毒株或分離株、或者預防由一 或多種H7流感病毒毒株或分離株所致流感感染或疾病的方法。在運個實施方案中，所述方 法包括給有需要的對象施用治療有效量的本發明所述單克隆抗體如鼠 mAb 11B9或mAb 62 或者嵌合的或人源化單克隆抗體或者其抗原結合片段、包含編碼所述抗體或抗體片段的多 核巧酸的核酸分子、包含所述多核巧酸的載體、或者表達所述載體的細胞。在一個實施方案 中，所述對象是免疫功能低下的，是嬰兒、幼兒或老人。在另一個實施方案中，所述施用提供 了治療益處。在再一個實施方案中，所述治療益處包括抑制流感病毒滴度的增加、降低流感 病毒滴度、抑制流感病毒復制的增加、降低流感病毒復制、抑制流感病毒增殖的增加或者降 低流感病毒增殖，或者降低對象中與流感病毒感染相關的一或多個癥狀或并發癥的進展、 嚴重度、頻率、持續時間或可能性。在一個實施方案中，所述癥狀或并發癥選自發冷、發熱、 咳嗽、咽喉痛、鼻充血、竇充血、鼻感染、竇感染、身體疼痛、頭痛、疲勞、肺炎、支氣管炎、耳感 染、耳痛和死亡。在另一個實施方案中，所述治療益處包括促進對象從H7流感病毒感染中康 復。在進一步的實施方案中，給對象施用的藥劑是在對象感染流感H7病毒之前、基本同時或 之后施用。
[0070] 本發明的抗體可W使用已知技術制備為生理學可接受的配制物，可包含藥物可接 受的運載體、稀釋劑和/或賦形劑。例如，將本發明的及如本文所述的抗體包括任何功能性 等價抗體或其功能部分與藥物可接受的運載體、稀釋劑和/或賦形劑組合W形成藥物組合 物。合適的藥物運載體、稀釋劑和/或賦形劑為本領域熟知，包括例如憐酸鹽緩沖鹽水溶液、 水、乳狀液如油/水乳狀液、各種類型增濕劑、無菌溶液等。
[0071] 本發明的藥物組合物的配制可W根據本領域技術人員已知的標準方法實現。見例 如通過引用并入本文的Remington:The Science and Practice of Pharma巧，21st Ed., Ed.D.B.Troy,Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,2006。
[0072] 本發明的組合物可W固體、液體或氣霧劑形式W合適的藥物有效劑量給對象施 用。舉例的固體組合物包括丸劑、乳霜和可植入的劑量單位。丸劑可W 口服。治療性乳霜可 W局部施用。可植入的劑量單位可W局部施用（例如在腫瘤部位），或者可W植入W全身性 釋放治療組合物(例如皮下植入）。舉例的液體組合物包括適合肌肉、皮下、靜脈內、動脈內 注射的配制物，及適于局部和眼內施用的配制物。舉例的氣霧劑配制物包括向肺部施用的 吸入性配制物。
[0073] 組合物可W通過標準施用途徑施用。通常地，組合物可W通過局部、口服、直腸、 鼻、皮內、腹膜內或腸道外(例如靜脈內、皮下或肌肉注射)途徑施用。此外，組合物可W滲入 緩釋基質如可生物降解的聚合物中，該聚合物植入希望施用的部位附近，例如在腫瘤部位。 所述方法包括施用單一劑量，在預定時間間隔施用重復劑量，及在預定時間持續施用。如本 文所用，持續釋放基質是由通常為聚合物的材料制成的基質，所述聚合物可通過酶或酸/堿 水解或通過溶解而降解。一旦插入機體，所述基質通過酶和體液起作用。持續釋放的基質選 自生物相容的材料如脂質體、聚交醋(聚乳酸）、聚乙交醋（乙醇酸的聚合物）、聚交醋共乙交 醋(乳酸與乙醇酸的共聚物）、聚酢、聚(正)醋、多膚、透明質酸、膠原、硫酸軟骨素、簇酸、月旨 肪酸、憐脂、多糖、核酸、聚氨基酸、氨基酸如苯丙氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、多核巧酸、聚乙締 丙締、聚乙締化咯燒酬和娃樹脂。優選的可生物降解的基質是聚交醋、聚乙交醋或聚交醋共 乙交醋(乳酸與乙醇酸的共聚物)之一的基質。
[0074] 本發明的組合物可W與其它組合物組合施用，所述其它組合物包含生物活性物質 或化合物，特別是選自如下一組的至少一種化合物:抗氧化刺激的化合物，抗調亡化合物， 金屬馨合物，DNA修復抑制劑如贓侖西平和代謝物，3-氨基-1-丙橫酸(3APS)，1，3-丙烷二橫 酸（1，3PDS)，α-分泌酶激活物，β-和丫-分泌酶抑藥劑，τ蛋白，神經遞質，β-折疊破壞劑，淀 粉樣β清除/耗竭細胞成分，Ν-末端截短的淀粉樣β抑制劑包括焦谷氨酸化淀粉樣盼-42,抗 炎分子，"非典型抗精神病藥"如氯氮平、齊拉西酬、利培酬、阿立贓挫或奧氮平或者膽堿醋 酶抑制劑(化Els)如他克林、利斯的明、多奈贓齊和/或加蘭他敏，Ml激動劑及其它藥物包括 任何淀粉樣或τ修飾藥物和營養補充劑如維生素 B12，半脫氨酸，乙酷膽堿前體，卵憐脂，膽 堿，銀杏(Ginkgo biloba)，乙酷-k肉毒堿，艾地苯釀，丙戊茶堿，或者黃嚷嶺衍生物，W及 本發明的抗體，及任選藥物可接受的運載體和/或稀釋劑和/或賦形劑及治療疾病的程序。 [00對蛋白質藥物活性物質可Wlng-lOmg/劑的量存在。通常地，施用方案應在0.化g- lOmg本發明抗體范圍之間，特別是在l.Oyg-l .Omg，及更特別是在1 .Oyg-lOOyg范圍之間，運 些范圍內的所有個體數值均也是本發明的一部分。如果通過持續注入形式施用，更合適的 劑量可W是在0.01 yg-lOmg單位/kg體重/小時之間，在運些范圍內的所有個體數值均也是 部分的一部分。
