大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測定方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物工程技術領域，尤其設及一種大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因 子表達水平的測定方法。
【背景技術】
[0002] 肪組織不僅是能量儲備場所，還是活躍的內分泌器官。近年來的研究已經闡明，月旨 肪組織可W分泌多種炎癥因子，參與原發性炎癥。因此闡明脂肪組織在炎癥發生中的作用， 將有助于重新認識一些疾病的發病機制，為疾病的防治提供新的思路。
[0003] 但是化F4在脂肪組織中的抗炎作用和化F7在脂肪組織中的促炎作用屬于技術空 白。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測 定方法，旨在解決KLF4在脂肪組織中的抗炎作用和KL巧在脂肪組織中的促炎作用屬于技術 空白的問題。
[0005] 本發明是運樣實現的，一種大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測定 方法，所述大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測定方法肥胖狀態下，高水平 的FFA與化R4結合上調化F7表達，促進炎癥因子表達，導致釋放組織發生炎癥；同時，抑制 TLR9水平而下調KLF4表達，減弱KLF4對炎癥信號通路關鍵因子的抑制作用，促進炎癥反應。
[0006] 進一步，所述大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測定方法包括:高 脂喂養4周后，實驗組大鼠體重開始顯著高于對照組，第10周實驗組大鼠體重進入平臺期， 但仍高于對照組;高脂喂養第4及第10周，實驗組大鼠血漿。。4、6111、了6、1'(：、1化、了^-〇水平 高于對照組，LPT、APN水平低于對照組；網膜脂肪組織中，實驗組化R9、KLF4 mRNA表達水平 低于對照組，KLF7、SRC和IL-6 mRNA表達水平高于對照組;TLR9與血漿FFA負相關，與KLF4正 相關;KLF4與SRC、NF-kB負相關;KLF7與TLR4、SRC、NF-kB和IL-6正相關，與KLF4負相關。
[0007] 進一步，所述大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測定方法具體包 括：
[000引兩組大鼠均分籠喂養，對照組飼W米、豆巧、魚粉、面粉、教皮、食鹽、憐酸氨巧、石 粉、多種維生素、多種微量元素、氨基酸的基礎飼料，實驗組飼W高脂飼料;實驗大鼠每籠8 只，每天更換飲水，隔日清理糞便，每周進行動物房消毒，每兩周測量體重1次；
[0009] 用已高壓的手術器械采集大鼠網膜脂肪組織，3cmX3cm置于5ml凍存管內，標記時 間、編號及分組信息，置于液氮速凍，-80°C保存；
[0010] 稱取lOOmg左右實驗脂肪組織樣品，并至于液氮預冷的研鉢中低溫下研磨至粉狀， Trizol法提取總RNA，反轉錄為cDNA，qRT-PCR法檢測KLF4、KLF7及NF-地炎癥信號通路關鍵 因子(TLR4，TLR9，NF-地，SRC，IL-6 )mRNA表達水平。
[0011] 進一步，所述RNA濃度為20ngAU-1500ngAU，A260/280的比值介于 1.8-2.1。
[0012] 進一步，所述PCR反應體系為20μ1:腳ase-free水化1，上游引物0.化1，下游引物 0.5yl，SYBR Select Master Mix 10yl，cDNA 化1。
[001引進一步，所述PCR反應條件為：經94°C30s預變性后，95°C變性5s，60°C34s，40個循 環。
[0014] 本發明的另一目的在于提供一種使用所述大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子 表達水平的測定方法中TLR4與KL巧的脂肪組織抗炎作用祀點。
[0015] 本發明提供的大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測定方法，通過本 發明發現網膜脂肪組織中，肥胖組大鼠化R9、KLF4mRNA表達水平低于正常體重組，KLF7、SRC 和IL-6mRNA表達水平高于正常體重組;TLR9與血漿FFA負相關，與化F4正相關;KLF4與SRC、 NF-kB負相關;KL巧與TLR4、SRC、NF-kB和化-6正相關，與KLF4負相關(P<0.05)。W上結果表 明肥胖狀態下，高水平的FFA-方面可與化R4結合上調化F7表達，促進炎癥因子表達，導致 釋放組織發生炎癥；同時，可抑制化R9水平而下調化F4表達，減弱KLF4對炎癥信號通路關鍵 因子的抑制作用，從而促進炎癥反應。本研究結果將為肥胖導致炎癥的具體機制提供理論 依據，同時化R9，KL巧及KLF4可作為治療肥胖、肥胖導致炎癥性疾病W及相關慢性代謝性疾 病(如2型糖尿病)藥物作用祀點。
【附圖說明】
[0016] 圖1是本發明實施例提供的大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測定 方法流程圖。
[0017] 圖2是本發明實施例提供的對照組大鼠與實驗組大鼠體重比較示意圖。
[0018] 圖3是本發明實施例提供的KLF7與炎癥信號通路關鍵基因相關性示意圖 (Spearman相關性分析法，沖<0.05兩組間差異具有統計學意義）。
【具體實施方式】
[0019] 為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，W下結合實施例，對本發明 進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用W解釋本發明，并不用于 限定本發明。
[0020] 下面結合附圖及具體實施例對本發明的應用原理作進一步描述。
[0021] 如圖1所示，本發明實施例的大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測 定方法包括W下步驟：
[0022] S101:兩組大鼠均分籠喂養，對照組飼W米、豆巧、魚粉、面粉、教皮、食鹽、憐酸氨 巧、石粉、多種維生素、多種微量元素、氨基酸的基礎飼料，實驗組飼W高脂飼料;實驗大鼠 每籠8只，每天更換飲水，隔日清理糞便，每周進行動物房消毒，每兩周測量體重1次；
[0023] S102:用已高壓的手術器械采集大鼠網膜脂肪組織，約3cmX3cm置于5ml凍存管 內，標記時間、編號及分組信息，置于液氮速凍，-80°C保存；
[0024] S103:稱取lOOmg左右實驗脂肪組織樣品，并立刻至于液氮預冷的研鉢中低溫下研 磨至粉狀，Trizol法提取總RNA，RNA濃度為20ngAU至ISOOngAU之間，A260/280的比值介于 1.8-2.1之間，立即反轉錄為cDNA，qRT-PCR法檢測KLF4、KL巧及NF-地炎癥信號通路關鍵因 子（TLR4，TLR9，NF-地，SRC，IL-6 )mRNA表達水平。
[0025]下面結合實驗對本發明的應用效果作進一步的說明。
[00%] 1、大鼠肥胖模型的建立
[0027]兩組大鼠均分籠喂養，對照組飼W基礎飼料(北京科澳協力飼料有限公司提供，原 料組成:玉米、豆巧、魚粉、面粉、教皮、食鹽、憐酸氨巧、石粉、多種維生素、多種微量元素、氨 基酸等），實驗組飼W高脂飼料(40%脂肪比）。實驗大鼠每籠8只，每天更換飲水，隔日清理 糞便，每周進行動物房消毒，每兩周測量體重1次。
[00%] 2、大鼠網膜脂肪組織炎癥通路關鍵因子表達水平的測定方法
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