丙烯胺(PAH)溶液中一段時間，即在氨基化的基材表面得到一層P(AA-Ada)/PAH雙分子層，重復浸泡若干次，即得到具有若干層P(AA-Ada)/PAH雙分子層的聚電解質多層膜改性表面；
(2)聚電解質多層膜改性表面固定生物活性分子:
將所得的具有聚電解質多層膜改性表面置于含有修飾了生物活性分子的β-CD衍生物的溶液中進行反應，即得到固定有生物活性分子的聚電解質多層膜改性表面。
[0007]本發明提供的另一種構建具有對應生物功能的材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:
(1)含有金剛烷基團的聚陰離子P(AA-Ada)的制備:
按一定的摩爾比將丙烯酸單體、1-丙烯酸金剛烷甲醇酯單體、鏈轉移劑和引發劑加入到反應溶液中進行聚合反應，反應后采用沉降分離提純的方法即得含有金剛烷基團的聚陰尚子P(AA-Ada)；
(2)聚電解質多層膜改性表面的制備:
將氨基化的基材浸泡在丙烯酸單體與1-丙烯酸金剛烷甲醇酯單體的共聚物(P(AA-Ada))的溶液中一段時間，然后再浸泡在聚丙烯胺(PAH)溶液中一段時間，即在氨基化的基材表面得到一層P(AA-Ada)/PAH雙分子層，重復浸泡若干次，即得到具有若干層P(AA-Ada)/PAH雙分子層的聚電解質多層膜改性表面；
(3)聚電解質多層膜改性表面固定生物活性分子:
將所得的具有聚電解質多層膜改性表面置于含有修飾了生物活性分子的β-CD衍生物的溶液中進行反應，即得到固定有生物活性分子的聚電解質多層膜改性表面。
[0008]進一步，所述的生物活性分子為生物素、甘露糖或精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸多肽。
[0009]進一步，修飾有所述生物素分子的β-CD衍生物的制備過程為:將炔丙基生物素和7個疊氮基團修飾的⑶(β-⑶-(N3) 7 )進行點擊反應，制得生物素修飾的⑶。
[0010]進一步，修飾有所述甘露糖分子的β-CD衍生物的制備過程為:將炔丙基甘露糖和7個疊氮基團修飾的⑶(β-⑶-(N3) 7 )進行點擊反應，制得甘露糖修飾的⑶。
[0011]進一步，修飾有所述精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸多肽分子的β-CD衍生物的制備過程為:將炔丙基-精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸多肽和7個疊氮基團修飾的β-CD(P-CD-(N3)7)進行點擊反應，制得精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸多肽修飾的β-CD。
[0012]進一步，所述氨基化的基材為單晶硅或玻璃，所述氨基化的單晶硅片或玻璃片的制備過程為:將單晶硅片或玻璃片置于3-氨基丙基-三乙氧基硅烷(APTES)的甲苯溶液中反應一段時間，得到表面氨基化的單晶硅或玻璃基材。
[0013]進一步，所述氨基化的基材為鍍金單晶硅片，所述氨基化的鍍金單晶硅片的制備過程為:將鍍金單晶硅片置于巰基乙胺鹽酸鹽的水溶液中反應一段時間，得到表面氨基化的鍍金單晶硅基材。
[0014]進一步，修飾了生物活性分子的β-CD衍生物的溶液為水溶液、磷酸鹽緩沖溶液或其他可以溶解相應生物活性分子的溶液。
[0015]進一步，所述的聚合為可逆加成斷裂鏈轉移聚合，所述鏈轉移劑為2_(苯基硫代甲酰硫基)丙酸;所述的引發劑為偶氮二異丁腈、偶氮二異庚腈、過氧化二苯甲酰、過氧化二碳酸二乙基己酯、異丙苯過氧化氫、過硫酸鉀一亞硫酸鹽體系或過氧化氫一亞鐵酸鹽體系。
[0016]進一步，所述含鏈轉移劑的溶液為N，N_二甲基甲酰胺溶液，所述含引發劑的溶液為N，N_二甲基甲酰胺溶液。
[0017]進一步，7個疊氮基團修飾的f3-CD(f3-CD_(N3)7)的制備方法為:先將β-CD六號位的羥基進行溴取代(P-CD-(Br)7)或碘取代(i3-CD-(I)7)，然后用疊氮化鈉進行疊氮化。
