頭孢氨芐的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
【專利摘要】本發明公開了頭孢氨芐的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用，本發明提供的頭孢氨芐的藥物組合物中含有頭孢氨芐和一種結構新穎的天然產物化合物(Ⅰ)，頭孢氨芐和化合物(Ⅰ)均具有明顯的抗抑郁作用，并且兩者合用抗抑郁效果顯著增強，可以開發成抗抑郁的藥物，與現有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
頭孢氨芐的藥物組合物及其在生物醫藥中的應用
技術領域
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，涉及頭孢氨芐的新用途，具體涉及頭孢氨芐的藥物組 合物及其在生物醫藥中的應用。
【背景技術】
[0002] 頭孢氨芐能抑制細胞壁的合成，使細胞內容物膨脹至破裂溶解，殺死細菌。
[0003] 迄今為止，尚未見頭孢氨芐及其藥物組合物與抑郁癥的相關性報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種頭孢氨芐的藥物組合物，該藥物組合物中含有頭孢氨 芐和一種結構新穎的天然產物，頭孢氨芐和該天然產物可以協同治療抑郁癥。
[0005] 本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0006] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0008] -種頭孢氨芐的藥物組合物，包括頭孢氨芐、如權利要求1所述的化合物（I)和藥 學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011]上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將穿心蓮粉碎，用65~85%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個柱體積，收集70%洗 脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化 合物(I)。
[0012]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0014]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0015] 上述化合物(I)在制備治療抑郁癥的藥物中的應用。
[0016] 上述頭孢氨芐的藥物組合物在制備治療抑郁癥的藥物中的應用。
[0017] 本發明的優點:本發明提供的頭孢氨芐的藥物組合物中含有頭孢氨芐和一種結構 新穎的天然產物，頭孢氨芐和該天然產物單獨作用時，對抑郁癥具有治療作用;二者聯合作 用時，對抑郁癥的治療效果進一步提高，可以開發成治療抑郁癥的藥物。
【具體實施方式】
[0018] 實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0019]分離方法：（a)將穿心、蓮(3kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(20L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫8個 柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃 縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1 (8個柱體積）、25:1 (8個柱體積）、15:1 (8個柱體 積)和5:1(10個柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正 相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1(8個柱體積）、5:1(10個柱體積)和2:1(5個柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結構確證:冊431-]\^顯示[]\?^]+為111/2 473.2153，結合核磁特征可得分子式為 C24H34〇8，不飽和度為8。核磁共振氫譜數據SH(ppm，CDC1 3，500MHz): H-la(1 ? 27，m)，H-lb (1.51，m)，H-2a(1.81，m)，H-2b(1.93，m)，H-3(5.91，br，s)，H-5(3.02，d，J=1.3Hz)，H-6 (6.83，d，J=1.3Hz)，H-9(2.36，m，2H)，H-12(1.44，s)，H-13(1.47，s)，H-14(0.99，s)，H-15 (1.56，s)，H-3'（5.14，q，J = 6.3Hz)，H-4'（1.32，d，J = 6.3Hz)，H-5a'（6.33，d，J=12.3Hz)， H-5b '（6 ? 