[0076] 通常是腸道外施用，例如靜脈內注射。腸道外施用的制備物包括無菌水性或非水 性溶液、懸浮液和乳狀液。非水性溶劑包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄攬油，及 可注射有機醋如油酸乙醋。水性溶劑可W選自水、乙醇/水溶液、乳狀液或懸浮液，包括鹽水 和緩沖劑。腸道外運載體包括氯化鋼溶液、Ringer's葡萄糖、葡萄糖和氯化鋼、乳酸化 Ringer's或者不揮發油。靜脈內運載體包括液體和營養補充劑、電解質補充劑（如基于 Ringer's葡萄糖的那些補充劑）等。也可W存在防腐劑，例如抗微生物劑、抗氧化劑、馨合 劑、惰性氣體等。
[0077] 藥物組合物可進一步包含蛋白質運載體如血清白蛋白或免疫球蛋白，特別是人來 源的。進一步地，根據指定用途，生物活性劑可W存在于本發明的藥物組合物中。
[0078] 第Ξ方面，本發明提供了使用本文描述的單克隆抗體或其片段鑒別、表征和定量 H7表達的方法和組合物。在一些實施方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在一 個實施方案中，冊表達與H7流感病毒的HA表達相關。在一個實施方案中，所述組合物包含本 文描述的單克隆抗體或其片段。在一些實施方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在另一個實施方案中，所述方法包括檢測H5與本文描述的單克隆抗體或其片段的結合。 在一些實施方案中，所述單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb62。在一個實施方案中，本發明設 及利用運種單克隆抗體或相關結合蛋白的免疫巧光測定（IFA)、免疫組織化學測定及其它 方法，包括ELI SA、血凝抑制化I)測定及病毒中和(VN)測定。所有運些測定為本領域技術人 員熟知。在一個實施方案中，可W利用如本文所述的雙功能的ELISA。
[0079] 在一些實施方案中，鑒別和/或定量H7表達的方法和組合物是用于鑒別和/或定量 疫苗中的H7病毒免疫原性物質。在一個實施方案中，所述免疫原性物質包含血凝素或其抗 原性部分或者編碼血凝素或其抗原性部分的核酸。在另一個實施方案中，所述抗原性部分 包括血凝素的表位。在一個實施方案中，所述免疫原性物質是包含血凝素的病毒。在另一個 實施方案中，所述病毒是滅活的。在再一個實施方案中，所述病毒是減毒的病毒。在另一個 實施方案中，所述病毒是病毒體形式。在進一步的實施方案中，所述病毒得自蛋或細胞培 養。在另一個實施方案中，所述免疫原性物質是包含血凝素的分裂病毒或者分裂病毒抗原 性制備物。在一個實施方案中，所述免疫原性物質是血凝素或其抗原性部分。在另一個實施 方案中，所述血凝素或其抗原性部分已經分離。在再一個實施方案中，所述血凝素或其抗原 性部分是通過表達系統產生的。在一個實施方案中，所述表達系統是任何表達系統，如病毒 表達載體，其中血凝素或其抗原性部分呈現或展示在病毒表面上。在一個實施方案中，所述 病毒表達載體是任何病毒表達載體，如修飾的痘苗病毒表達載體、腺病毒表達載體、痘病毒 表達載體、桿狀病毒表達載體等。在一個實施方案中，所述表達載體是桿狀病毒表達載體， 且呈現或展示血凝素或其抗原性部分的病毒是桿狀病毒。在另一個實施方案中，所述免疫 原性物質是編碼血凝素或其抗原性部分的核酸，其能在對象中表達。
[0080]第四方面，本發明提供了檢測生物樣品中甲型流感H7亞型病毒或者檢測生物樣品 中針對甲型流感H7血凝素的抗體(在此稱作抗-H7抗體）的試劑盒和方法。在檢測生物樣品 中甲型流感H7亞型病毒的一個實施方案中，所述方法包括將樣品與第一抗體接觸，第一抗 體是如本文所述單克隆抗體或其抗體片段(有時稱作捕獲抗體）。在另一個實施方案中，所 述方法進一步包括將樣品與本文所述第二抗體或其抗體片段接觸，第二抗體或其抗體片段 特異性結合甲型流感H7血凝素的表位，其中第二抗體含有或者與可檢測元件綴合(有時稱 作檢測抗體）。在檢測生物樣品中甲型流感H7亞型病毒血凝素的抗體的一個實施方案中，所 述方法包括將已經加入甲型流感H7亞型病毒的對照H7血凝素(在此有時稱作對照H7抗原） 的樣品與第一抗體接觸，第一抗體是如本文所述的單克隆抗體或其抗體片段(有時稱作捕 獲抗體）。