核因子－κB多肽及其應用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及藥物領域，具體涉及用于預防和治療或預防類風濕性關節炎的核因 子一 KB多肽抑制劑。
【背景技術】：
[0002] 類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是臨床最常見的炎性關節病和主要致 殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%，1^的發病在我國約為0.4%。1^可發生于任何年 齡，隨著年齡的增長，發病率也隨之增高。女性高發年齡為45-55歲，性別與RA發病關系密 切，男女之比約1: 3。RA是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對稱性、多 滑膜關節炎和關節外病變為主要臨床表現，屬于自身免疫炎性疾病。患者常以手部或腕部 疼痛及腫脹(特別是腕背部的腫脹)為首發癥狀，癥狀持續不緩解，普通的對癥治療雖可以 緩解癥狀，但常常由于用藥不規則或不足量而導致癥狀反復。病情進展時可以出現明顯的 晨僵，通常可達1小時以上，并不斷加重;同時出現一定的關節功能障礙。
[0003] 類風濕關節炎的病因和發病機制尚未完全明了，其基本病理特點是血管炎和滑膜 炎。關節內滑膜血管增生，形成血管翳，導致滑膜增厚，滲出增多，分泌多種細胞因子，侵犯 軟骨并引起骨質損害。對其周圍的肌腔、韌帶、腱鞘以及肌肉等組織也均可侵蝕，從而影響 關節的穩定，容易發生關節畸形而出現功能障礙。血管炎亦可侵犯周身各臟器組織，形成系 統性疾病。
[0004] 目前治療RA的藥物分為兩大類:控制癥狀藥和控制疾病藥。由于RA病因不明，故當 今并無堪稱控制疾病的藥。控制癥狀的抗風濕藥分為四類:一、非留體類抗炎藥，通常稱為 一線藥，這類藥物種類繁多，國內市場已多達數十種。二、類固醇激素，激素是一個非常好的 止痛抗炎藥，但長期單獨使用不能改善病情，反而帶來許多副作用，激素作為二線慢作用藥 起效前的過渡性用是可以的，但用量要小，時間不宜過長。在病情較重，伴有關節外表現的 患者，短期治療沖擊，并聯合二線藥治療時必須的。三、慢作用抗風濕藥，通常稱為二線藥， 所謂慢作用藥包括抗瘧藥、金鹽、青霉胺和柳氮碘胺吡啶，它們治療RA起效慢，長期作用對 RA病情有一定緩解作用，故也稱病情改善藥。四、免疫抑制劑:常用有甲氨喋呤、環磷酰胺、 硫唑嘌呤、雷公藤、青風藤等。
[0005] 核因子-KB是一種廣泛存在于細胞內的核轉錄因子，與關節炎中炎癥的發生，軟骨 損傷，細胞迀移以及血管翳的形成都有重要的關系。以核因子-KB為作用靶點，可能成為治 療關節炎等疾病的新途徑。非留體類抗炎藥，糖皮質激素、糖胺聚糖以及新型蛋白酶體抑制 劑等發現都可抑制核因子-KB的激活。另外，核因子-KB誘騙性寡脫氧核苷酸和SiRNA干擾治 療也取得了可喜的成就。盡管如此，并沒有成熟開發的核因子一 κΒ多肽抑制劑問世，用于治 療RA 〇
【發明內容】
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[0006] 本發明目的是針對現有核因子-KB拮抗劑的特點，設計一種分子量小的核因子-KB 多肽拮抗劑，可以避免產生抗原反應，更加適用于臨床的應用。
[0007] 本發明技術方案是提供一種核因子一 κ B多肽抑制劑，其序列為 RGDTRILAQHRLYYYNSQSE，及在治療或預防類風濕性關節炎藥物中的應用。
[0008] 有益結果：
[0009] 本發明中的核因子一 KB多肽序列RGDTRILAQHRLYYYNSQSE，可以靶向抑制核因子一 KB，抑制核因子一 κΒ受體產生的生理或病理的效應，達到預防或治療類風濕性關節炎的效 果。
[0010] 發明人經過大量實驗獲知核因子一 KB多肽抑制劑3能夠抑制佐劑型大鼠類風濕關 節炎，體內實驗證明具有顯著的治療類風濕型關節炎的效果，并且副作用少，用量少成本降 低。說明本發明設計的核因子一 κΒ多肽抑制劑3科學、合理、可行有效，能作為治療或預防類 風濕性關節炎藥物。
【具體實施方式】
[0011] 所述的多肽由上海吉爾合成。
[0012] 實施例1
[0013] 多肽對佐劑型大鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用
