一種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及細胞培養技術領域，具體涉及一種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基。
【背景技術】
[0002]紅豆杉又稱紫杉，也稱赤柏松，是中國國家一級珍稀保護樹種，也是世界上公認的瀕臨滅絕的天然珍稀抗癌植物。
[0003]紫杉醇及其類似物迄今為止僅存在于裸子植物紅豆杉科的紅豆杉屬和澳洲紅豆杉屬中，紅豆杉屬植物全世界共有11種，廣泛分布于歐亞大陸和北美的寒帶、溫帶及亞熱帶地區，但分布零散且生長緩慢。澳洲紅豆杉屬僅分布于南半球，數量稀少，紫杉醇在紅豆杉植物中含量普遍很低，即使當前公認含量最高的短葉紅豆杉樹皮中也不到0.1%，但其需求量很大。
[0004]為了解決紫杉醇供需之間的尖銳矛盾，多年來相關研究者在尋找及擴大紫杉醇藥源途徑方面進行了大量研究。紫杉醇的化學全合成雖已取得成功，但因路線長、收率低等原因目前無法實現工業化。近年來，利用紅豆杉細胞離體培養以制備紫杉醇得到了越來越多的關注，由于離體條件下細胞的培養方式可以得到更加多樣的控制，因此其生產效率相對較高。然而，以制備紫杉醇為目的的細胞培養并不容易，首先需要篩選生產性能強的細胞株，同時還要匹配適宜的培養條件，此外在營養供給等方面需要針對細胞株特點及代謝特性進行設計，從而保證較高的培養密度和紫杉醇產率。現有技術的培養基在細胞培養密度方面仍存在較大提升空間。
【發明內容】
[0005]本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，以解決現有技術中植物細胞培養基對紅豆杉細胞培養密度較低的技術問題。
[0006]為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案:
[0007]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，包括以下重量份的成分:硝酸鈉8?10份，磷酸氫二鉀4?6份，硫酸鎂2?3份，氯化鈣1?2份，蛋白胨1?2份，腹水草1?2份，獨一味1?2份，古山龍1?2份，廣靈香1?2份，漢桃葉1?2份，水50?60份。
[0008]作為優選，還包括1?2重量份的知母。
[0009]作為優選，還包括1?2重量份的陳皮。
[0010]作為優選，還包括1?2重量份的柿蒂。
[0011]作為優選，還包括1?2重量份的韭菜子。
[0012]作為優選，所述培養基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.5份，氯化鈣1.5份，蛋白胨1.5份，腹水草1.5份，獨一味1.5份，古山龍1.5份，廣靈香1.5份，漢桃葉1.5份，水55份。
[0013]作為優選，所述培養基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，腹水草1.6份，獨一味1.2份，古山龍1.1份，廣靈香1.4份，漢桃葉1.5份，知母1.4份，陳皮1.1份，柿蒂1.5份，韭菜子1.8份，水57份。
[0014]在以上技術方案中，所述培養基是將配方量的各成分混合后粉碎、再與水混合得到的，所述粉碎可以利用本技術領域公知的各類物料粉碎手段實現。本發明所述的培養基尤其適用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養，當然也可制備成為固體培養基用于種子培養或傳代培養。
[0015]本發明通過實驗手段廣泛篩選了作為紅豆杉細胞生長的營養物質，依據紅豆杉細胞自身代謝特性和實際使用效果確定了本發明配方。該配方以硝酸鈉和磷酸氫二鉀分別作為氮源和磷源，并添加了一定的氯化鈣，在此基礎上意外的發現通過添加特定種類及成分的中藥材有助于提升細胞培養密度。基于以上有益的發現，本發明通過實驗手段優選了腹水草、獨一味、古山龍、廣靈香等原本用于人類疾病治療的中藥材成分，所得培養基意外獲得了突出的培養效果，使得紅豆杉細胞培養密度顯著提升，同時其生長速度更快。本發明以創新性的技術手段獲得優越的技術效果，同時成本較低、易于實現，因此具有良好的應用前景。
【具體實施方式】
[0016]以下將對本發明的【具體實施方式】進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節，在以下實施例中對屬于公知的結構或功能將不進行詳細描述。除有定義外，以下實施例中所用的技術和科學術語具有與本發明所屬領域技術人員普遍理解的相同含義。
[0017]實施例1
[0018]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8份，磷酸氫二鉀4份，硫酸鎂2份，氯化鈣1份，蛋白胨1份，腹水草1份，獨一味1份，古山龍1份，廣靈香1份，漢桃葉1份，水50份。
[0019]實施例2
[0020]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉10份，磷酸氫二鉀6份，硫酸鎂3份，氯化鈣2份，蛋白胨2份，腹水草2份，獨一味2份，古山龍2份，廣靈香2份，漢桃葉2份，水60份。
[0021]實施例3
[0022]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.3份，氯化鈣1.8份，蛋白胨1.5份，腹水草1.6份，獨一味1.7份，古山龍1.8份，廣靈香1.2份，漢桃葉1.8份，水55份。
