一種影響植物細胞代謝調控的組合物的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及細胞工程技術領域，具體涉及一種影響植物細胞代謝調控的組合物。
【背景技術】
[0002]紫杉醇(paclitaxel)是從紅豆杉科紅豆杉屬(Taxus)植物的樹皮中提取得到的二萜類化合物。它是一種新型的微管穩定劑，具有獨特抗癌活性，被美國國立癌癥研究所認為是近15?20年來腫瘤化療的最重要的進展。作為晚期卵巢癌的二線治療藥，至今已在40多個國家獲準上市，并在乳腺癌、肺癌、白血病、胃腸道癌及介入治療后的血管再狹窄等治療上顯示了令人鼓舞的療效。紫杉醇由于資源匱乏和水溶性低的問題而限制了它的臨床應用。
[0003]紫杉醇及其類似物迄今為止僅存在于裸子植物紅豆杉科的紅豆杉屬和澳洲紅豆杉屬中，紅豆杉屬植物全世界共有11種，廣泛分布于歐亞大陸和北美的寒帶、溫帶及亞熱帶地區，但分布零散且生長緩慢。澳洲紅豆杉屬僅分布于南半球，數量稀少，紫杉醇在紅豆杉植物中含量普遍很低，即使當前公認含量最高的短葉紅豆杉樹皮中也不到0.1%。
[0004]如果直接通過植物組織提取紫杉醇，則需要大量的紅豆杉樹木實體，其種植周期和種植成本過高；若采取組織培養的方式，雖然可以適當降低成本，但由于紫杉醇在紅豆杉樹木不同細胞中的分布不均勻，因此其產率較低。如果能直接針對高產紫杉醇的紅豆杉細胞系進行純培養，則有可能提升紫杉醇的生產效率。為實現紫杉醇的高產率，僅僅提升細胞培養密度是不夠的，紫杉醇分泌量的提升往往低于生物量的提升，因此應當依據細胞自身特性匹配適宜的培養條件，以促進其定向分泌紫杉醇。
【發明內容】
[0005]本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種影響植物細胞代謝調控的組合物，以解決紅豆杉細胞培養過程中紫杉醇分泌量較低的技術問題。
[0006]為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案:
[0007]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，包括以下重量份的成分:花生四烯酸8?10份，氯化鈉4?6份，亞硝酸鈉2?3份，吲哚丁酸1?2份，6-芐基腺嘌呤1?2份，激動素1?2份，乙二胺四乙酸1?2份，玉米素1?2份，氯化鈣1?2份，乙酸乙酯1?2份，水50?60份。
[0008]作為優選，還包括1?2重量份的蜂蠟。
[0009]作為優選，還包括1?2重量份的羧甲基纖維素鈉。
[0010]作為優選，還包括1?2重量份的白藜蘆醇。
[0011]作為優選，還包括1?2重量份的麥芽糖。
[0012]作為優選，所述組合物由以下重量份的成分組成:花生四烯酸9份，氯化鈉5份，亞硝酸鈉2.5份，吲哚丁酸1.5份，6-芐基腺嘌呤1.5份，激動素1.5份，乙二胺四乙酸1.5份，玉米素1.5份，氯化鈣1.5份，乙酸乙酯1.5份，水55份。
[0013]作為優選，所述組合物由以下重量份的成分組成:花生四烯酸8.5份，氯化鈉5.5份，亞硝酸鈉2.1份，吲哚丁酸1.3份，6-芐基腺嘌呤1.7份，激動素1.6份，乙二胺四乙酸1.2份，玉米素1.1份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.5份，蜂蠟1.4份，羧甲基纖維素鈉1.1份，白藜蘆醇1.5份，麥芽糖1.8份，水57份。
[0014]本發明提供的組合物，用于促進紅豆杉細胞定向分泌紫杉醇，其使用方法是直接添加至細胞培養液中，可以在培養開始階段添加也可以在細胞進入培養穩定期后添加。實驗發現，添加本發明組合物后雖然不會直接提升細胞培養密度，但是同等生物量的細胞培養液中紫杉醇產率顯著提升，這表明本發明組合物對紅豆杉細胞代謝特性產生了一定的影響。本發明以創新性的技術手段實現了突出的技術效果，通過本發明的組合物有望全面提升紫杉醇的規模化生產現狀，帶來廣闊的應用前景。
【具體實施方式】
[0015]以下將對本發明的【具體實施方式】進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節，在以下實施例中對屬于公知的結構或功能將不進行詳細描述。除有定義外，以下實施例中所用的技術和科學術語具有與本發明所屬領域技術人員普遍理解的相同含義。
[0016]實施例1
[0017]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸8份，氯化鈉4份，亞硝酸鈉2份，卩引哚丁酸1份，6-芐基腺嘌呤1份，激動素1份，乙二胺四乙酸1份，玉米素1份，氯化鈣1份，乙酸乙酯1份，水50份。
[0018]實施例2
[0019]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸10份，氯化鈉6份，亞硝酸鈉3份，卩引哚丁酸2份，6-芐基腺嘌呤2份，激動素2份，乙二胺四乙酸2份，玉米素2份，氯化鈣2份，乙酸乙酯2份，水60份。
[0020]實施例3
[0021]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸9份，氯化鈉5份，亞硝酸鈉2.3份，吲哚丁酸1.8份，6-芐基腺嘌呤1.5份，激動素1.6份，乙二胺四乙酸1.7份，玉米素1.8份，氯化鈣1.2份，乙酸乙酯1.8份，水55份。
[0022]實施例4
