Bap18在促進前列腺癌方面的應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物基因技術領域，尤其是涉及BAP18在促進前列腺癌方面的應用。
【背景技術】
[0002]雄激素受體(androgenreceptor，AR)是類固醇激素受體家族成員之一，通過與其配體雄激素結合激活而在雄性個體發生、生長發育和生殖功能的各方面都起著必不可缺的作用，諸如誘導性分化、第二性征的形成和維持、精子發生的起始和維持、垂體激素分泌的反饋調節等。AR與其他核受體超家族成員結構基本相似，包含5個結構和功能特異性的結構域，從N末端到C末端依次為氨基末端結構域(NTD)、DNA結合結構域(DBD)、鉸鏈區和配體結合結構域(1^))<^1?通常定位在細胞質中，與熱休克蛋白!^?-90、把?-70、!^?-56，細胞骨架蛋白和其他分子伴侶結合。與配體(如雄激素)結合后，AR與熱休克蛋白HSP90解離從細胞質轉運至細胞核內。隨后，AR二聚體結合到靶基因的雄激素反應元件區，激活靶基因的轉錄從而發揮生物學功能。
[0003]前列腺癌是男性生殖系統最常見的惡性腫瘤之一，在導致男性死亡的癌癥中排第二位。AR是一種轉錄因子，可與其他多種輔調節因子結合調控下游基因的轉錄活性和信號通路，研究證實雄激素受體通路在前列腺癌的發生發展中具有非常重要的作用。目前拮抗雄激素作用的雄激素剝奪療法是前列腺癌治療的首選方法。然而隨著時間的推移ADT治療后的患者往往出現更加難治愈的去勢抵抗前列腺癌。患者進展到去勢抵抗這一階段有多方面的假說和機制研究。其中，AR基因突變、AR變異體的產生以及AR輔助調節因子對AR功能的調控都在CRPC的進程中起重要作用。然而大量研究普遍認為前列腺癌的進展很大程度上始終依賴雄激素受體的信號調控，甚至在去勢抵抗階段仍如此。
[0004]近年來，越來越多的研究表明轉錄輔調節因子對AR下游基因表達的調控對前列腺癌的發生發展十分關鍵，如SRC-1，Tip60，CBP，P/CAF，JHDM2A，LSDl等。其中，上調AR介導基因轉錄活性的因子包括組蛋白乙酰化酶SRC-1，Tip60，CBP，P/CAF及組蛋白去甲基化酶JHDM2A和LSDl，它們都在促進前列腺癌的發生發展過程中發揮重要作用。此外，組蛋白去乙酰化酶SIRTl，N-CoR，SMRT還能夠下調AR介導的基因轉錄活性而在前列腺癌中起抑癌作用。所以，無論是雄激素受體自身的改變還是其相關轉錄輔因子的改變都能導致雄激素受體信號通路異常，影響前列腺癌的發生發展。因此，鑒定和解析AR輔調節因子在AR介導基因轉錄中的表觀遺傳學機制越來越受到關注，對于進一步研究腫瘤治療中潛能藥物靶點也具有重要的科學意義。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供BAP18在促進前列腺癌方面的應用，BAP18可以促進前列腺癌細胞的生長，并在臨床前列腺癌中表達增多，在前列腺癌的發生發展中起促進作用。
[0006]本發明的技術方案是:
[0007]BAP18在促進前列腺癌方面的應用。
[0008]優選的，BAP18可促進前列腺癌細胞的生長。
[0009]優選的，BAP18可上調AR介導的基因轉錄。
[0010]優選的，BAP18作為橋梁分子通過招募MLLl復合物相關蛋白到AR靶基因啟動子區催化組蛋白H3K4三甲基化和H4K16乙酰化，促進AR靶基因PSA、UBE2C、FASN等的轉錄，從而進一步促進前列腺癌特別是去勢抵抗前列腺癌的發生發展。
[0011]優選的，BAP18作為靶點起到早期發現、治療前列腺癌及去勢抵抗前列腺癌的作用。
[0012]本發明具有的優點和積極效果是:本發明為治療前列腺癌特別是去勢抵抗前列腺癌提供了新思路、新靶點。
【附圖說明】
[0013]圖1是BAP18的氨基酸序列。
[0014]圖2是BAP18表達質粒。
[0015]圖3是針對BAP18的shRNA沉默效果。
[0016]圖4是BAP18對AR靶基因轉錄水平的影響。
[0017]圖5是BAP18沉默對細胞生長增值能力的影響。
[0018]圖6是BAP18沉默對小鼠移植瘤生長的影響。
[0019]圖7是BAP18在PCa和BPH中的表達。
