一種鴨肫蛋白源抗氧化肽及其應用
【專利摘要】本發明公開了一種鴨肫蛋白源抗氧化肽及其應用，該抗氧化肽的氨基酸序列為Asn?Lys?Phe?Ile?Leu?Lys(組分DKFILK),其序列的母離子的單同位素峰為m/z 382.2376 Da；其制備工藝流程如下：鴨肫脫脂、酶解、酶解物超濾、凝膠過濾層析、反高效液相色譜純化、質譜結合氨基酸分析制備抗氧化肽。本發明原料來源廣、價廉，工藝科學合理，通過酶解技術，同時采用超濾分級和色譜層析等純化，制得的抗氧化肽具有較高的活性；與化學合成的抗氧化劑相比較，本發明制得的抗氧化肽具有安全無毒副作用、抗氧化活性強和易于消化吸收等優點，可以作為藥品、功能性食品等應用。
【專利說明】
一種鴨肫蛋白源抗氧化肽及其應用
技術領域
[0001]本發明屬于多肽技術領域，具體涉及一種鴨肫蛋白源抗氧化肽及制備方法，還涉及該鴨肫蛋白源抗氧化肽的用途。
【背景技術】
[0002]越來越多的研究表明，體內活性氧自由基具有一定的功能，如免疫和信號傳導過程。但過多的活性氧自由基也會有破壞作用，導致人體正常細胞和組織的損壞，從而引起多種疾病，如心臟病、老年癡呆癥、帕金森病和腫瘤等疾病。因此，對能夠除體內過剩的活性氧自由基，保護細胞和線粒體的正常結構和功能，防止脂質過氧化的發生，具有抗癌、抗誘導及抗衰老等其他生物活性的天然抗氧化劑的研究逐漸成為了熱點。目前，由于化學合成抗氧化劑如BHA(叔丁基烴基茴香醚)、BHT(2，6-二叔丁基對甲酚)、PG(沒食子酸丙脂)、TBHQ(特丁基對苯二酚)等由于價格低廉、活性好在世界上其他國家食品行業中得到廣泛應用，但是許多研究已表明，這類化學合成抗氧化劑(除TBHQ外)由于存在著許多副作用，如對人體的肝、脾、肺均有不利影響，會誘發惡性腫瘤等。因此，歐洲、美國、日本等相關國家已經對這類化學合成抗氧化劑采取禁止使用的措施。許多國家的學者開始將研究熱點轉向天然抗氧化劑的研究，如從動物內臟及植物中通過某些技術來開發天然抗氧化肽、降血壓肽、抗腫瘤肽等。
[0003]不同來源的抗氧化肽成為研究熱點，如牡蠣、大豆蛋白、大棗、鴨皮、蛋清蛋白等的水解物都具有一定的抗氧化活性，并且對這些具有抗氧化活性的物質進行進一步的分離純化，可得到具有高抗氧化活性的抗氧化肽。如從動物及內臟中利用酶解技術得到抗氧化肽，中國專利CN103275180B，公開了一種以磷酸鹽緩沖液調節pH值，利用蛋白酶酶解馬面飩魚頭，通過一系列分離純化技術獲得了一種氨基酸序列Leu-Ser-His-Gly-Pro-Tyr的抗氧化肽；
中國專利CN103073621B公開了一種金槍魚碎肉蛋白抗氧化肽及其制備方法和用途，以脫脂金槍魚碎肉作為原料，加入磷酸鹽緩沖液，調節pH到5.0?7.0，得混合液;將混合液攪拌預熱，加入木瓜蛋白酶，得酶解產物;將酶解產物先滅酶再依次經脫鹽、超濾和層析，得到氨基酸序列為Tyr-Glu-Asn-Gly-Gly的抗氧化肽；