[0018]本發明提供的一種構建具有對應生物功能的材料的制備方法，其包括以下詳細具體步驟:
(I)含有金剛烷基團的聚陰離子P(AA-Ada)的制備:
在反應裝置中，按一定的摩爾比將丙烯酸單體、1-丙烯酸金剛烷甲醇酯單體、鏈轉移劑和引發劑加入反應溶液中，在氮氣保護下攪拌反應，反應溫度為65°C，反應時間為24小時；反應結束后用乙醚沉降，分離提純后即可得到含有金剛烷基團的聚陰離子P(AA-Ada);所述P(AA-Ada)為1-丙烯酸金剛烷甲醇酯單體與丙烯酸單體的共聚物的英文縮寫；
所述鏈轉移劑為2_(苯基硫代甲酰硫基)丙酸;所述的引發劑為偶氮二異丁腈等;所述的反應溶液為DMF溶液。
[0019](2)聚電解質多層膜改性表面的制備:
配制聚電解質溶液，包括聚陰離子P (AA-Ada)溶液和聚陽離子PAH溶液;將氨基化的基材浸泡在P(AA-Ada)溶液中，經過清洗去除結合較弱的聚合物后再浸泡在PAH溶液中，經過清洗后即可在表面得到一個P(AA-Ada)/PAH的雙分子層，此過程重復若干次最后達到需要的層數，得到聚電解質多層膜改性表面；
所述的聚電解質溶液為PH值為5.0的醋酸/醋酸鈉緩沖溶液;從聚電解質溶液中取出的表面的清洗溶液為PH值為5.0的醋酸/醋酸鈉緩沖溶液;所述氨基化的基材為單晶硅、玻璃或鍍金單晶硅。
[0020]所述氨基化的基材的制備過程包括以下步驟:
(a)將洗凈的單晶娃片或玻璃片先用“piranha”溶液(硫酸:雙氧水=7:3，體積比)進行預處理，然后置于3-氨基丙基-三乙氧基硅烷(APTES)的甲苯溶液中反應過夜，得到表面氨基化的單晶硅或玻璃基材；
(b )將經過紫外臭氧儀洗凈的鍍金單晶硅片用氨水，雙氧水和去離子水的混合溶液(氨水:雙氧水:去離子水=1:1:5,體積比)進行預處理，然后置于巰基乙胺鹽酸鹽的水溶液中反應過夜，得到表面氨基化的鍍金單晶硅基材；
(3)聚電解質多層膜改性表面固定生物活性分子:
將所得的聚電解質多層膜改性表面置于含有修飾了生物分子的β-CD衍生物的溶液中進行反應，反應溫度為室溫，反應時間為12?24小時，反應結束后用去離子水清洗表面，即可得到固定有生物活性分子的聚電解質多層膜改性表面；
所述的生物活性分子為生物素、甘露糖和REDV多肽;所述的修飾了生物活性分子的β-CD衍生物的溶液為水溶液、磷酸鹽緩沖溶液或其他可以溶解相應生物活性分子的溶液。[0021 ]所述修飾有生物活性分子的β-CD衍生物的制備過程包括以下步驟:
(a ) 7個疊氮基團修飾的β-CD (β-CD- (N3) 7)的制備；
(b)生物素修飾的β-⑶的制備:
在反應裝置中，先加入β_θΗΝ3)7和b1tin-PEG4_alkyne，而后在氮氣保護下加入催化劑/配體溶液，攪拌反應，反應溫度為50°C，反應時間為36小時，反應結束后將混合溶液用MffCO 1000的透析袋透析，冷凍干燥后即可得到生物素修飾的⑶。
[0022](C)甘露糖修飾的β-⑶的制備:
氮氣保護下將1-(2’_炔丙基)-a-D_甘露糖和β-⑶-(Ν3)7加入催化劑體系溶液中，進行點擊反應，反應溫度為為50°C，反應時間為24小時，反應結束后除去溶劑，用無水甲醇離心收集沉淀，提純后即可得到甘露糖修飾的⑶。
[0023](d)REDV多肽修飾的β-CD的制備:
氮氣保護下將炔丙基-REDV和P-CD-(N3)7加入催化劑體系溶液中，進行點擊反應，反應溫度為為50°C，反應時間為24小時，反應后處理為使用MffCO 500的透析袋透析，冷凍干燥即可獲得REDV多肽修飾的β-⑶。
[0024]優選的，步驟(a)中所述的制備方法為以下一種或者兩種:
先將β-CD六號位的羥基進行溴取代(P-CD-(Br)7),然后用疊氮化鈉進行疊氮化；
先將β-CD六號位的羥基進行碘取代(P-CD-(I)7),然后用疊氮化鈉進行疊氮化。
[0025]優選的，步驟(b)中所述的催化劑/配體溶液為二甲基亞砜溶液，所述催化劑/配體體系為2，2 ’ -聯吡啶/溴化銅等。
[0026]優選的，步驟(C)中所述的催化劑溶液為二甲基亞砜溶液，所述催化劑/配體體系為2，2’-聯吡啶/溴化銅等。