【具體實施方式】
[0020]S1、根據BAP18的氨基酸序列(如圖1)構建FLAG標簽的BAP18表達質粒(如圖2)。
[0021 ] S2、利用針對BAP18的shRNA慢病毒載體感染AR陽性表達的前列腺癌細胞系CWR22Rvl，建立穩定沉默BAP18的前列腺癌細胞系及對照細胞系。
[0022]如圖3所示，shcontrol中BAP18正常表達，但shBAP18中BAP表達明顯降低，干擾BAP18表達的目的達到。2個細胞系中內參基因GAPDH表達量一致，AR和AR-V的表達也未受影響。
[0023]S3、通過Realtime-PCR檢測BAP18對AR的靶基因轉錄的影響，結果顯示BAP18選擇性的調控AR的一部分靶基因。結果如圖4所示，對PSA，KLK4，UBE2C，SLC45A3和FASN的影響較明顯。
[0024]S4、生長曲線和克隆形成實驗的結果表明沉默BAP18抑制了細胞的生長增殖能力。
[0025]如圖5所示，BAP18沉默的實驗組細胞數低于對照組，說明BAP18沉默抑制細胞的生長繁殖)
[0026]S5、荷瘤小鼠實驗表明，沉默BAP18抑制了前列腺癌細胞CWR22Rvl在小鼠體內異種移植瘤的生長，如圖6所示，實驗組ShBAPlS組的瘤體小于對照組shCtrl，尤其是在雄激素剝奪治療后這種抑制作用更加顯著。
[0027]S6、如圖7所示，通過檢測前列腺癌組織及前列腺增生組織樣本切片中BAP18的表達情況發現，BAP18在前列腺癌中表達高于前列腺增生組織。
[0028]本發明利用AR-PEV果蠅轉基因模型系統篩選得到雄激素受體AR的新轉錄輔調節因子BAP18，證實在剝奪雄激素環境下BAP18仍可以上調AR介導的基因轉錄。BAP18作為橋梁分子通過招募MLLl復合物相關蛋白到AR靶基因啟動子區催化組蛋白H3K4三甲基化和H4K16乙酰化，促進AR靶基因PSA、UBE2C、FASN等的轉錄，從而進一步促進前列腺癌特別是去勢抵抗前列腺癌的發生發展。由此本發明為治療前列腺癌特別是去勢抵抗前列腺癌提供了新思路、新勒點。
[0029]以上對本發明的一個實施例進行了詳細說明，但所述內容僅為本發明的較佳實施例，不能被認為用于限定本發明的實施范圍。凡依本發明申請范圍所作的均等變化與改進等，均應仍歸屬于本發明的專利涵蓋范圍之內。
【主權項】
1.BAP18在促進前列腺癌方面的應用。2.根據權利要求1所述的BAP18在促進前列腺癌方面的應用，其特征在于:BAP18可促進前列腺癌細胞的生長。3.根據權利要求1所述的BAP18在促進前列腺癌方面的應用，其特征在于:BAP18可上調AR介導的基因轉錄。4.根據權利要求1所述的BAP18在促進前列腺癌方面的應用，其特征在于:BAP18作為橋梁分子通過招募MLLl復合物相關蛋白到AR靶基因啟動子區催化組蛋白H3K4三甲基化和H4K16乙酰化，促進AR靶基因PSA、UBE2C、FASN等的轉錄，從而進一步促進前列腺癌特別是去勢抵抗前列腺癌的發生發展。5.根據權利要求1所述的BAP18在促進前列腺癌方面的應用，其特征在于:BAP18作為新靶點起到早期發現、治療前列腺癌及去勢抵抗前列腺癌的作用。
【專利摘要】本發明提供了BAP18在促進前列腺癌方面的應用，尤其是以下方面的應用：BAP18可促進前列腺癌細胞的生長；BAP18可上調AR介導的基因轉錄；BAP18作為橋梁分子通過招募MLL1復合物相關蛋白到AR靶基因啟動子區催化組蛋白H3K4三甲基化和H4K16乙酰化，促進AR靶基因PSA、UBE2C、FASN等的轉錄，從而進一步促進前列腺癌特別是去勢抵抗前列腺癌的發生發展；BAP18在早期發現、治療前列腺癌及去勢抵抗前列腺癌中將發揮其重要的新靶點作用。
【IPC分類】C07K14/47, A61P35/00
【公開號】CN105541991
【申請號】CN201510963239
【發明人】趙越, 孫士瑩, 王春玉, 孫洪邈, 鄒仁龍, 王勝利, 林琳, 聞濤, 孫戈, 孫寧, 叢日嬌, 曾凱, 劉偉, 楊磊
【申請人】中國醫科大學
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2015年12月16日