中國專利0附034675688公開了一種利用在料液比為1:3的脫脂金烏賊肉固形物中添加0.02 mol/ml磷酸鹽緩沖液來調節pH值，最后利用木瓜蛋白酶酶解來得到一種氨基酸序列SAla-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met，分子量為 1045.2 IDa 的金烏賊蛋白抗氧化肽；
中國專利CN103739693B公開了一種利用微波輔助酶法來酶解合浦珠母貝肉獲得了一種肽的序列為Gly-Ala-Gly-Leu-Pro-Gly-Lys-Arg-Glu-Arg的合浦珠母貝肉抗氧化肽；中國專利CN103524596B同樣公開一種在固液比為1:15?20ml中添加磷酸鹽緩沖液調節pH值，然后利用木瓜蛋白酶來酶解蛋白來獲得了氨基酸序列為Leu-Asp-Lys的抗氧化肽，這些抗氧化肽可以應用于食品工業、醫藥和化妝品等領域中。
[0004]鴨肫味甘、性平、咸，有健胃之效。胃痛為胃病臨床常見的一種病證，中醫學常常以此命為病名，相當于現代醫學之急、慢性胃炎，胃潰瘍，胃神經官能癥等。鴨肫為鴨肉加工過程中的副產物，對鴨肉副產物的利用大多數還處于粗加工階段，原料來源豐富，但由于我國大多數企業對鴨肫的深加工技術匱乏，所以導致一些資源浪費，因此，利用廉價的原料，采用某種技術將鴨肫開發成附加值較高的產品成為了畜產品企業亟待解決的問題。
[0005]ORACCOxgen Radical Absorbance Capacity)指氧自由基吸收能力，即測試食品藥品中抗氧化物的含量的國際通用標準單位。ORAC值越高，抑制自由基的抗氧化能力就越強。該方法現已經成為美國農業部、美國衛生院、FDA評價食品抗氧化能力的重要標準。歐洲、日本等國家的食品、功能食品行業也普遍采用ORAC值作為抗氧化能力的重要評價標準，是目前評價體外抗氧化能力最權威性的方法。
[0006]本發明人在實驗中發現，以鴨肫為原料，利用酶解技術制備抗氧化肽的工藝研究處于空白階段，而以ORAC值為自由基抗氧化分離純化指標來對鴨肫酶解產物制備高活性抗氧化肽及其應用也未見報道。
【發明內容】
[0007]本發明的第一個目的在于提供一種原料來源廣、價廉，安全無毒副作用，工藝科學合理，抗氧化活性強和易于消化吸收，可清除自由基和抑制脂質過氧化作用的一種鴨肫蛋白源抗氧化肽及制備方法;第二個目的在于該抗氧化肽提供一種可作為功能性食品、藥品和食品添加劑的用途。
[0008]本發明的目的及解決其主要技術問題是采用以下技術方案來實現的:一種鴨肫蛋白源抗氧化肽，其特征在于:該抗氧化肽的氨基酸序列為Asn-Lys-Phe-1Ie-Leu-Lys (組分DKFILK)，該序列的母離子的單同位素峰為(m/z 382.2376 Da, [M+H] + )，其具體制備過程包括以下步驟:
I)原料預處理:取鴨肫解凍，去筋，剁碎，用粉碎機將其粉碎；
2 )石油醚脫脂:將粉碎后的鴨肫加入石油醚浸泡1?12h，倒出石油醚，在通風櫥中將殘留石油醚徹底揮發，裝袋保藏于冰箱中備用；
3)勻漿、調節PH值:將脫脂后的鴨肫肉糜與水按料液比1:2?4的比例勻漿，調節pH值至6.5~7；
4)加蛋白酶酶解:調節溫度至50?55°C，蛋白酶添加量為:0.4?0.6%，勻漿液恒溫水浴3?
