一種硫酸魚精蛋白的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物醫藥領域，其涉及一種硫酸魚精蛋白的制備方法。
【背景技術】
[0002]硫酸魚精蛋白具有廣譜抗菌活性，是一種天然防腐劑。目前，硫酸魚精蛋白在臨床醫學上有重要的作用，且應用于制藥行業已有多年。從魚類精巢提取的魚精蛋白硫酸鹽是體外循環心臟手術中唯一對抗肝素鈉的藥物，能抵消肝素鈉或人工合成抗凝血劑的抗凝作用，在臨床上可用作這些抗凝血劑的解毒劑。
[0003]硫酸魚精蛋白是一種多聚陽離子天然肽類，是一種堿性蛋白質，主要在魚類成熟精子細胞核中作為和DNA結合的核精蛋白存在。核蛋白結合鍵不牢固，所以現有的提取技術通常采用硫酸使其與核酸分離，制得魚精蛋白的硫酸鹽，即硫酸魚精蛋白，后采用有機溶劑進行純化。
【發明內容】
[0004]本發明要解決的技術問題是提供一種利用硫酸提取、有機溶劑純化與鹽解相結合的對硫酸魚精蛋白進行制備的方法，該方法克服了硫酸魚精蛋白生產周期長、乙醇用量大、活性收率低等不足。
[0005]本發明采用的技術方案如下:
一種硫酸魚精蛋白的制備方法，包括以下步驟:
(1)預處理:取解凍的鋳魚魚精置于搗碎機中搗碎，加入NaCl緩沖液，用6層紗布過濾得漿液。5000-8000 r/min離心20-30分鐘，除去上清液，收集沉淀；
(2)提取:向沉淀中加入硫酸進行提取。過濾，收集濾液；
(3 )鹽解:在濾液中加入NaCl溶液，攪拌1 -2小時。過濾，收集沉淀。加入5_6倍量的水，復溶；
(4 )用乙醇進行沉淀、脫水、干燥。
[0006]本次技術方案中，步驟(1)預處理中，NaCl緩沖液的濃度為70-80 mmol/L;NaCl緩沖液中含有20-30 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉及0.5 -1.0 mmol/L氫氧化鈉，且pH在7.5-9.0之間；可有效去除鋳魚魚精中的脂肪等雜質。
[0007]本技術方案中，步驟(2)中硫酸溶液濃度為1%_3%;硫酸溶液用量為樣品量的2-3倍;提取時間為0.5-1小時;提取次數為2-3次;提取溫度為50-60°C ；可使提取效率及提取量得到提高。
[0008]本技術方案中，步驟(3)中所加NaCl溶液的濃度為20%_30%;NaCl溶液用量為樣品溶液的2-3倍。可有效的鹽解魚精蛋白中去除其他蛋白的影響。
[0009]本發明的有益效果為通過采用硫酸提取、有機溶劑純化與氯化鈉鹽解相結合的方式對魚精蛋白進行提取，降低生產成本的同時縮短了生產周期，且產品純度高，活性收率尚ο
【具體實施方式】
[0010]下面對本發明作進一步的詳細說明:
(1)取解凍的鋳魚魚精100g置于搗碎機中搗碎，加入NaCl緩沖液300 mL，勻漿2次，每次30分鐘。用6層紗布過濾得漿液。5000 r/min離心20分鐘，除去上清液，收集沉淀；
(2)向沉淀中加入3%的硫酸溶液100mL在60°C下提取1小時。過濾，收集濾液，將沉淀再加80mL在60°C下硫酸溶液提取0.5小時，過濾，合并濾液。
[0011](3)在濾液中加入30%的NaCl溶液300mL，攪拌1小時。過濾，收集沉淀。加入500mL水，復溶；
(4)用95%乙醇進行沉淀，使得乙醇度為60%左右，脫水、干燥，得硫酸魚精蛋白。
[0012]對提取的硫酸魚精蛋白進行分析，得收率為85.6%，其中蛋白質含量達91%，且喊性氨基酸含量較高，為28.2%，約占所測氨基酸總量的1/3。
[0013]以上所述，僅是本發明的較佳實施例而已，并非是對本發明作其它形式的限制，任何熟悉本專業的技術人員可能利用上述揭示的技術內容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發明技術方案內容，依據本發明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發明技術方案的保護范圍。
【主權項】
1.一種硫酸魚精蛋白的制備方法，其特征包括如下步驟: (1)預處理:取解凍的鋳魚魚精置于搗碎機中搗碎，加入NaCl緩沖液，用6層紗布過濾得漿液，5000-8000 r/min離心20-30分鐘，除去上清液，收集沉淀； (2 )提取:向沉淀中加入硫酸進行提取;過濾，收集濾液； (3)鹽解:在濾液中加入NaCl溶液，攪拌1-2小時;過濾，收集沉淀;加入5_6倍量的純水，復溶； (4 )用乙醇進行沉淀、脫水、干燥。2.根據權利要求1所述步驟，其特征在于:步驟(1)中NaCl緩沖液的濃度為70-80mmol/L;NaCl緩沖液中含有20-30 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉及0.5-1.0 mmol/L氫氧化鈉，且pH在7.5-9.0之間；離心轉速為5000-8000 r/min，離心時間為20-30分鐘。3.根據權利要求1所述步驟，其特征在于:步驟(2)中硫酸溶液濃度為1%-3%;硫酸溶液用量為樣品量的2-3倍;提取時間為0.5-1小時;提取次數為2-3次;提取溫度為50-60°C。4.根據權利要求1所述步驟，其特征在于:步驟(3)中所加NaCl溶液的濃度為20%-30%;NaCl溶液用量為樣品溶液的2-3倍。5.根據權利要求1所述步驟，其特征在于:步驟(4)中所用乙醇的量為使得沉淀后的乙醇度為50%_70%，沉淀5-7小時。
【專利摘要】本發明涉及一種硫酸魚精蛋白的制備方法，包括（1）預處理：取解凍的鱘魚魚精置于搗碎機中搗碎，加入NaCl緩沖液溶解，用紗布過濾得漿液，5000-8000r/min離心20-30分鐘，除去上清液，收集沉淀；（2）提取：向沉淀中加入硫酸進行提取。過濾，收集濾液；（3）鹽解：在濾液中加入NaCl溶液，攪拌1-2小時，微濾，收集沉淀，加入5-6倍量的純水，復溶；（4）用乙醇進行沉淀、脫水、干燥。
【IPC分類】C07K1/12, C07K1/30
【公開號】CN105440100
【申請號】CN201510880057
【發明人】劉冠男, 江崇云, 遲培升
【申請人】青島九龍生物醫藥有限公司
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2015年12月6日