[0014] 構建佐劑型大鼠關節炎動物模型，研究多肽對佐劑性關節炎（A d j u V a n t arthri ti s，AA)大鼠的治療作用。采用大鼠作為受試動物，SPF級SD大鼠90只（由上海西普 爾-必凱實驗動物有限公司（Sino-British SIPPR Lab.Animal Ltd)提供，動物生產許可證 號碼:SCXK(滬）2008-0016)，雄性，體重為140g-160g，隨機分成9組，分別是正常對照組，模 型對照組，多肽低中高3個劑量組(0.1，0.2，0.4mg/kg)和陽性藥對照組（甲氨蝶呤lmg/kg)。 除正常組外，第0天各實驗組建立大鼠 AA模型，方法是在大鼠的左側后足足跎注射含滅活的 結核分枝桿菌(H37RA，10mg/ml)完全弗氏佐劑0.08ml造成大鼠佐劑性關節炎模型。造模第 10天起皮下注射給藥:多肽3個劑量組(0.1，0.2，0.4mg/kg):每日兩次，連續10天；陽性藥對 照組（甲氨蝶呤lmg/kg):每五天一次，連續3次;正常對照組和模型對照組(生理鹽水）：連續 10天。分別于造模后第8，11，14，17,20,23和26天，關節評分、分別檢測左右后足足踝直徑來 觀察藥物對大鼠佐劑型關節炎的影響。關節炎評價指標如下：
[0015] 1)關節評分
[0016] 四肢:按0-4五級評分:0 =無紅斑或紅腫；1 =輕微的紅斑或腫脹，其中的一個前/ 后趾關節有紅斑或腫脹;2 =多于一只趾出現紅斑或腫脹；3 =踝或腕關節下的足爪腫脹;4 =包括踝關節在內的全部足爪腫脹。大鼠四只足分別評分，最高評分為16分。
[0017] 分別于造模后8，11，14，17，20，23和26天進行關節評分，并記錄結果。
[0018] 2)測量足踝直徑
[0019] 分別于造模前和造模后8，11，14，17，20，23和26天用游標卡尺測量大鼠左、右足踝 內側到外側的直徑和足踝厚度，并記錄結果。
[0020]試驗結果的計量資料以數學平均數加減標準差(mean 土 SD)表示，用SPSSl 1.0軟件 進行各給藥組與對照組之間進行t檢驗，表中*表示p〈0.05，**表示p〈0.01。
[0021]結果:造模后大鼠與正常大鼠相比較，在大鼠左后足跎處注射含滅活的結核分枝 桿菌完全弗氏佐劑后，左后足會迅速產生原發性關節炎，出現明顯的腫脹，并伴有潰爛;右 后足大約IOd后開始出現繼發性關節炎，評分的分值逐漸增大；同時耳部血管增生明顯，紅 腫明顯;尾部關節出現腫脹。多肽在膠原誘導大鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用結果 見表2,由表可知，多肽在膠原誘導大鼠關節炎動物模型都能發揮體內免疫保護作用，具體 結果如下：
[0022] 多肽對大鼠原發性關節炎左足足爪腫脹度的影響，大鼠陽性對照組、多肽中劑量 組左后足踝直徑與模型組比較，有極顯著性差異(P〈〇.01);整合素阻斷劑多肽低、高劑量組 左后足踝直徑與模型組比較，均有顯著性差異(P〈〇.05)，實驗結果具有統計學意義。多肽對 大鼠繼發性關節炎右足足爪腫脹度的影響，大鼠陽性對照組、多肽低、中、高劑量組右后足 踝直徑與模型組比較，有顯著性差異(P〈〇.05)。多肽對佐劑型關節炎大鼠臨床評分的影響， 多肽低、中、高劑量組四肢評分顯著低于模型對照組(P〈〇.05)，與模型對照組比較差異均有 統計學意義。
[0023] 表1多肽對佐劑型類大鼠關節炎動物模型體內免疫保護作用
[0025] *表示卩〈0.05，**表示卩〈0.01·
[0026] 結論:多肽對AA大鼠關節炎具有治療作用。
【主權項】
1. 核因子一 KB多肽，其特征在于其序列為RGDTRILAQHRLYYYNSQSE。2. 核因子一!cB多肽，在治療或預防類風濕性關節炎藥物中的應用。
【專利摘要】本發明涉及藥物領域，具體涉及具有抑制核因子－κB，能預防和治療類風濕性關節炎的多肽。其序列為RGDTRILAQHRLYYYNSQSE是全新的序列，本發明的有益效益是可用于治療類風濕性關節炎，具有潛在的新藥開發價值。
【IPC分類】C07K7/08, A61P19/02, A61K38/10, A61P29/00
【公開號】CN105504022
【申請號】CN201610072657
【發明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達生物科技有限公司
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2016年2月2日