[0027]優選的，步驟(d)中所述的催化劑體系溶液為二甲基亞砜/水混合溶液，所述催化體系為硫酸銅/抗壞血酸鈉等。
[0028]經過上述步驟，最終得到具有對應生物功能的高密度固定生物功能分子的生物活性表面。
[0029]本發明與現有技術相比具有以下主要的優點:
本發明提供的方法為結合層層組裝技術和主客體相互作用制備生物活性表面的方法。與現有技術相比，本發明具有以下突出特點:
I.操作簡單、易行:層層組裝及主客體反應條件溫和，能夠在室溫，水溶液環境下完成。
[0030]2.適用性較廣:層層組裝技術構建聚電解質多層膜的方法可以應用于不同化學性質，不同形狀的基材，可以在任何含有氨基的基材表面實現，適用于如生物檢測、組織工程、蛋白質分離純化等許多生物醫用領域。
[0031]3.表面性能可調:一方面可以簡單地通過改變層層組裝層數控制負載生物分子的容量，另一方面可以根據需要設計不同生物功能分子修飾的β-CD賦予表面不同的生物功能。例如，在利用本方法得到的聚電解質多層膜表面固定生物素修飾的β-CD后，可以選擇性結合親和素(見圖1);在表面固定甘露糖修飾的β-CD后，可以特異性的吸附刀豆蛋白(ConA)(見圖2);在表面固定REDV多肽修飾的β-CD后，可以促進表面內皮細胞的黏附(見圖3)。
【附圖說明】
[0032]圖1為單晶硅片聚電解質多層膜表面固定生物素修飾的β-CD前后表面對熒光修飾的親和素的吸附情況；
圖2為鍍金單晶硅片聚電解質多層膜表面固定甘露糖修飾的β-CD前后表面對熒光修飾的刀?蛋白的吸附情況。
[0033]圖3為鍍金單晶硅片基材上聚電解質多層膜表面固定REDV多肽修飾的β-CD前后表面對內皮細胞的黏附情況。
【具體實施方式】
[0034]本發明提供的結合層層組裝技術和主客體相互作用構建生物活性表面的方法，是先對基材表面進行氨基化預處理，再將聚電解質P(AA-Ada)與PAH通過層層組裝技術在表面沉積得到含有Ada基團的聚電解質多層膜。最后利用Ada與β-CD之間的主客體相互作用，于聚電解質多層膜表面固定修飾有不同生物活性分子的β-CD，賦予表面對應的生物功能。
[0035]下面通過實施例，對本發明作進一步闡述，但并不限定本發明。
[0036]實施例1
結合層層組裝技術與主客體相互作用于單晶硅片表面構建具有生物分子識別功能的表面
將用丙酮溶液超聲洗凈的單晶娃片用“piranha”溶液(硫酸:雙氧水=7:3，體積比)進行預處理，然后置于3-氨基丙基-三乙氧基硅烷(APTES)的甲苯溶液中反應18小時，即得到表面氨基化的單晶硅片。分別配制聚陰離子P(AA-Ada)溶液和聚陽離子PAH溶液，溶劑為pH值為5.0的濃度為0.0 5摩爾/升的醋酸/醋酸鈉緩沖溶液。將氨基化的單晶硅片浸泡在P(AA-Ada)溶液中，經過醋酸/醋酸鈉緩沖溶液清洗去除結合較弱的聚合物后再浸泡在PAH溶液中，經過清洗后在表面得到一個P(AA-Ada)/PAH的雙分子層，此過程重復若干次最后達到需要的層數，即可得到聚電解質多層膜改性的單晶硅片。
[0037]先將β-CD六號位的羥基進行溴取代(P-CD-(Br)7),然后用疊氮化鈉進行疊氮化制備7個疊氮基團修飾的i3-CD(i3_CD-(N3)7);最后將P-CD-(N3)7和炔丙基生物素進行點擊反應，得到生物素修飾的0-CD(P-CD-(b1tin)7)。
[0038]將上述聚電解質多層膜改性的單晶硅片置于I毫摩爾每升的β-⑶_(b1tin)7水溶液中，并在室溫下反應過夜。反應結束后用水清洗表面，即可得到固定了生物素的具有生物分子識別功能的表面。
[0039]實施例2
結合層層組裝技術與主客體相互作用于鍍金單晶硅片表面構建具有特異性吸附刀豆蛋白功能的表面
