堿-酶解法提取硫酸軟骨素鈉的制作方法

堿-酶解法提取硫酸軟骨素鈉的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生化制藥領域，特別是直接從動物軟骨中提取的對心腦血管病等有良 好的效果的硫酸軟骨素鈉的生產工藝。
【背景技術】
[0002] 硫酸軟骨素鈉，英文名Chondroitinsulfatesodium，是動物軟骨中提取的酸性 粘多糖，多存在于動物的軟骨、喉骨、鼻骨(41%)、牛、馬中膈和氣管中，其分子結構為β-D-葡 萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通過β1-3糖苷鍵形成的重復二糖單位所組成的多糖鏈。
[0003]硫酸軟骨素鈉主要用于治療風濕和類風濕疾病的藥物，還具有抗凝、抗癌、抗血 栓、降血脂等作用，可用于治療頭痛、偏頭痛、冠心病、心絞痛等癥狀。在國外，對硫酸軟骨素 鈉藥理的研究已經達到分子水平。
[0004] 目前國內提取硫酸軟骨素鈉的方法主要有三種:鹽解法、堿解法和酶解法。主要采 用的分離純化技術有：乙醇沉淀法、離子交換色譜法、纖維素分離法、季銨鹽配合法、吸附 法、區帶電泳分離法等。在以上的集中提取方法中，收率雖然可以達到很高的水平，但生產 方法都存在很大問題，如鹽解法工藝中存在除酸性蛋白調節PH值1-2在產品量大時耗時很 長，硫酸軟骨素鈉中的氨基易被解離下來，從而影響了收率和質量。