在另一個實施方案中，所述方法進一步包括將樣品與如本文所述的第二抗體或其 抗體片段接觸，第二抗體或其抗體片段特異性結合甲型流感H7亞型病毒的表位，其中第二 抗體含有或與可檢測元件綴合(有時稱作檢測抗體）。在一些實施方案中，第二抗體含有放 射性原子，與巧光分子綴合，或者與酶綴合。在其它實施方案中，第一抗體固定在固體表面 上。在一些實施方案中，第一單克隆抗體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在其它實施方案中，第二 單克隆抗體是mAb 11B9或mAb 62。在一個實施方案中，對照H7抗原是重組H7抗原。在另一個 實施方案中，對照H7抗原是表面表達H7的病毒如桿狀病毒。在一個實施方案中，本發明設及 利用運種單克隆抗體或相關結合蛋白的免疫巧光測定（IFA)、免疫組織化學測定及其它方 法，包括化ISA、血凝抑制化I)測定和病毒中和(VN)測定。在一個實施方案中，利用如本文所 述的雙功能化ISA測定。
[0081 ]在一個實施方案中，所述測定是雙功能ELISA，其對于H7禽流感病毒的抗原和抗體 檢測均有效。在一個實施方案中，mAb 11B9或mAb 62之一用作捕獲抗體，mAb 11B9或mAb 62 的另一種用作檢測抗體。在一個實施方案中，捕獲抗體包被在固相上，如微滴定板、微珠等。 為了檢測生物樣品中的抗原，將樣品與捕獲抗體接觸足W使得樣品中的任何H7抗原均與捕 獲抗體結合的一段時間。然后將檢測抗體與已結合的樣品H7抗原(如果有的話)接觸足W使 得檢測抗體結合已結合的樣品H7抗原的一段時間。然后確定任何檢測抗體的結合情況，W 確定樣品中H7抗原的存在和/或量。為了檢測生物樣品中的抗-H7抗體，將對照H7抗原加入 生物樣品中制備混合物。在一個實施方案中，在生物樣品中加入固定量的對照H7抗原。對照 H7抗原結合生物樣品中也許存在的任何抗-H7抗體。然后將混合物與捕獲抗體接觸足W使 得對照H7抗原結合捕獲抗體的一段時間。如果抗-H7抗體存在于生物樣品中，則結合捕獲抗 體的對照H7抗原中的一些將結合抗-H7抗體，且結合捕獲抗體的對照H7抗原中的一些將游 離于結合的抗體。在一個實施方案中，對照H7抗原是重組H7抗原。在另一個實施方案中，對 照H7抗原是表面表達H7的病毒如桿狀病毒。然后將檢測抗體與未被樣品H7抗體(如果有的 話)結合的任何結合的對照H7抗原接觸一段時間，所述時間足W使得檢測抗體結合未被樣 品H7抗體結合的結合的對照H7抗原。然后確定檢測抗體的結合情況，W確定樣品中H7抗體 的存在和/或量。在一個實施方案中，結合的檢測抗體的水平降低表示生物樣品中存在抗- H7抗體。
[0082]在一個實施方案中，試劑盒包含第一抗體，其是本文所述單克隆抗體或其抗體片 段W及進行檢測甲型流感H7亞型病毒的測定的說明書。在一些實施方案中，所述單克隆抗 體是鼠 mAb 11B9或mAb 62。在另一個實施方案中，所述試劑盒進一步包含第二抗體，其特異 性結合甲型流感病毒的H7血凝素的表位，其中第二抗體含有或者與可檢測元件綴合。在一 些實施方案中，第二抗體是mAb 11B9或mAb 62。在一些實施方案中，第二抗體含有放射性原 子，與巧光分子綴合，或者與酶綴合。在其它實施方案中，第一抗體固定在固體表面上。在另 一個實施方案中，試劑盒進一步包含H7血凝素抗原。在一些實施方案中，H7血凝素抗原是重 組H7蛋白。在其它實施方案中，H7血凝素抗原是表面表達Η 7的病毒如桿狀病毒。在一個實 施方案中，所述試劑盒可用于鑒別和/或定量疫苗中的Η7病毒免疫原性物質。在另一個實施 方案中，所述試劑盒可用于檢測生物樣品中的Η7血凝素或者針對Η7血凝素的抗體。在一些 實施方案中，所述試劑盒設及利用運種結合蛋白的免疫巧光測定(IFA)、免疫組織化學測定 及其它方法，包括化ISA、血凝抑制化I)測定和病毒中和(VN)測定。所有運些測定均為本領 域技術人員熟知。在一些實施方案中，可利用如本文所述的雙功能ELISA。
[00削在本研究中，表征了針對H7HA1的一組mAb,并鑒定其代表性中和表位。在用冊AI H7N7病毒感染攻擊的小鼠中評估運些mAb的預防效力。通過觀測體重喪失、存活率及感染的 小鼠肺中病毒荷載清除率的動力學確定效力。
[0084] 如本文所示，在H7N1免疫的小鼠中產生的mAb 11B9和mAb 62能特異性結合及中和 不同的H7流感病毒毒株。基于其中和活性，使用逃逸突變體測序鑒別兩個mAb的中和表位。 被動施用抗體仍是對抗流行性感冒的策略。因此，在小鼠中根據存活百分比和體重百分比 評估兩種抗H7流感病毒的mAb的預防效力。在單一劑量中施用mAb 11B9或mAb 62在小鼠模 型中示出針對致死性H7N7流感的100%保護作用。用運兩種mAb治療幫助控制感染的初始進 程，因此使得動物增加有效的免疫應答。運些研究示出使用mAb 11B9或mAb 62的被動免疫 治療在預防高致病性H7N7感染中是有效工具，提供了將來流感流行需要的立即免疫力。運 種方法的臨床應用通過人源化運些抗體及在用H7N7流感病毒攻擊的非人靈長類動物中作 為治療劑進行評估而進一步確定。
