阿替洛爾的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【專利摘要】本發明公開了阿替洛爾的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用，本發明提供的阿替洛爾的藥物組合物中含有阿替洛爾和一種從南沙參中分離得到的結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，阿替洛爾、化合物(Ⅰ)單獨作用時，可以抑制肺纖維化；阿替洛爾和化合物(Ⅰ)聯合作用時，對肺纖維化的抑制效果進一步提高，可以開發成抑制肺纖維化的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
阿替洛爾的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及阿替洛爾的新用途，具體涉及阿替洛爾的藥物組 合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 阿替洛爾，是一種適用于各種原因所致的中、輕度高血壓病，包括老年高血壓病和 妊娠期高血壓的選擇性m腎上腺素受體阻滯藥。為心臟選擇性受體阻斷劑，無膜穩定作 用，無內源性擬交感活性。一般用于竇性心動過速及早搏等，也可用于高血壓、心絞痛及青 光眼。口服吸收約為50 %，小劑量可通過血腦屏障。蛋白結合率6-10 %。服后2~4小時作用 達峰值，作用持續時間較久。半衰期為6~7小時，主要以原形自尿排出。血液透析時可予以 清除。
[0003] 肺纖維化(pulmonary fibrosis)是一種發病隱匿、進展迅速、病死率高且治療效 果欠佳的慢性肺部疾患。近年研究提示，脂質過氧化損傷在肺損傷和纖維化發生發展中發 揮重要作用。
[0004] 迄今為止，尚未見阿替洛爾及其藥物組合物與肺纖維化的相關性報道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種阿替洛爾的藥物組合物，該藥物組合物中含有阿替洛 爾和一種結構新穎的天然產物，阿替洛爾和該天然產物可以協同治療肺纖維化。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0008]
〇
[0009] -種阿替洛爾的藥物組合物，包括阿替洛爾、如權利要求1所述的化合物（I)和藥 學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將南沙參粉碎，用60~70%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用1 〇 %乙醇洗脫12個柱體積，再用70 %乙醇洗脫15個柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0013] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用65%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0015]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備治療肺纖維化的藥物中的應用。
[0017] 上述阿替洛爾的藥物組合物在制備治療肺纖維化的藥物中的應用。
[0018] 本發明的優點：
[0019] 本發明提供的阿替洛爾的藥物組合物中含有阿替洛爾和一種從南沙參中分離得 到的結構新穎的天然產物，阿替洛爾和該天然產物單獨作用時，具有抑制肺纖維化作用;二 者聯合作用時，抑制肺纖維化效果進一步提高，可以開發成治療肺纖維化的藥物。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023]分離方法：（a)將南沙參(2kg)粉碎，用65 %乙醇熱回流提取(20L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫12個柱體積，再用70%乙醇洗脫 15個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、15:1 (8個 柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4 用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱 體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (415mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0024] 結構確證：白色粉末;HR-ESI-MS顯示[M+Na]+為m/z 337.1322,結合核磁特征可得 分子式為Ci5H22〇7，不飽和度為5。核磁共振氫譜數據δΗ(ppm，DMS〇-d 6，600MHz):H-1 (6.37，d， J = 3.0)，H-3(6.10，s)，H-5(2.35，d，J = 4.2)，H-6(4.63，d，J = 3.0)，H-7(4.51，d，J = 3.0)， H-9(2.19，t，J=4.2)，H-10(3.48，m)，H-10(3.85，m)，H-ll(5.03，s)，H-ll(5.09，s)，H-2' (2.07，m，2H)，H-3'（2.13，m)，H-4'（0.89，d，J = 7.2)，H-5'（0.91，d，J = 6.6);核磁共振碳譜 數據Sc(ppm，DMS〇-d6,150MHz ):89.5(CH，1-C)，98.8(CH，3-C)，139.7(C，4-C)，35.6(CH，5- C)，91.1(CH，6-C)，78.2(CH，7-C)，97.3(C，8-C)，40.1(CH，9-C)，62.4(CH2，10-C)，111.6 (CH2，ll-C)，171.3(C，r-C)，42.8(CH2,2'-C)，25.2(CH，3'-C)，21.7(CH3,4'-C)，21.8(CH 3， 5'-C)<JR光譜表明該化合物含有羥基，羰基和烯烴結構（3457cm-S 1745cm-1和1666cm-4。 h-NMR 譜顯示一個異戊酰基結構[5!10.89(3!1，(1，1 = 7.2抱，!1-4'），0.91(3!1，(1，1 = 6.6!^，!1- 5'），2.13(1!1，111，!1-3'），2.07(2!1，111，!1-2'）]，一個烯屬亞甲基質子信號[3!15.03(8，!1-11)和 5.09(8，!1-11)]，一個含氧亞甲基信號[6!13.48(111，!1-10)和3.85(111，!1-10)]，四個含氧次甲基 質子信號[3財.51((1，了 = 3.0!^，!1-7)，4.63((1，了 = 3.0!