一種布美他尼的藥物組合物及其抗炎鎮痛作用
【專利摘要】本發明公開了一種布美他尼的藥物組合物及其抗炎鎮痛作用，本發明提供的布美他尼的藥物組合物中含有布美他尼和一種從射干的干燥根莖中分離得到的結構新穎的天然產物化合物(I)，布美他尼和該天然產物單獨作用時，抗炎鎮痛效果一般；二者聯合作用時，抗炎鎮痛效果顯著提高，可以開發成抗炎鎮痛的藥物。本發明與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
一種布美他尼的藥物組合物及其抗炎鎮痛作用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及布美他尼的新用途，具體涉及一種布美他尼的藥 物組合物及其抗炎鎮痛作用。
【背景技術】
[0002] 布美他尼又稱丁氧苯酸，為髓袢利尿藥，其作用部位、作用機制、電解質丟失和作 用特點均與呋塞米、依他尼酸相似。具有高效、速效、短效和低毒的特點。
[0003] 布美他尼對水和電解質排泄的作用基本同呋塞米，其利尿作用為呋塞米20~60 倍。主要抑制腎小管髓袢升支厚壁段對NaCl的主動重吸收，對近端小管重吸收Na+也有抑制 作用，但對遠端腎小管無作用，故排鉀作用小于呋塞米。能抑制前列腺素分解酶的活性，使 前列腺素 E2含量升高，從而具有擴張血管作用。擴張腎血管，降低腎血管阻力，使腎血流量 尤其是腎皮質深部血流量增加，在布美他尼的利尿作用中具有重要意義，也是其用于預防 急性腎功能衰竭的理論基礎。另外，與其他利尿藥不同，袢利尿藥在腎小管液流量增加的同 時腎小球濾過率不下降，可能與流經致密斑的氯減少，從而減弱或阻斷了球-管平衡有關。 布美他尼能擴張肺部容量靜脈，降低肺毛細血管通透性，加上其利尿作用，使回心血量減 少，左心室舒張末期壓力降低，有助于急性左心衰竭的治療。由于布美他尼可降低肺毛細血 管通透性，為其治療成人呼吸窘迫綜合征提供了理論依據。
[0004] 目前，尚未見布美他尼及其藥物組合物與抗炎鎮痛的相關報道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種布美他尼的藥物組合物，該藥物組合物中含有布美他 尼和一種從射干中分離得到的結構新穎的天然產物，布美他尼和該天然產物可以協同抗炎 鎮痛。
[0006] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0008]
[0009] -種布美他尼的藥物組合物，包括布美他尼、如上所述的化合物（I)和藥學上可以 接受的載體。
[0010]如上所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將射干的干燥根莖粉 碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a) 中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇洗脫12個柱 體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗脫濃縮 物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到 4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液 減壓濃縮得到化合物(I)。
[0011] 進一步地，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0012] 進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013] 如上所述的化合物(I)在制備抗炎鎮痛的藥物中的應用。
[0014] 如上所述的布美他尼的藥物組合物在制備抗炎鎮痛的藥物中的應用。
[0015] 本發明的優點：
[0016] 本發明提供的布美他尼的藥物組合物中含有布美他尼和一種從射干中分離得到 的結構新穎的天然產物，布美他尼和該天然產物單獨作用時，抗炎鎮痛效果一般;二者聯合 作用時，抗炎鎮痛效果顯著提高，可以開發成抗炎鎮痛的藥物。本發明與現有技術相比具有 突出的實質性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0017] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0018] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0019] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0020] 分離方法：（a)將射干的干燥根莖(5kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(20L X 3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4LX3次）、乙酸乙酯(4LX3次)和水飽和的 正丁醇(4LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用70%乙醇 洗脫12個柱體積，收集70 %洗脫液，減壓濃縮得70 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙 醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、10:1 (8個柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組 分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為8:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個 柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (254mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0021] 結構確證:無色粉末，HR-ES頂S顯示[M+H]+為m/z 451.2182，結合核磁特征可得分 子式為C26H3QN2〇5，不飽和度為13。