【發明內容】

[0005]本發明的目的是:提供一種硫酸軟骨素鈉的提取方法，采用該提取方法不僅能克 服上述現有技術的不足，而且可以降低成本，提高產品質量，縮短生產周期，提高生產效率。
[0006]本發明的技術解決方案是該制備方法包括下列步驟： 1、浸泡:將經預處理潔白干凈的動物軟骨塊置于反應釜中，并加入適量的水，浸泡5-6 小時。
[0007] 2、堿解:將浸泡完全的動物軟骨，按軟骨中重量的1:1加水，并按軟骨重量的4-6% 加入堿片，攪拌3-5小時。
[0008] 3、酶解:將上述堿解液調PH8.0-8.5，加熱至45-50°C，按軟骨重量的12-15%加入豬 胰臟，并加入氯化鈉，于45-50°C保溫3-4小時。
[0009] 4、還原:將上述酶解液，調PH6.5-7.0，加熱至65°C，加入軟骨重量的1%的連二亞硫 酸鈉，攪拌15分鐘，靜置20分鐘后過濾。
[0010] 5、沉淀:將上步所得的濾液降溫30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度數達到60 度，沉淀6-8小時。
[0011] 6、復沉:將上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度數達80度，靜置10-12小時。
[0012] 7、脫水干燥：合并沉淀物，加入無水乙醇脫水，干燥后即得所述硫酸軟骨素鈉成 品。
[0013]本方法的有點及效果:本方法通過對目前工藝的改進創新，采用堿解結合酶解的 方法生產硫酸軟骨素鈉，優化生產工藝條件:堿解時間為4小時，堿解溫度為48°C，豬胰臟用 量為動物軟骨重量的14%，酶解時間為4小時，酶解溫度為48°C，五種因素中對堿解影響程度 主要為堿解溫度，對酶解影響最主要的為豬胰臟用量。整個反應過程PH值在8.0-8.5之間。 此最佳水平組合可使硫酸軟骨素鈉收率達到35以上或更高。采用新工藝后，大大縮短生產 周期，提高了生產效率，節約生產成本，提高了生產質量。
【具體實施方式】
[0014] 實施例1 (1) 浸泡:將經預處理潔白干凈的動物軟骨塊l〇〇kg置于反應釜中，并加入適量的水，浸 泡5小時； (2) 堿解:將浸泡完全的動物軟骨，按軟骨中重量的1:1加水，并按軟骨重量的4%加入堿 片，攪拌3小時； (3) 酶解:將上述堿解液調PH8.0，加熱至45°C，按軟骨重量的12%加入豬胰臟，并加入氯 化鈉，于45°C保溫3小時； (4) 還原:將上述酶解液，調PH6.5，加熱至65°C，加入軟骨重量的1%的連二亞硫酸鈉，攪 拌15分鐘，靜置20分鐘后過濾； (5) 沉淀:將上步所得的濾液降溫30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度數達到60度， 沉淀6小時； (6) 復沉:將上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度數達80度，靜置10小時； (7) 脫水干燥:合并沉淀物，加入無水乙醇脫水，干燥后即得所述硫酸軟骨素鈉成品。
[0015] 實施例2 (1) 浸泡:將經預處理潔白干凈的動物軟骨l〇〇kg塊置于反應釜中，并加入適量的水，浸 泡6小時； (2) 堿解:將浸泡完全的動物軟骨，按軟骨中重量的1:1加水，并按軟骨重量的5%加入堿 片，攪拌4小時； (3) 酶解:將上述堿解液調PH8.5，加熱至50°C，按軟骨重量的15%加入豬胰臟，并加入氯 化鈉，于50°C保溫4小時； (4) 還原:將上述酶解液，調PH7.0，加熱至65°C，加入軟骨重量的1%的連二亞硫酸鈉，攪 拌15分鐘，靜置20分鐘后過濾； (5) 沉淀:將上步所得的濾液降溫30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度數達到60度， 沉淀7小時； (6 )復沉:將上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度數達80度，靜置11小時； (7)脫水干燥:合并沉淀物，加入無水乙醇脫水，干燥后即得所述硫酸軟骨素鈉成品。
[0016] 實施例3 (1) 浸泡:將經預處理潔白干凈的動物軟骨l〇〇kg塊置于反應釜中，并加入適量的水，浸 泡6小時； (2) 堿解:將浸泡完全的動物軟骨，按軟骨中重量的1:1加水，并按軟骨重量的6%加入堿 片，攪拌4小時； (3) 酶解:將上述堿解液調PH8.5，加熱至48°C，按軟骨重量的14%加入豬胰臟，并加入氯 化鈉，于50°C保溫4小時； (4) 還原:將上述酶解液，調PH7.0，加熱至65°C，加入軟骨重量的1%的連二亞硫酸鈉，攪 拌15分鐘，靜置20分鐘后過濾； (5) 沉淀:將上步所得的濾液降溫30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度數達到60度， 沉淀8小時； (6 )復沉:將上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度數達80度，靜置12小時 (7)脫水干燥:合并沉淀物，加入無水乙醇脫水，干燥后即得所述硫酸軟骨素鈉成品。
[0017]將上述3次實施實例生產的硫酸軟骨素鈉進行分析，結果如下：
【主權項】
1. 一種提取硫酸軟骨素鈉的方法，其特征在于:是從動物軟骨中提取的能完全溶解，旋 光度為-25°至-35°，且其HPLC及CPC含量均大于95%的白色粉末。2. 根據權利要求1所述的方法，其特征在于該方法依次包括： (1)將經預處理潔白干凈的動物軟骨塊置于反應釜中，并加入適量的水，浸泡5-6小時； (2 )將浸泡完全的動物軟骨，按軟骨中重量的1:1加水，并加入軟骨重量的4-6%的堿片， 攪拌3-5小時； (3) 將上述堿解液調？!18.0-8.5，加熱至45-50°(3，加入軟骨重量的12-15%的豬胰臟后， 加入氯化鈉，于45-50°C保溫3-4小時； (4) 將上述酶解液，調PH6.5-7.0，加熱至65°C，加入軟骨重量的1%的連二亞硫酸鈉，攪 拌15分鐘，靜置20分鐘后過濾； (5) 將上步所得的濾液降溫30°C以下，加入乙醇，在20°C下使沉淀度數達到60度，沉淀 6-8小時； (6) 將上步沉淀物加入乙醇，使沉淀度數達80度，靜置10-12小時； (7) 合并沉淀物，加入無水乙醇脫水，干燥后即得所述硫酸軟骨素鈉成品。3. 根據權利要求1或2所述的方法，其特征是在(2)步中加入重量為4-6%的堿片，以增強 硫酸軟骨素鈉的堿解效果。4. 根據權利要求1或2所述的方法，其特征是在(4)步中加入重量1%連二亞硫酸鈉鹽析， 已增強硫酸軟骨素鈉的沉淀效果。5. 根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于最佳的堿解溫度為48°C。6. 根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于最佳豬胰臟用量為12-15%干軟骨重。
【專利摘要】一種新的硫酸軟骨素鈉的提取方法，堿-酶解提取硫酸軟骨素鈉。主要解決目前同列產品生產工藝流程復雜、堿酸或鹽用量較大、生產成本較高、提取周期較長、產品質量不穩定、收率較低等問題。該產品主要以動物軟骨為原料，經堿解后一步酶解即可把硫酸軟骨素鈉從動物軟骨中提取出，產品色澤潔白、粉末疏松，收率可高達30%以上，且純度高，符合口服質量標準。具有生產工序簡單，周期短、成本低、操作簡便易行，同時有助于減輕對環境的污染，有利于環保等特點。
【IPC分類】C08B37/08
【公開號】CN105461827
【申請號】CN201511002245
【發明人】劉乃山, 陸玉梅, 遲培升, 夏襯來
【申請人】青島九龍生物醫藥有限公司
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2013年11月23日
【公告號】CN103665188A, CN103665188B