[0085] 除非特別指出，實施本發明是應用本領域技術人員已知的常規化學、分子生物學、 微生物學、重組DNA技術、遺傳學、免疫學、細胞生物學、細胞培養和轉基因生物學技術進行， 見例女日Maniatis et al. , 1982 .Molecular Clonin邑（Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York)；Sambrook et al.,1989.Molecular Cloning,2nd Ed.(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York)；Sambrook and Russell,2001.Molecular Cloning,3rd Ed.(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York);Green and Sambrook,2012,Molecular Cloning, 4th Ed.(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, New York); Ausubel et al.,1992,Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley&Sons, including periodic updates);Glover ,1985,DNA Cloning(IRL Press.Oxford)； Russell,1984,Molecular biology of plants :a laboratory course manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.)；Anand,Techniques for the Analysis of Complex Genomes ,(Academic Press ,New York,1992)；Guthrie and Fink,Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology(Academic Press,New York, 1991);Harlow and Lane，1988，Antibodies，（Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,New York)；Nucleic Acid Hybridization(B.D.Hames&S.J.Higgins eds.1984)；Transcription And Trans1ation(B.D.Hames&S.J.Higgins eds.1984); Culture Of Animal Cells(民.I.Freshney，Alan 民.Liss，Inc.，1987);Immobilized Cells And Enzymes(I民L Press，1986);B.Perbal，A Practical Guide To Molecular Cloning (1984)；the treatise,Methods In Enzymology(Academic Press,Inc.,N.Y.)；Methods In Enzymology，Vols.154and 155(Wu et al.eds.)，Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology(Mayer and Walker，eds.，Academic Press，London，1987); Handbook Of Experimental Immunology，Volumes I-IV(D.M.Weir and C.C.Blackwell， eds.,1986);民iott,Essential Immunology，6 th Edition ,Blackwel1 Scientific Publications,Oxford,1988；Fire et al.，民NA Interference Technology:From Basic Science to Drug Development，Cambridge University Press，Cambridge，2005; Schepers，RNA Interference in Practice,Wiley-VCH,2005；EngeIke,RNA Interference (RNAi):The N