5h；
5)滅酶、離心及冷凍干燥:將水浴后的鴨肫勻漿液在95?110°C滅酶10?15min，冷卻后，在4000?6000r /min離心10?20min，取上清液即得酶解液，凍干得酶解物干粉；
6)分離純化:將上述所得酶解液分別進行超濾、層析(包括凝膠色譜、反高效液相色譜)等分離純化精制過程，最后冷凍干燥得鴨肫蛋白源抗氧化肽。
進一步地，所述步驟4)中蛋白酶為木瓜蛋白酶，酶活力為13000 IU/g。
[0009]進一步地，所述步驟6)超濾和層析具體過程為:
超濾分級:將上述步驟5)得到的酶解物制成濃度為10?15 11^/1^溶液，于0.05~0.1 MPa的工作壓力、60?65r/min的栗轉速和20?25 °C的工作溫度下采用超濾膜(截留分子量3kDa)進行超濾處理，收集分子量小于3 kDa部分，凍干，得超濾酶解物； 層析過程:將上述超濾酶解物(ZTl)干粉用去離子水配成6-15mg/ml的溶液，經過凝膠G15層析柱(2.6cmX60cm)分離，收集在214nm下各洗脫峰，凍干，選擇ORAC值較高的組分作為反高效液相純化物;將上述凝膠層析后的酶解物用去離子水配成10-20mg/ml的溶液，利用反高效液相色譜(RP-HPLC)進行純化，收集在220nm下各純化組分，以ORAC值較高的組分作為利用質譜技術來鑒定氨基酸序列的酶解物;根據ORAC值抗氧化活性得I個高活性抗氧化肽序列 Asn-Ly s-Phe-1 le-Leu-Ly s (組分 DKFILK)。
[0010]進一步地，所述凝膠為葡聚糖凝膠G15;所述反高效液相色譜檢測條件為:進樣量:15~20ul ；色譜柱:Lichrospher C18柱；流速:4mL/min ；流動相A: 5%乙腈+0.1%三氟乙酸；流動相8:100%乙腈;檢測波長:22011111。
[0011 ] 上述的一種鴨肫蛋白源抗氧化肽的應用，其特征在于序列Asn-Lys-Phe-1 Ie-Leu-Lys (組分DKFILK)是以ORAC值作為測定分離純化抗氧化肽的活性強弱的指標，并對超氧陰離子自由基(IC50值為14.58 mg/mL)、輕基自由基(IC50為0.016mg/mL)、過氧化氫(IC50為163.9(^8/1^)具有較高清除活性，同時對0嫩的損傷(1050值為1.93 mg/mL)具有保護作用；Asn-Lys-Phe-1Ie-Leu-Lys (組分DKFILK)具有安全無毒副作用、抗氧化活性強、易于吸收等優點，可以作為藥品、功能性食品應用。
[0012]本發明與現有技術相比具有明顯的優點和有益效果。由以上技術方案可知，本發明原料來源廣、價廉，工藝科學合理，通過酶解技術，同時采用超濾分級和色譜層析等純化，制得的抗氧化肽具有較高的活性;與化學合成的抗氧化劑相比較，本發明制得的抗氧化肽具有安全無毒副作用、抗氧化活性強和易于消化吸收等優點，可以作為藥品、功能性食品等應用。
【附圖說明】
[0013]圖1是本發明的超濾酶解物各組分ORAC值圖；
圖2是本發明葡聚糖凝膠G15層析色譜分析圖；
圖3是本發明G15分離四個組分ZTT1、ZTT2、ZTT3、ZTT4的ORAC活性值圖；
圖4A是本發明葡聚糖凝膠G15制備酶解物(ZTT3 )的RP-HPLC分析圖；
圖4B是所分離各組分對ORAC氧自由基活性圖；
圖5a是本發明分離組分V即序列Asn-Lys-Phe-1le-Leu-Lys (組分DKFILK)的MS質譜圖；
圖5b是MS/MS質譜圖；
圖6是本發明抗氧化肽的超氧陰離子自由基清除活性圖；
圖7是本發明抗氧化肽的羥自由基清除活性圖；
圖8是本發明抗氧化肽的過氧化氫清除活性圖；
圖9是本發明抗氧化肽的DNA損傷保護作用圖。
【具體實施方式】
[0014]以下結合附圖和較佳實施例，對依據本發明提出的一種鴨肫蛋白源抗氧化肽及其應用【具體實施方式】、特征及其功效，詳細說明如后。
[0015]參見圖1-9，一種鴨肫蛋白源抗氧化肽，其特征在于，該抗氧化肽的氨基酸序列為Asn-Lys-Phe-1 Ie-Leu-Lys (組分DKFILK)，該序列的母離子的單同位素峰為(m/z382.2376 Da, [M+H] + )，其具體制備過程包括以下步驟:
I)原料預處理:取鴨肫解凍，去筋，剁碎，用粉碎機將其粉碎；
2 )石油醚脫脂:將粉碎后的鴨肫加入石油醚浸泡1?12h，倒出石油醚，在通風櫥中將殘留石油醚徹底揮發，裝袋保藏于冰箱中備用；
3)勻漿、調節PH值:將脫脂后的鴨肫肉糜與水按料液比1:2?4的比例勻漿，調節pH值至6.5~7；
4)加蛋白酶酶解:調節溫度至50?55°C，蛋白酶添加量為:0.4?0.6%，勻漿液恒溫水浴3?