將用經過紫外臭氧儀洗凈的鍍金單晶硅片用氨水，雙氧水和去離子水的混合溶液(氨水:雙氧水:去離子水=1:1:5,體積比)進行預處理，然后置于巰基乙胺鹽酸鹽的水溶液中反應過夜，即得到表面氨基化的鍍金單晶硅片。分別配制聚陰離子P(AA-Ada)溶液和聚陽離子PAH溶液，溶劑為pH值為5.0的濃度為0.05摩爾/升的醋酸/醋酸鈉緩沖溶液。將氨基化的鍍金單晶硅片浸泡在P(AA-Ada)溶液中，經過醋酸/醋酸鈉緩沖溶液清洗去除結合較弱的聚合物后再浸泡在PAH溶液中，經過清洗后在表面得到一個P(AA-Ada)/PAH的雙分子層，此過程重復若干次最后達到需要的層數，即可得到聚電解質多層膜改性的鍍金單晶硅片。
[0040]先將β-CD六號位的羥基進行溴取代(P-CD-(Br)7),然后用疊氮化鈉進行疊氮化制備7個疊氮基團修飾的f3-CD(f3-CD-(N3)7);最后將f3-CD-(N3)7和1-(2’_炔丙基)-a-D_甘露糖進行點擊反應，得到甘露糖修飾的β-⑶(β-CD- (mannos e) 7)。
[0041]將上述聚電解質多層膜改性的鍍金單晶硅片置于I毫摩爾每升的β-CD-(Hiannose)7水溶液中，并在室溫下反應過夜。反應結束后用水清洗表面，即可得到固定了甘露糖的具有特異性吸附刀?蛋白(Con Α)功能的表面。
[0042]實施例3
結合層層組裝技術與主客體相互作用于鍍金單晶硅片表面構建具有促進內皮細胞黏附功能的表面
將用經過紫外臭氧儀洗凈的鍍金單晶硅片用氨水，雙氧水和去離子水的混合溶液(氨水:雙氧水:去離子水=1:1:5，體積比)進行預處理，然后置于巰基乙胺鹽酸鹽的水溶液中反應過夜，即得到表面氨基化的鍍金單晶硅片。分別配制聚陰離子P(AA-Ada)溶液和聚陽離子PAH溶液，溶劑為pH值為5.0的濃度為0.05摩爾/升的醋酸/醋酸鈉緩沖溶液。將氨基化的鍍金單晶硅片浸泡在P(AA-Ada)溶液中，經過醋酸/醋酸鈉緩沖溶液清洗去除結合較弱的聚合物后再浸泡在PAH溶液中，經過清洗后在表面得到一個P(AA-Ada)/PAH的雙分子層，此過程重復若干次最后達到需要的層數，即可得到聚電解質多層膜改性的鍍金單晶硅片。
[0043]先將β-CD六號位的羥基進行溴取代(P-CD-(Br)7),然后用疊氮化鈉進行疊氮化制備7個疊氮基團修飾的i3-CD(i3_CD-(N3)7);最后將β-θΗΝ3)7和炔丙基-REDV多肽進行點擊反應，得到REDV多肽修飾的β-CD (β-CD- (REDV) 7)。
[0044]將上述聚電解質多層膜改性的鍍金單晶硅片置于I毫摩爾每升的β-⑶-(REDV)7水溶液中，并在室溫下反應過夜。反應結束后用水清洗表面，即可得到固定了REDV多肽的具有促進內皮細胞黏附功能的表面。
[0045]本方法在諸多生物醫用和生物科技領域具有潛在的應用前景。其中需要特別指出的是該方法學不僅局限于我們工作采用的PAA/PAH，i3-CD/Ada，而且可以推廣到其他聚合物和其他主客體對。對于需要雙功能甚至多功能表面的領域，可以簡單地采用混合共引入的方式引入兩種或多種具有不同配體的環糊精分子得以實現。
[0046]以上依據本發明的理想實施例為啟示，通過上述的說明內容，相關人員完全可以在不偏離本項發明技術思想的范圍內，進行多樣的變更以及修改。本項發明的技術性范圍并不局限于說明書上的內容，必須要根據權利要求范圍來確定技術性范圍。
【主權項】
1.一種結合層層組裝技術和主客體相互作用構建生物活性表面的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)聚電解質多層膜改性表面的制備: 將氨基化的基材浸泡在丙烯酸單體與1-丙烯酸金剛烷甲醇酯單體的共聚物(P(AA-Ada))的溶液中一段時間，然后再浸泡在聚丙烯胺(PAH)溶液中一段時間，即在氨基化的基材表面得到一層P(AA-Ada)/PAH雙分子層，重復浸泡若干次，即得到具有若干層P(AA-Ada)/PAH雙分子層的聚電解質多層膜改性表面； (2)聚電解質多層膜改性表面固定生物活性分子: 將所得的具有聚電解質多層膜改性表面置于含有修飾了生物活性分子的環糊精(β_CD)衍生物的溶液中進行反應，即得到固定有生物活性分子的聚電解質多層膜改性表面。2.