62，d，J = 12 ? 3Hz)，4-AcO(1 ? 96，s)，3 ' -AcO(1 ? 99，s);核磁共振碳譜數據(ppm， CDC13，125MHz):31 ? 8(CH2，1-C)，22.8(CH2,2-C)，73.6(CH，3-C)，83.0(C，4-C)，47.9(CH，5-C)，145.7(CH，6-C)，140.6(C，7-C)，201.1(C，8-C)，57.8(CH2,9-C)，39.4(C，10-C)，71.4(C， n-C)，29.3(CH3，12-C)，28.5(CH 3，13-C)，18.3(CH3，14-C)，18.9(CH3，15-C)，167.8(C，r-C)，138.6(C，2，-C)，65.1(CH，3，-C)，19.3(CH 3,4，-C)，127.2(CH2,5，-C)，169.9(C，4-Ac0)， 21.5(CH3,4-Ac0)，170.4(C，3'-Ac0)，22.4(CH 3,3'-Ac0)。紅外波譜中的1757cm-1 與1648cm-1 吸收帶表明結構中存在羰基與雙鍵片段。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有24個碳信號，包括 七個甲基，四個亞甲基(一個烯烴碳），四個次甲基(兩個連氧碳和一個烯烴碳），以及九個季 碳（四個羰基碳，兩個烯烴碳和兩個含氧季碳）。以上功能結構再結合不飽和數表明該化合 物為雙環結構。 1H-NMR譜結合HSQC譜顯示五個甲基質子信號SH 〇.99(3H，s)、1.32(3H，d，J = 6.3抱）、1.44(311，8)、1.47(311，8)、1.56(311，8)，兩個乙酰基甲基質子信號知1.96(311，8)與 1.99(3H，s)，一個烯屬亞甲基質子信號S H 6.33(111，(1，1=12.3泡）與6.62(111，(1，了 = 12.3他），兩個連氧次甲基質子信號知5.91(111，8)與5.14(1114，1 = 6.311)，一個烯屬次甲 基質子信號Sh6.83 (1H，d，J = 1.3Hz)，以上匪R數據可以確認該化合物為闊苞菊酮衍生物。 HMBC譜中H3-12與C-11、H 3-13與C-11、H3-14與C-10、H3-15與C-4的相關信號可以歸屬為闊苞 菊酮上的片段，C-3位質子信號移向低場說明C-3羥基被酯化，而通過HMBC譜中的H-3與C-1' 相關信號得到進一步確認。通過HMBC譜中H-3 '與3 ' -AcO、C-2 '和C-4 '以及H2-5 '與C-2 '和C-1'相關信號可以確認結構中存在3 ' -乙酰基-2 ' -烯-丁酰氧基邊鏈結構。C-l 1 (SC71.4)位的 化學位移表明其連有一個羥基。NOESY譜中He-l/H 3-14，Hf!-l/H-3，H-3/H3-15以及H3-14/H3-15的相關信號表明H-3，H 3-14與H3-15在闊苞菊酮骨架的同側，此外Ha-l/H-5相關信號暗示 H-5在H-3和H 3-14的異側。該化合物的相對構型進一步通過X-單晶衍射確認，C-3位的絕對 構型通過酸解反應與Mosher法可以確認為R構型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及 文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如下所示，立體構型進一步通過ECD試驗 確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學式及碳原子編號如下：
[0022] 實施例2:藥理作用
[0023] 1、材料與方法
[0024] 1.1動物
[0025]實驗動物SPF級昆明小鼠，雌雄各半，體重18~22g，購自廣州中醫藥大學實驗動物 中心。
[0026] 1.2藥物與試劑
[0027] 頭孢氨芐購自中國藥品生物制品檢定所，化合物（I)自制，制備方法見實施例1。鹽 酸氟西汀膠囊（百憂解）（禮來蘇州制藥有限公司產品，規格:20mg/片）；重酒石酸去甲腎上 腺素(NE);腎上腺素(E);鹽酸多巴胺(DA); 5-羥色胺鹽酸鹽(5-HT);以上5種對照品均購自 中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用）；乙腈(色譜純，澳洲移民局科技有限公司）；辛烷 磺酸鈉(B8,分析純，天津市大茂化學試劑廠）；高氯酸(分析純，廣州化學試劑廠）；磷酸二氫 鈉(分析純，廣州化學試劑廠）。
[0028] 1.3主要儀器