5h；
5)滅酶、離心及冷凍干燥:將水浴后的鴨肫勻漿液在95?110°C滅酶10?15min，冷卻后，在4000?6000r /min離心10?20min，取上清液即得酶解液，凍干得酶解物干粉；
6)分離純化:將上述所得酶解液分別進行超濾、層析(包括凝膠色譜、反高效液相色譜)等分離純化精制過程，最后冷凍干燥得鴨肫蛋白源抗氧化肽。
進一步地，所述步驟4)中蛋白酶為木瓜蛋白酶，酶活力為13000 IU/g。
[0016]進一步地，所述步驟6)超濾和層析具體過程為:
超濾分級:將上述步驟5)得到的酶解物制成濃度為10?15mg/mL溶液，于0.05-0.1MPa的工作壓力、60?65r/min的栗轉速和20?25°C的工作溫度下采用超濾膜(截留分子量3kDa)進行超濾處理，收集分子量小于3kDa部分，凍干，得超濾酶解物；
層析過程:將上述超濾酶解物(ZTl)干粉用去離子水配成6-15mg/ml的溶液，經過凝膠G15層析柱(2.6cmX60cm)分離，收集在214nm下各洗脫峰，凍干，選擇ORAC值較高的組分作為反高效液相純化物;將上述凝膠層析后的酶解物用去離子水配成10-20mg/ml的溶液，利用反高效液相色譜(RP-HPLC)進行純化，收集在220nm下各純化組分，以ORAC值較高的組分作為利用質譜技術來鑒定氨基酸序列的酶解物;根據ORAC值抗氧化活性得I個高活性抗氧化肽序列 Asn-Ly s-Phe-1 le-Leu-Ly s (組分 DKFILK)。
[0017]進一步地，所述凝膠為葡聚糖凝膠G15;所述反高效液相色譜檢測條件為:進樣量:15~20ul ；色譜柱:Lichrospher C18柱；流速:4mL/min ；流動相A: 5%乙腈+0.1%三氟乙酸；流動相8:100%乙腈;檢測波長:22011111。
[0018]上述的一種鴨肫蛋白源抗氧化肽的應用，其特征在于序列Asn-Lys-Phe-1 Ie-Leu-Lys (組分DKFILK)是以ORAC值作為測定分離純化抗氧化肽的活性強弱的指標，并對超氧陰離子自由基(IC50值為14.58 mg/mL)、輕基自由基(IC50為0.016mg/mL)、過氧化氫(IC50為163.9(^8/1^)具有較高清除活性，同時對0嫩的損傷(1050值為1.93 mg/mL)具有保護作用；Asn-Lys-Phe-1Ie-Leu-Lys (組分DKFILK)具有安全無毒副作用、抗氧化活性強、易于吸收等優點，可以作為藥品、功能性食品應用。
[0019]本發明中，米用0RAC(0xygenradical absorbance capacity，氧自由基吸收能力)活性值來評價抗氧化肽的活性。
[0020]具體ORAC反應步驟為:在75 mmol/L pH =7.4的NaH2P04_Na2HP04緩沖液環境下進行，反應前用NaH2P04-Na2HP04緩沖液將酶解液蛋白濃度稀釋到0.04 mg/mL。在96孔熒光板微孔中加入待測樣品20燦，同時用恥!12?04-似2冊04緩沖液將1>01(?配成10、20、40、60、80、100μπιο1/1(以20 yL NaH2P04_Na2HP04緩沖液做空白)做標曲；用多道移液器再加入120pL 116.7 nmol/L(終濃度70 nmol/L)熒光素(FL)，在37°C下保溫15 min后，用多道移液器迅速在各孔中加入60 uL 40 ^1101/1(終濃度12 mmol/DAAPH啟動反應。AAPH用pH 7.4的75 mmol/L NaH2P04-Na2HP04緩液配制38.25 mM，使用的AAPH均鮮配制。將微孔板置于酶標儀中在370C下以激發波長485 nm，發射波長520 nm開始計時反應并讀數(fO)每Imin測定I次測定一次各孔熒光強度(fl，f2，f3f!00)，連續測定100次，將每次讀數連成曲線。每個樣品設置3個復孔。實驗所得的各微孔反應的熒光強度數據通過軟件輸入到Excel中進一步處理，各微孔不同時間點的絕對熒光強度數據與-AAPH的空白熒光強度相比，得到相對熒光強度f0，以相對熒光強度采用近似積分法計算熒光衰減曲線下的面積(AUC)，熒光衰減曲線下的面積可以近似看作各梯形面積之和，AUC表示曲線下的面積。公式表達如下:AUC=