一種結合層層組裝技術和主客體相互作用構建生物活性表面的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)含有金剛烷基團的聚陰離子P(AA-Ada)的制備: 按一定的摩爾比將丙烯酸單體、1-丙烯酸金剛烷甲醇酯單體、鏈轉移劑和引發劑加入到反應溶液中進行聚合反應，反應后采用沉降分離提純的方法即得含有金剛烷基團的聚陰尚子P(AA-Ada)； (2)聚電解質多層膜改性表面的制備: 將氨基化的基材浸泡在丙烯酸單體與1-丙烯酸金剛烷甲醇酯單體的共聚物(P(AA-Ada))的溶液中一段時間，然后再浸泡在聚丙烯胺(PAH)溶液中一段時間，即在氨基化的基材表面得到一層P(AA-Ada)/PAH雙分子層，重復浸泡若干次，即得到具有若干層P(AA-Ada)/PAH雙分子層的聚電解質多層膜改性表面； (3)聚電解質多層膜改性表面固定生物活性分子: 將所得的具有聚電解質多層膜改性表面置于含有修飾了生物活性分子的環糊精(β_CD)衍生物的溶液中進行反應，即得到固定有生物活性分子的聚電解質多層膜改性表面。3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述的生物活性分子為生物素、甘露糖或精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸多肽。4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于:修飾有所述生物素分子的β-CD衍生物的制備過程為:將炔丙基生物素和7個疊氮基團修飾的i3-CD(i3-CD_(N3)7)進行點擊反應，制得生物素修飾的⑶。5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于:修飾有所述甘露糖分子的β-CD衍生物的制備過程為:將炔丙基甘露糖和7個疊氮基團修飾的i3-CD(i3-CD_(N3)7)進行點擊反應，制得甘露糖修飾的⑶。6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于:修飾有所述精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸多肽分子的β-CD衍生物的制備過程為:將炔丙基-精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸多肽和7個疊氮基團修飾的P-CD(P-CD-(N3)7)進行點擊反應，制得精氨酸-谷氨酸-天冬氨酸-纈氨酸多肽修飾的β-CD。7.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述氨基化的基材為單晶硅或玻璃，所述氨基化的單晶硅片或玻璃片的制備過程為:將單晶硅片或玻璃片置于3-氨基丙基-三乙氧基硅烷(APTES)的甲苯溶液中反應一段時間，得到表面氨基化的單晶硅或玻璃基材。8.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述氨基化的基材為鍍金單晶硅片，所述氨基化的鍍金單晶硅片的制備過程為:將鍍金單晶硅片置于巰基乙胺鹽酸鹽的水溶液中反應一段時間，得到表面氨基化的鍍金單晶硅基材。9.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于:修飾了生物活性分子的β-CD衍生物的溶液為水溶液、磷酸鹽緩沖溶液或其他可以溶解相應生物活性分子的溶液。10.根據權利要求2所述的方法，其特征在于:所述的聚合為可逆加成斷裂鏈轉移聚合，所述鏈轉移劑為2_(苯基硫代甲酰硫基)丙酸;所述的引發劑為偶氮二異丁腈、偶氮二異庚腈、過氧化二苯甲酰、過氧化二碳酸二乙基己酯、異丙苯過氧化氫、過硫酸鉀一亞硫酸鹽體系或過氧化氫一亞鐵酸鹽體系。
【文檔編號】C08F220/06GK105837730SQ201610183773
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月29日
【發明人】陳紅, 于謙, 曹利敏, 韋婷, 渠陽翠, 胡昌明, 占文俊
【申請人】蘇州大學