核磁共振氫譜數據δ Η(ΡΡπι，CDC13，500MHz): H-3 (3 · 98，t，J = 3.2Hz)，H-5(3.48，d，J = 7.3Hz)，H-6a(3.32，dd，J=16.3,7.3Hz)，H-6b(2.61，br，d，J = 16.3Hz)，H-9(7.49，d，J = 8.2Hz)，H-10(7.11，td，J = 8.2，1.3Hz)，H-ll(7.22，td，J = 8.2， 1.3Hz)，H-12(7.30，d，J = 8.2Hz)，H-14a(2.74，d，J = 13.0Hz)，H-14b(1.88，d，J=13.0Hz)， H-17a(4.33，d，J=12.1Hz)，H-17b(4.16，d，J=12.1Hz)，H-18(1.57，s)，H-20(2.89，dd，J = 12.3,8.4Hz)，H-21(1.88，m)，H-21(2.41，m)，H-23(4.10，d，J=5.2Hz)，H-24(2.09，m)，H-24 (2.53，m)，H-25(4.94，m)，H-26(9.36，d，J = 4.6Hz)，Ni-Me(3.64，s)，N4-Me(2.34，s);核磁共 振碳譜數據3。（？？111，〇0(：13，1251!^):132.4((：，2-〇,53.5(〇1，3-〇,61.4(〇1，5-〇,23.7 (CH2,6-C)，107.3(C，7-C)，126.8(C，8-C)，118.4(CH，9-C)，119.2(CH，10-C)，121.2(CH，n- C)，109.5(CH，12-C)，136.7(C，13-C)，33.3(CH2，14-C)，126.2(C，15-C)，130.0(C，16-C)， 59.6(CH2，17-C)，24.3(CH3，18-C)，116.2(C，19-C)，40.1(CH，20-C)，24.7(CH2,21-C)，115.3 (C，22-C)，77.8(CH，23-C)，33.8(CH2,24-C)，72.4(CH，25-C)，204.3(CH，26-C)，30.2(CH 3， Λ-Me)，41.3 (CH3，N4_Me)。紅外波譜中在341 δαιΓ1234與1675cnf1吸收峰分別是由該化合物中的 羥基與醛基產生;且UV譜圖表明在231nm與285nm有紫外吸收，顯示該化合物含有吲哚發色 基團。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有26個碳信號，包括三個甲基δ[24.3，30.2，41.3;五個 亞甲基(一個連氧亞甲基)知23.7,33.3,59.6,24.7,33.8;十個次甲基(兩個連氧次甲基，一 個醛基）δ63·5,61·4，118·4，119·2，121·2，109·5,40·1，77·8,72·4,204·3;以及八個季碳 (兩個二連氧季碳）δ〔132·4,107.3,126.8,136.7,126.2,130.0,116.2,115.3;以上功能結 構再結合不飽和數表明該化合物為七環結構。1H-NMR譜顯示一組無取代吲哚片段的質子信 ·3Ηζ)與 δΗ-127.30( lH，d，J = 8.2Hz);-個醛基質子信號 δΗ-269.36( lH，d，J = 4.6Hz);-個甲 2 基質子信號δΗ-l8l.57(3H，s，Me);兩個N-CH3質子信號δ H3.64(3H，s，N1-Me)與2.34(3H，s，N4- Me);-組移向低場的連氧亞甲基質子信號δH-17a4.33(lH，d，J=12.1Hz)與δ H-17b4.16(lH，d， J = 12·1Ηz);四組亞甲基質子信號δΗ-633.32(lH，dd，J= 16.3，7·3Ηζ)與δΗ.2.61(lH，br，d，J 3 = 16·3Ηζ)、δΗ-1如2.74(1!1，(1，了=13.0抱）與3[1- 1仙1.88(1!1，(1，了=13.0!^)、3[1-21(1.88，111)與 4 (2.41，m)以及δΗ-24 ( 2.09，m)與（2.53，m)。130匪1?譜、DEPT譜顯示該化合物中存在吲哚結構
[0022] ο
[0023] 實施例2:抗炎鎮痛作用
[0024] 1、材料與方法
[0025] 1.1藥物及試劑
[0026] 布美他尼購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實施例1。阿 司匹林腸溶片(濟南永寧制藥股份有限公司），吐溫80(天津市廣成化學試劑有限公司）；二 甲苯(天津市博通化工有限公司）；依文思藍（國藥集團化學試劑有限公司）。
[0027] 1.2動物
[0028] 昆明種小鼠，體重18~22g，雌雄各半，清潔級，由泰山醫學院實驗動物中心提供。 [0029] 1 · 3鎮痛實驗:小鼠扭體法
[0030]取小鼠50只，雌雄各半，體重18~22g，隨機分為布美他尼組(0.2g · kg"1)、化合物 (I)組(〇.2g · kg^1)、布美他尼與化合物⑴組合物組(O.lg · kgAo.lg · kg"1)、阿司匹林組 (0.2g · kg<)及生理鹽水對照組。每組10只，灌胃給藥。給藥容積20mL · kg<。生理鹽水組和 阿司匹林組給藥30min后、給藥組給藥60min后，腹腔注射0.6 %冰醋酸10mL · kg^1，觀察記錄 15min內小鼠出現扭體反應鼠數和扭體次數，計算扭體次數均值及抑制扭體反應率。
[0031 ] 抑制率=(對照組扭體數-給藥組扭體數)/對照組扭體數X 100%
[0032] 1.4鎮痛實驗:小鼠甩尾法實驗