[0023]實施例4
[0024]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.8份，磷酸氫二鉀5.4份，硫酸鎂2.7份，氯化鈣1.2份，蛋白胨1.2份，腹水草1.2份，獨一味
1.5份，古山龍1.6份，廣靈香1.4份，漢桃葉1.7份，知母1份，韭菜子1.1份，水52份。
[0025]實施例5
[0026]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9.4份，磷酸氫二鉀4.2份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.1份，腹水草1份，獨一味2份，古山龍1.9份，廣靈香1.2份，漢桃葉1.9份，陳皮1.3份，柿蒂1.2份，韭菜子1.6份，水58份。
[0027]實施例6
[0028]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.8份，磷酸氫二鉀5.4份，硫酸鎂2.7份，氯化鈣1.2份，蛋白胨1.2份，腹水草1.2份，獨一味
1.5份，古山龍1.6份，廣靈香1.4份，漢桃葉1.7份，知母1.5份，水55份。
[0029]實施例7
[0030]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9.2份，磷酸氫二鉀5.7份，硫酸鎂2.4份，氯化鈣1.5份，蛋白胨1.5份，腹水草1.7份，獨一味1.7份，古山龍1.2份，廣靈香1.9份，漢桃葉2份，柿蒂1.8份，水59份。
[0031]實施例8
[0032]—種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，腹水草1.6份，獨一味
1.2份，古山龍1.1份，廣靈香1.4份，漢桃葉1.5份，知母1.4份，陳皮1.1份，柿蒂1.5份，韭菜子1.8份，水57份。
[0033]以上對本發明的實施例進行了詳細說明，但所述內容僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明。凡在本發明的申請范圍內所做的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，其特征在于包括以下重量份的成分:硝酸鈉8?10份，磷酸氫二鉀4?6份，硫酸鎂2?3份，氯化鈣1?2份，蛋白胨1?2份，腹水草1?2份，獨一味1?2份，古山龍1?2份，廣靈香1?2份，漢桃葉1?2份，水50?60份。2.根據權利要求1所述的用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，其特征在于還包括1?2重量份的知母。3.根據權利要求1所述的用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，其特征在于還包括1?2重量份的陳皮。4.根據權利要求1所述的用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，其特征在于還包括1?2重量份的柿蒂。5.根據權利要求1所述的用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，其特征在于還包括1?2重量份的韭菜子。6.根據權利要求1所述的用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，其特征在于所述培養基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉9份，磷酸氫二鉀5份，硫酸鎂2.5份，氯化鈣1.5份，蛋白胨1.5份，腹水草1.5份，獨一味1.5份，古山龍1.5份，廣靈香1.5份，漢桃葉1.5份，水55份。7.根據權利要求1所述的用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，其特征在于所述培養基由以下重量份的成分組成:硝酸鈉8.5份，磷酸氫二鉀5.5份，硫酸鎂2.1份，氯化鈣1.3份，蛋白胨1.7份，腹水草1.6份，獨一味1.2份，古山龍1.1份，廣靈香1.4份，漢桃葉1.5份，知母1.4份，陳皮1.1份，柿蒂1.5份，韭菜子1.8份，水57份。
【專利摘要】本發明提供了一種用于紅豆杉細胞的液體懸浮培養基，該培養基以硝酸鈉和磷酸氫二鉀分別作為氮源和磷源，并添加了一定的氯化鈣，在此基礎上意外的發現通過添加特定種類及成分的中藥材有助于提升細胞培養密度。基于以上有益的發現，本發明通過實驗手段優選了腹水草、獨一味、古山龍、廣靈香、漢桃葉、知母、陳皮、柿蒂、韭菜子等原本用于人類疾病治療的中藥材成分，所得培養基意外獲得了突出的培養效果，使得紅豆杉細胞的培養密度得到顯著提升，同時其生長速度更快。本發明以創新性的技術手段獲得優越的技術效果，同時成本較低、易于實現，因此具有良好的應用前景。
【IPC分類】C12N5/04, C12P17/02
【公開號】CN105420305
【申請號】CN201510973541
【發明人】馬丹, 黃友法
【申請人】天津市博愛生物藥業有限公司
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年12月18日