0.5 (f0+fn)+(fl+f2++ fi ++fn-1)
Net AUC= AUCsample-AUCblank
其中fi代表第i個測定點時的絕對熒光強度，t為相鄰兩個測定點之間的時間間隔，本試驗ORAC測定方法中t設定為I min。抗氧化劑作用下的焚光衰減曲線下的面積與無抗氧化劑存在時自由基作用的熒光衰減曲線下的面積之差，即熒光熄滅曲線的延遲部分面積Net AUC，為抗氧化劑的保護面積。抗氧化能力指數，是通過熒光衰減曲線的保護面積與標準抗氧化物質的保護面積相比得到的。
[0021 ] Trolox濃度與NetAUC成正比，將樣品NetAUC代入，換算得至IjORAC值，即每克酶解產物相當于Torlox的量(ymolTrolox equivalents/g)qORAC值以Trolox 當量TE(ymolTroloxEquivalent Per g Protein)來表不。
[0022]ORAC值越高，其產物的抗氧化能力就越強。本發明鴨肫蛋白源抗氧化肽在酶解物進行超濾及層析等分離純化過程中ORAC值見表I。
[0023]實施例:
I)取三穗鴨鴨肫解凍，去筋，剁碎，用粉碎機將其粉碎。
[0024]2 )將粉碎后的鴨肫肉糜中加入石油醚進行脫脂1?12h，倒出石油醚，在通風櫥中將殘留石油醚徹底揮發，收集固形物，裝袋保藏于冰箱中備用。
[0025]3)將脫脂后的鴨肫肉糜與水按料液比1:2?4的比例勻漿，調節pH值至6.5-7。
[0026]4)將水浴鍋溫度調節至50?55°C，向脫脂肉糜液中添加0.4?0.6%的木瓜蛋白酶，再將勻漿液恒溫水浴3~5h。
[0027]5)將水浴后的鴨肫勻漿液在95?110°C滅酶10?15min，冷卻后，在4000?6000r /min離心10?20min，取上清液即得酶解液，凍干，得酶解物凍干粉。
[0028]6)將上述所得酶解物分別進行超濾、層析(包括凝膠色譜、反高效液相色譜)等色譜純化過程，冷凍干燥得鴨肫蛋白源抗氧化肽，利用Q Exactive四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜技術結合氨基酸序列分析鑒定其結構，具體過程為:
(a)超濾分級:將得到的酶解物制成濃度為10?15 mg/mL溶液，于0.05-0.1 MPa的工作壓力、60?65r/min的栗轉速和20?25°C的工作溫度下采用超濾膜(截留分子量3kDa)進行超濾處理，收集分子量小于3kDa部分，凍干，其中ORAC值最高的組分為超濾酶解物(ZTl)。
[0029](b)凝膠色譜層析:將上述超濾酶解物(ZTl)干粉用去離子水配成6-15mg/ml的溶液，經過凝膠Gl5層析柱(2.6cm X 60cm)分離，收集在2HnmT各洗脫峰，凍干，其中ORAC值最高的組分為凝膠制備酶解物(ZTT3)。
[0030](c)RP-HPLC色譜純化:將上述凝膠層析后的酶解物用去離子水配成10-20mg/ml的溶液，利用反高效液相色譜(RP-HPLC)進行純化(檢測條件:進樣量:15?20ul;色譜柱:Lichrospher C18柱；流速:4mL/min;流動相A:5%乙腈+0.1%三氟乙酸;流動相B: 100%乙腈；檢測波長:220nm )，根據ORAC值活性最高的組分得I個高活性抗氧化肽(組分V)。
[0031](d) Q Exactive四極桿-靜電場軌道講高分辨質譜結合氨基酸序列鑒定結構:RP-HPLC檢測收集的高活性抗氧化肽(組分V)為單一峰，對組分V進行一級質譜和二級質譜分析，借助pF ind軟件解析，鑒定出組分V的氨基酸序列為Asn-Ly s_Phe_I Ie-Leu-Lys (組分DKFILK)，其序列的母離子的單同位素峰為m/z 382.2376 Da。