[0029]懸尾實驗裝置自制，木棒上用紙板隔離成2個區，用膠布固定鼠尾;游泳實驗裝置 為矩形玻璃缸（19.4cmX20.4cm);鉆石牌機械秒表3個，上海皇固儀器有限公司；庫侖陣列 電化學高效液相色譜儀（美國ESA公司：Model5600A-16通道檢測器，Model 582solvent Delivery System，Mode 1542 自動進樣器，Coularray Win工作站）；Dionex-Tcc_100 型柱溫 箱(美國戴安公司）；Thermo D-37520型高速冷凍離心機(德國Heraeus公司）；Phs-25型pH計 (上海精密科學儀器有限公司）；GenPure超純水系統(德國TKA公司）；KQ-500型超聲波清洗 器(昆山市超聲儀器有限公司）；3K超濾管(PALL公司）；BP211D電子天平(德國Sartorious); 佳美SK-r決速混勾器(江蘇金壇市佳美儀器廠）。
[0030] 1.4小鼠懸尾實驗(TST)
[0031] 取小鼠50只，隨機分成5組，每組10只。分別為空白對照組(生理鹽水）、陽性對照組 (鹽酸氟西汀4mg/mL)及頭孢氨節組(80mg/kg)、化合物（I)組(80mg/kg)、頭孢氨節與化合物 (I)組合物組【（40mg/kg)頭孢氨芐+ (40mg/kg)化合物（I)】，自由飲水進食灌胃1次/d， 〇.2mL/只，連續灌胃15d，第1、3、5、7天給藥lh后，將小鼠尾部距末端約2cm處用膠布黏住固 定，使其頭部向下懸掛呈倒懸狀，離箱底約5cm。中間以擋板隔離小鼠視線。總觀察6min，前 2min為適應時間，觀察后4min內小鼠的不動（小鼠在空中停止掙扎，或僅有細小的肢體運 動)時間。
[0032] 1 ? 5小鼠強迫游泳實驗(FST)
[0033] 實驗前24h進行游泳訓練15min，禁食不禁水，實驗前12h禁食。第15天給藥lh后進 行游泳實驗。將小鼠單只放入水深l〇cm，水溫（27±3)°C的矩形容器內，總觀察6min，適應 2min后開始計算后4min內累計不動(漂浮不動狀態，僅露出鼻孔保持呼吸，四肢偶爾劃動以 保持身體不至于沉下去)時間。
[0034] 2、實驗結果
[0035] 2.1對小鼠懸尾不動時間的影響
[0036]結果如表1所示。小鼠在懸尾模型中出現的不動狀態反映了其絕望行為，給藥組抗 抑郁活性從第3天開始體現，與空白對照組比較，頭孢氨芐與化合物（I)組合物顯著減少小 鼠懸尾不動時間(P〈〇.01)，頭孢氨芐組、化合物（I)組小鼠懸尾不動時間降低(P<〇.05)。 [00 37] 表1對懸尾小鼠不動時間的影響（s，x土 s，n = 8)
[0039] 2.2對小鼠強迫游泳不動時間的影響
[0040] 結果如表2所示。與空白對照組比較，頭孢氨芐與化合物（I)組合物組小鼠游泳的 不動時間均顯著縮短（P<0.01)，頭孢氨芐組、化合物（I)組小鼠游泳不動時間降低（P〈 0.05)〇
[0041 ] 表2對小鼠強迫游泳不動時間的影響(x 土 s，n = 10)
[0043] 以上結果表明，頭孢氨芐和化合物（I)均具有明顯的抗抑郁作用，并且兩者合用抗 抑郁效果顯著增強，可以開發成抗抑郁的藥物。
[0044] 上述實施例的作用在于說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物α)，2. -種頭孢氨芐的藥物組合物，其特征在于:包括頭孢氨芐、如權利要求1所述的化合 物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據權利要求2所述的頭孢氨芐的藥物組合物，其特征在于:藥學上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據權利要求2所述的頭孢氨芐的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將穿 心蓮粉碎，用65~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用6%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫 8個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70 %乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為10:1、5:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備治療抑郁癥的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的頭孢氨芐的藥物組合物在制備治療抑郁癥的藥物中的應 用。
【文檔編號】A61K31/545GK105820053SQ201610258255
【公開日】2016年8月3日
【申請日】2016年4月23日
【發明人】黃亦瓊
【申請人】黃亦瓊