^，!1-6)，6.10(8，!1-3)，6.37((1，了 = 3.0ΗΖ，Η-1)]</3(：-ΝΜΚ譜顯示了 15個碳信號，包括兩個甲基，三個亞甲基(一個含氧亞甲基δ 〇62.4，一個烯屬亞甲基6(：111.6)，七個次甲基（四個含氧次甲基6〇78.2,89.5,91.1和 98.8)，以及三個季碳（一個烯烴季碳3(：139.7，一個含氧季碳3〇97.3，一個酯羰基碳5 (：171.3)。圓8(：譜中，!1-10!16.37)和!12-2'0!12.〇7)與(：-1'0(：171.3)的相關性表明異戊酰 基位于C-1 位。HBMC譜中，Η-6 (δΗ4 · 63)與C-4 (δα 39 · 7)、C-8 (SC97 · 3)和C-9 (δ〇40 · 1)，以及 H-7 (δ4.51)與C-9和C-10 (SC62.4)的相關性表明C-6和C-8通過氧橋相連，C-7位連有一個羥 基；Η2-10(δΗ3.48 和 3.85)與 〇7(5〇78.2)，〇80〇97.3)和(：-90〇4〇.1)的相關性表明羥甲 基位于C-8位上。R0ESY譜中，Η-9與Η-5的相關性表明Η-5和Η-9為β構型。綜合氫譜、碳譜、 HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立體 構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學式及碳原子編號如 下：
〇
[0025]
[0026] 實施例2:藥理作用 [0027] 1、材料與方法
[0028] 1.1動物
[0029] SPF級健康Wistar大鼠，雌雄各半共60只，體質量(200±20)g，購自甘肅中醫學院 SPF級實驗室并在該實驗室飼養。
[0030] 1.2試劑與樣品
[0031 ]阿替洛爾購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例1。鹽 酸博萊霉素(BLM)購自浙江海正藥業股份有限公司，MDA、S0D、N0測試盒均購自南京建成生 物工程研究所。
[0032] 1.3儀器
[0033] 高速低溫離心機（5810R，美國Eppendorf公司），熒光顯微鏡（X71，日本0LYPUS公 司），高效液相色譜庫侖電化學分析系統(HPLC-ECD CoulChem，ESA，美國）。
[0034] 1.4小鼠分組及模型制備
[0035] C57BL/6小鼠隨機分為6組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、陽性對照 組(地塞米松組，50mg · kg-〇、阿替洛爾組（100mg · kg-〇、化合物（I)組（100mg · kg-4、阿替 洛爾與化合物（I)組合物組【50mg · kg<阿替洛爾+50mg · kg<化合物（I)】。適應環境1周后， 氣管內注入BLM( 5mg/kg)制備肺纖維化模型。注藥后，立即將動物直立旋轉，使藥物在肺內 分布均勻。從造模次日開始，正常對照組、模型對照組分別每日灌胃生理鹽水（10mL/kg)、余 各組每日分別按相應劑量給藥，于第14天檢測肺組織S0D、MDA水平，血清N0的含量。
[0036] 1.5血清中N0含量的測定
[0037] 治療14各組隨機分別取6只大鼠，股動脈取血處死，分離血清，嚴格按試劑盒說明 書采用硝酸還原酶法進行化學比色檢測。
[0038] 1.6肺組織S0D、MDA水平的測定
[0039] 治療14各組隨機分別取6只大鼠，處死取肺組織制備勻漿，取上清液，指標嚴格按 試劑盒說明書進行化學比色檢測。
[0040] 1.7病理標本取材及處理
[0041 ]迅速取右肺中葉，鉗取多塊肺組織，投入25g/L戊二醛中固定，按電鏡常規進行標 本制備。半薄切片后做超薄切片。醋酸鈉和枸櫞酸鉛雙染色，日本JEM-1230型投射電鏡觀 察。
[0042] 1.8統計學方法
[0043]實驗數據用均數土標準差(X土s)表示，應用SPSS18.0版統計軟件進行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。
[0044] 2、實驗結果
[0045] 對血清N0及SOD、MDA含量的影響
[0046] 與模型組相比較，阿替洛爾組、化合物（I)組、陽性對照組血清N0、肺組織MDA、肺組 織S0D含量減少(P〈0.05);與模型組相比較，阿替洛爾與化合物（I)組合物組血清N0、肺組織 MDA含量、肺組織S0D含量明顯減少(P〈0.01)。結果見表1。
[0047] 表1對血清N0及S0D、MDA含量的影響
[0048]
[0049 ]研究表明，肺脂質過氧化損傷是BLM致肺損傷機制之一。SOD能清除體內超氧陰離 子自由基保護細胞免受損傷，MDA是機體脂質過氧化的主要產物之一。N0兼有第二信使和神 經遞質性能，在舒張血管、傳遞神經信息和調控免疫功能方面均起十分重要的作用。肺內N0 的大量生成有加重肺損傷和促進肺成纖維細胞增殖的作用。
[0050]上述試驗結果表明，阿替洛爾、化合物a)單獨作用時，可以抑制肺纖維化;阿替洛 爾和化合物（I)聯合作用時，對肺纖維化的抑制效果進一步提高，可以開發成抑制肺纖維化 的藥物。
[0051]上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種阿替洛爾的藥物組合物，其特征在于:包括阿替洛爾、如權利要求1所述的化合 物(I)和藥學上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的阿替洛爾的藥物組合物，其特征在于:藥學上可W接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的阿替洛爾的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將南 沙參粉碎，用60~70%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10 %乙醇洗脫12個柱體積，再用70 %乙醇洗 脫15個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1 和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集7~13個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用65%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療肺纖維化的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的阿替洛爾的藥物組合物在制備治療肺纖維化的藥物中的 應用。
【文檔編號】C07D493/18GK105837595SQ201610263609
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年4月23日
【發明人】徐月苗
【申請人】徐月苗