[0023]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸
8.8份，氯化鈉5.4份，亞硝酸鈉2.7份，吲哚丁酸1.2份，6-芐基腺嘌呤1.2份，激動素1.2份，乙二胺四乙酸1.5份，玉米素1.6份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.7份，蜂蠟1份，麥芽糖
1.1份，水52份。
[0024]實施例5
[0025]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸
9.4份，氯化鈉4.2份，亞硝酸鈉2.1份，吲哚丁酸1.3份，6-芐基腺嘌呤1.1份，激動素1份，乙二胺四乙酸2份，玉米素1.9份，氯化鈣1.2份，乙酸乙酯1.9份，羧甲基纖維素鈉1.3份，白藜蘆醇1.2份，麥芽糖1.6份，水58份。
[0026]實施例6
[0027]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸8.8份，氯化鈉5.4份，亞硝酸鈉2.7份，吲哚丁酸1.2份，6-芐基腺嘌呤1.2份，激動素1.2份，乙二胺四乙酸1.5份，玉米素1.6份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.7份，蜂蠟1.5份，水55份。
[0028]實施例7
[0029]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸
9.2份，氯化鈉5.7份，亞硝酸鈉2.4份，吲哚丁酸1.5份，6-芐基腺嘌呤1.5份，激動素1.7份，乙二胺四乙酸1.7份，玉米素1.2份，氯化鈣1.9份，乙酸乙酯2份，白藜蘆醇1.8份，水59份。
[0030]實施例8
[0031]—種影響植物細胞代謝調控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸
8.5份，氯化鈉5.5份，亞硝酸鈉2.1份，吲哚丁酸1.3份，6-芐基腺嘌呤1.7份，激動素1.6份，乙二胺四乙酸1.2份，玉米素1.1份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.5份，蜂蠟1.4份，羧甲基纖維素鈉1.1份，白藜蘆醇1.5份，麥芽糖1.8份，水57份。
[0032]以上對本發明的實施例進行了詳細說明，但所述內容僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明。凡在本發明的申請范圍內所做的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種影響植物細胞代謝調控的組合物，其特征在于包括以下重量份的成分:花生四烯酸8?10份，氯化鈉4?6份，亞硝酸鈉2?3份，吲哚丁酸1?2份，6-芐基腺嘌呤1?2份，激動素1?2份，乙二胺四乙酸1?2份，玉米素1?2份，氯化鈣1?2份，乙酸乙酯1?2份，水50?60份。2.根據權利要求1所述的影響植物細胞代謝調控的組合物，其特征在于還包括1?2重量份的蜂蠟。3.根據權利要求1所述的影響植物細胞代謝調控的組合物，其特征在于還包括1?2重量份的羧甲基纖維素鈉。4.根據權利要求1所述的影響植物細胞代謝調控的組合物，其特征在于還包括1?2重量份的白藜蘆醇。5.根據權利要求1所述的影響植物細胞代謝調控的組合物，其特征在于還包括1?2重量份的麥芽糖。6.根據權利要求1所述的影響植物細胞代謝調控的組合物，其特征在于所述組合物由以下重量份的成分組成:花生四烯酸9份，氯化鈉5份，亞硝酸鈉2.5份，吲哚丁酸1.5份，6-芐基腺嘌呤1.5份，激動素1.5份，乙二胺四乙酸1.5份，玉米素1.5份，氯化鈣1.5份，乙酸乙酯1.5份，水55份。7.根據權利要求1所述的影響植物細胞代謝調控的組合物，其特征在于所述組合物由以下重量份的成分組成:花生四烯酸8.5份，氯化鈉5.5份，亞硝酸鈉2.1份，吲哚丁酸1.3份，6-芐基腺嘌呤1.7份，激動素1.6份，乙二胺四乙酸1.2份，玉米素1.1份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.5份，蜂蠟1.4份，羧甲基纖維素鈉1.1份，白藜蘆醇1.5份，麥芽糖1.8份，水57份。
【專利摘要】本發明提供了一種影響植物細胞代謝調控的組合物，該組合物優選了激動素、氯化鈉、亞硝酸鈉、吲哚丁酸、6-芐基腺嘌呤、激動素、乙二胺四乙酸、玉米素、氯化鈣、乙酸乙酯等成分并對其用量配比進行了合理化設計，其使用方法是直接添加至細胞培養液中，可以在培養開始階段添加也可以在細胞進入培養穩定期后添加。實驗發現，添加本發明組合物后雖然不會直接提升細胞培養密度，但是同等生物量的細胞培養液中紫杉醇產率顯著提升，這表明本發明組合物對紅豆杉細胞代謝特性產生了一定的影響。本發明以創新性的技術手段實現了突出的技術效果，通過本發明的組合物有望全面提升紫杉醇的規模化生產現狀，帶來廣闊的應用前景。
【IPC分類】C12P17/02, C12N5/04
【公開號】CN105420178
【申請號】CN201510969066
【發明人】夏雪城, 裘先臨
【申請人】天津市博愛生物藥業有限公司
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年12月18日