Tmigd2基因在直腸腺癌診治中的應用
【技術領域】
[00011本發明涉及生物技術領域，具體地涉及TMIGD2基因在直腸腺癌診斷、治療中的用 途。
【背景技術】
[0002] 直腸腺癌是人類常見的惡性腫瘤之一，目前在世界范圍內其發病率在惡性腫瘤發 病率中女性占第二位，男性占第三位。隨著生活習慣和飲食結構的改變，我國直腸腺癌發病 率也在逐年升高，嚴重威脅著我國居民的生命健康安全。大腸癌的發生發展是一個涉及多 基因、多因子的多階段、多步驟的發展變化過程。其形成具有明確的階段性，腺瘤是癌形成 的一個階段。但腫瘤的惡性增生從生物學角度看，主要表現為兩個方面:一是腫瘤細胞的不 滅性，即細胞凋亡障礙;二是細胞增殖失控，程序發生紊亂，只是增殖超常加速。直腸腺癌的 發生與多種癌基因和抑癌基因相關，涉及細胞周期和細胞凋亡的多種因子。細胞凋亡過程 非常復雜，其過程受到嚴密的多方面控制。
[0003] 迄今為止，早發現、早診斷、早治療的"三早策略"仍然是提高直腸腺癌遠期療效最 為有效的手段。近年來，盡管早期診斷和綜合治療領域也有了長足的進步，但腫瘤轉移、復 發仍然是影響預后的首要原因。臨床確診為早期階段的直腸腺癌其5年總體生存率可高達 90%，伴有局部淋巴結轉移時下降為65%，而一旦合并遠處轉移時則不足10%。這些數據顯 示絕大多數直腸腺癌死于轉移、復發的分子機制，不但有助于開展直腸癌患者的病情監測、 預后判斷以及實施個體化綜合治療，而且對新型抗腫瘤藥物的研發和應用，均具有重要的 理論意義和臨床價值。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種可用于直腸腺癌診療的分子標志物。與傳統的診斷方 法相比，使用基因標志物來預判直腸腺癌轉移的風險、診斷直腸腺癌是否發生轉移具有及 時性、特異性和靈敏性，從而使患者在疾病早期就能知曉風險，針對風險高低，采取相應的 預防和治療措施。
[0005] 為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：
[0006] 本發明提供了一種基因及其表達產物在制備預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺 癌是否發生轉移的產品中的應用，所述基因為TMIGD2。
[0007] 進一步，上面所提到的產品包括:通過RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交 或芯片檢測TMIGD2基因及其表達產物的表達水平以預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌 是否發生轉移的產品。
[0008] 進一步，所述用RT-PCR來預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌是否發生轉移的 產品至少包括一對特異擴增TMIGD2基因的引物;所述用實時定量PCR預判直腸腺癌轉移風 險、診斷直腸腺癌是否發生轉移的產品至少包括一對特異擴增TMIGD2基因的引物;所述用 免疫檢測預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌是否發生轉移的產品包括:與TMIGD2蛋白 特異性結合的抗體;所述用原位雜交預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌是否發生轉移 的產品包括:與TMIGD2基因的核酸序列雜交的探針;所述用芯片預判直腸腺癌轉移風險、診 斷直腸腺癌是否發生轉移的產品包括:蛋白芯片和基因芯片;其中，蛋白芯片包括與TMIGD2 蛋白特異性結合的抗體，基因芯片包括與TMIGD2基因的核酸序列雜交的探針。
[0009 ]優選地，所述產品包括芯片、試劑盒。
[0010] 本發明提供了一種預判直腸腺癌轉移風險、診斷直腸腺癌是否發生轉移的產品， 所述產品能夠通過檢測直腸腺癌組織中TMIGD2基因的表達水平來預判直腸腺癌轉移風險、 診斷直腸腺癌是否發生轉移。
[0011] 進一步，所述產品包括芯片、或試劑盒。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白質芯 片;所述基因芯片包括固相載體以及固定在固相載體的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針 包括用于檢測TMIGD2基因轉錄水平的針對TMIGD2基因的寡核苷酸探針;所述蛋白質芯片包 括固相載體以及固定在固相載體的TMIGD2蛋白的特異性抗體;所述試劑盒包括基因檢測試 劑盒和蛋白免疫檢測試劑盒;所述基因檢測試劑盒包括用于檢測TMIGD2基因轉錄水平的試 劑;所述蛋白免疫檢測試劑盒包括TMIGD2蛋白的特異性抗體。
[0012] 進一步，所述固相載體包括無機載體和有機載體，所述無機載體包括但不限于有 硅載體、玻璃載體、陶瓷載體等;所述有機載體包括聚丙烯薄膜、尼龍膜等。