[0033] 取昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重18~22g，實驗前12h禁食不禁水。把小鼠裝入 小鼠固定筒內，尾部暴露于外，測痛時，使小鼠尾尖部1/3處與聚光燈燈孔重合，待動物安靜 后進行測量，以鼠尾受熱刺激出現甩尾作為疼痛反應指標。記錄小鼠從開始光照射到甩尾 反應的潛伏期(TFLs)作為痛閾。分組及給藥同1.3。生理鹽水組和阿司匹林組給藥30min后、 給藥組給藥60min后，測定其甩尾時間。計算痛閾均值及痛閾提高率。
[0034] 痛閾提高率=(給藥后痛閾-基礎痛閾)/基礎痛閾X 100%
[0035] 1.5抗炎實驗:對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響
[0036] 分別稱取18~22g健康小白鼠40只，分為5組，每組8只，雌雄各半。每只小鼠按 20mL · kg^1灌胃給藥，劑量設置同1.3。連續給藥7d。第7天給藥0.5h后，各組小鼠于右耳正反 面涂上二甲苯50yL致炎，lh后將小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用8mm直徑打孔器 分別在同一部位打下圓耳片，立即稱重并記錄其質量，計算腫脹度和腫脹率。
[0037] 腫脹度=右耳質量-左耳質量；腫脹率=[(右耳質量-左耳質量）/左耳質量]X 100%
[0038] 1.6抗炎實驗:對冰醋酸致小鼠血管通透性改變的影響
[0039] 分組給藥同1.3。第7天給藥0.5h后，尾靜脈注射1 %的依文思藍生理鹽水溶液 10mL · kg-S立即腹腔注射0.6%醋酸生理鹽水溶液10mL · kg-ISOmin后脫頸椎處死小鼠， 輕揉小鼠腹部lmin后，打開腹腔，收集腹腔液，待收集完畢用4mL生理鹽水分數次沖洗腹腔， 用注射器吸出洗滌液，合并后加入生理鹽水至5mL，以lOOOr · mirT1離心5min，取上清液用 721型分光光度計于680nm處測吸光度(A)，計算滲出抑制率。
[0040] 滲出抑制率=(陰性對照組A-給藥組A)/陰性對照組AX 100%
[0041 ] 1.7統計方法
[0042]采用SPSS19.0軟件，數據以X土s表示，比較用t檢驗，P<0.05為有統計意義。
[0043] 2、實驗結果
[0044] 2.1鎮痛作用
[0045] 與對照組比，布美他尼與化合物（I)組合物組小鼠扭體反應次數和扭體反應鼠數 均顯著降低(P<〇.01)，對醋酸致小鼠扭體反應次數的抑制效果優于陽性藥阿司匹林，且優 于布美他尼或化合物(I)單獨作用時對醋酸致小鼠扭體反應次數的抑制效果。結果見表1。
[0046] 與對照組比，布美他尼與化合物（I)組合物組小鼠光熱輻射致疼痛反應的痛閾顯 著提高(P<〇.01)，痛閾提高率與陽性藥阿司匹林基本一致，且優于布美他尼或化合物（I) 單獨作用時對小鼠光熱輻射致疼痛反應的痛閾提高率。結果見表2。
[0047 ] 表1對冰醋酸致小鼠扭體次數的影響(X ± s，η = 10)
[0048]
[0049 ] 表2對熱刺激致小鼠痛閾改變的影響(X 土 s，η = 10)
[0050]
[0051 ] 2.2抗炎作用
[0052] 二甲苯致炎后，布美他尼組、化合物（I)組小鼠耳廓腫脹率低于對照組(Ρ<0.05)， 布美他尼與化合物(I)組合物組的小鼠耳廓腫脹率降低顯著(Ρ<〇.01)。結果見表3。冰醋酸 致炎后，布美他尼組、化合物（I)組小鼠腹腔液依文思藍Α低于陰性對照組(Ρ<0.05)，布美 他尼與化合物（I)組合物組的小鼠腹腔液A顯著降低(P<0.01)。結果見表4。
[0053 ] 表3對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(X ± s，η = 8)
[0054]
[0055] 表4對冰醋酸致小鼠血管通透性改變的影響(X 土 s，η = 8)
[0056]
?0057?~以上結果表明，布美他尼與化合物(I)組合物具有顯著的抗炎鎮痛作用，且優于布 美他尼或化合物（I)單獨的抗炎鎮痛作用，說明布美他尼與化合物（I)之間具有協同作用， 可以協同發揮抗炎鎮痛作用，可以開發成抗炎鎮痛藥。
[0058]上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物(I)，2. -種布美他尼的藥物組合物，其特征在于:包括布美他尼、如權利要求1所述的化合 物(I)和藥學上可W接受的載體。3. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將射 干的干燥根莖粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個柱體積，再用 70%乙醇洗脫12個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b) 中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲 燒-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比 為8:1、5:1和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據權利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。5. 根據權利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。6. 權利要求1所述的化合物(I)在制備抗炎鎮痛的藥物中的應用。7. 權利要求2所述的布美他尼的藥物組合物在制備抗炎鎮痛的藥物中的應用。
【文檔編號】C07D491/22GK105837589SQ201610176043
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2016年3月24日
【發明人】薛君, 李麗, 趙玉強
【申請人】薛君