[0032]將上述所得鴨肫蛋白源抗氧化肽Asn - Lys - Phe - He - Leu - Lys(組分DKFILK)進行體外抗氧化自由基清除試驗。實驗結果表明:Asn-Lys-Phe-1Ie-Leu-Lys(組分DKFILK)對超氧陰離子自由基(IC50值為14.58 mg/mL)、羥基自由基(IC50為0.016mg/mL)、過氧化氫(1050為163.9(^8/1^)具有較高清除活性，同時對0嫩的損傷(1050值為1.93 mg/mL)具有保護作用。
[0033]以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，并非對本發明作任何形式上的限制，任何未脫離本發明技術方案內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發明技術方案的范圍內。
【主權項】
1.一種鴨肫蛋白源抗氧化肽，其特征在于:該抗氧化肽的氨基酸序列為Asn-Lys-Phe-1le-Leu-Lys，組分為DKFILK,其序列的母離子的單同位素峰為m/z 382.2376 Da, [M+H] + ；其制備方法包括以下步驟: (1)原料預處理:取鴨肫解凍，去筋，剁碎，用粉碎機將其粉碎； (2)石油醚脫脂:將粉碎后的鴨肫加入石油醚浸泡10?12h，倒出石油醚，在通風櫥中將殘留石油醚徹底揮發，裝袋保藏于冰箱中備用； (3)勻漿、調節PH值:將脫脂后的鴨肫肉糜與水按料液比1:2?4的比例勻漿，調節pH值至6.5?7 ； (4)加蛋白酶酶解:調節溫度50?55°C，蛋白酶添加量為:0.4?0.6%，勻漿液恒溫水浴3?5h； (5)滅酶、離心及冷凍干燥:將水浴后的鴨肫勻漿液在95?110°C滅酶10?15min，冷卻后，在4000?6000r /min離心10?20min，取上清液即得酶解液，凍干得酶解物干粉； (6)分離純化:將上述所得酶解物分別進行超濾純化和凝膠色譜層析、反高效液相色譜層析分離純化精制過程，最后冷凍干燥得鴨肫蛋白源抗氧化肽。2.如權利要求1所述的一種鴨肫蛋白源抗氧化肽，其特征在于:所述步驟(4)蛋白酶為木瓜蛋白酶，酶活力為13000 IU/g。3.如權利要求1所述的一種鴨肫蛋白源抗氧化肽，其特征在于:步驟(6)中超濾純化過程為:采用中空纖維素膜超濾分離，膜截留分子量MWCO為3kDa，栗轉速:60-65 r/min，工作溫度:20?25°C，出口壓力為0.05?0.1MPa下進行分級，收集所得截留分子量小于3 kDa組分ZTl超濾液，冷凍干燥，得超濾酶解物;選取ORAC活性值最高的、截留分子量小于3 kDa的組分ZTl作為層析酶解物分離。4.如權利要求1所述的一種鴨肫蛋白源抗氧化肽，其特征在于:步驟(6)中凝膠色譜層析、反高效液相色譜層析為:將上述超濾酶解物ZTl干粉用去離子水配成6-15mg/ml的溶液，用2.6cm X 60cm Gl 5層析柱分離，收集在214nm下各洗脫峰，凍干，選擇ORAC值較高的組分作為反高效液相純化物;將上述凝膠色譜層析后的酶解物用去離子水配成10-20mg/ml的溶液，利用反高效液相色譜RP-HPLC進行層析純化，收集在220nm下各純化組分，以ORAC值較高的組分作為利用質譜技術來鑒定氨基酸序列的酶解物;根據ORAC值抗氧化活性得I個高活性抗氧化肽序列:Asn-Lys-Phe-1le-Leu_Lys，組分為DKFILK05.如權利要求4所述一種鴨肫蛋白源抗氧化肽，其特征在于:所述凝膠為葡聚糖凝膠G15;所述反高效液相色譜檢測條件為:進樣量:15?20ul;色譜柱:Lichrospher C18柱；流速:4mL/min；流動相A: 5%乙腈+0.1%三氟乙酸;流動相B: 100%乙腈；檢測波長:220nm。6.如權利要求1-5之一所述的一種鴨肫蛋白源抗氧化肽的應用，其特征在于:可作為天然抗氧化物在制備功能性食品、藥品上應用。
【文檔編號】A61K38/08GK105820229SQ201610277713
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年4月29日
【發明人】蘇偉, 文飛, 母應春, 楊旭會, 齊琦, 邱樹毅
【申請人】貴州大學