[0013] 進一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或芯片方法 檢測TMIGD2基因表達水平過程中所需的試劑。優選地，所述試劑包括針對TMIGD2基因的引 物和/或探針。根據SEQIDN0.2所示的核苷酸序列信息設計出可以用于檢測TMIGD2基因表 達水平的引物和探針。
[00M] 與TMI⑶2基因的核酸序列雜交的探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它 衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合， 任何長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述探針的 長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜 交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超 過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15-25個堿基對最佳。所述探針自身互補序 列最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。
[0015] 進一步，所述TMI⑶2蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述TMIGD2 蛋白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾，例如，嵌合抗體、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能夠保留與TMIGD2蛋白的結合能力即可。用于蛋白質水 平的抗體的制備時本領域技術人員公知的，并且本發明可以使用任何方法來制備所述抗 體。
[0016] 本發明還提供了TMIGD2基因及其表達產物在制備治療直腸腺癌的藥物中的應用。
[0017] -方面，本發明所述的"治療直腸腺癌轉移、侵襲的藥物"包括能夠括抑制細胞生 長、促進細胞凋亡。
[0018] 另一方面，本發明所述的"治療直腸腺癌轉移、侵襲的藥物"包含TMIGD2基因和/或 其表達產物的抑制劑。所述抑制劑包括抑制TMIGD2基因表達的物質、抑制TMIGD2基因表達 產物穩定性的物質、和/或抑制TMIGD2基因表達產物活性的物質。
[0019 ]進一步，本發明所述的治療直腸腺癌的藥物包括:通過干擾RNA抑制TMI⑶2基因表 達的雙鏈核糖核酸，或基于TMIGD2抗原蛋白的腫瘤疫苗，或用于抑制TMIGD2蛋白活性的蛋 白質。
[0020] 優選的，所述抑制劑是針對TMIGD2的siRNA
[0021] 本發明還提供了一種用于治療直腸腺癌轉移、侵襲的藥物，所述藥物包含TMIGD2 基因和/或其表達產物抑制劑。所述抑制劑包括抑制TMIGD2基因表達的物質、抑制TMIGD2基 因表達產物穩定性的物質、和/或抑制TMIGD2基因表達產物活性的物質。
[0022]進一步，本發明所述抑制劑包括:通過干擾RNA抑制TMIGD2基因表達的雙鏈核糖核 酸，或基于TMIGD2抗原蛋白的腫瘤疫苗、或用于抑制TMIGD2蛋白活性的蛋白質。
[0023] 進一步，本發明的藥物還包括藥學上可接受的載體，這類載體包括(但并不限于）： 稀釋劑、賦形劑如乳糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、水等;填充劑如淀粉、蔗糖等;粘合劑如 單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠和聚乙烯吡咯烷酮;濕潤劑如 甘油；崩解劑如干淀粉、海藻酸鈉、海帶多糖粉末、瓊脂粉末、碳酸鈣和碳酸氫鈉;吸收促進 劑季銨化合物、十二烷基硫酸鈉等;表面活性劑如聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯、十二烷基 硫酸鈉、硬脂酸單甘油酯、十六烷醇等;致濕劑如甘油、淀粉等;潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鈣 和鎂、聚乙二醇、硼酸粉末等;吸附載體如淀粉、乳糖、斑脫土、硅膠、高嶺土和皂粘土等。
[0024] 本發明的藥物還可與其他治療直腸腺癌的藥物聯用，多種藥物聯合使用可以大大 提尚治療的成功率。
[0025] 本發明的藥物可以使用不同的添加劑進行制備，例如殺菌劑、緩沖劑、穩定劑、等 滲劑、螯合劑、pH控制劑及表面活性劑。
[0026] 添加劑緩沖劑可以包括硼酸、磷酸、乙酸、檸檬酸、谷氨酸及相應的鹽(它們的堿金 屬或堿性稀土金屬鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及鎂鹽）。等滲劑包括氯化鉀、氯化鈉、糖及甘 油。螯合劑包括乙二胺四乙酸鈉及檸檬酸。
[0027]穩定劑包括人類血清蛋白、L-氨基酸、糖及纖維素衍生物。L-氨基酸還可以包括甘 氨酸、半胱氨酸及谷氨酸中的任意一個。糖類包括單