一種擬盤多毛孢菌種保藏方法
【技術領域】
[0001 ]本發明涉及菌株保存領域，特別涉及一種擬盤多毛孢菌種保藏方法。
【背景技術】
[0002] 菌種保存是微生物學中的一項重要工作，其目的在于保持菌種的存活，并盡可能 維持其原有的生物學特性，為生產、科研和教學及時提供合乎要求的菌種。傳統的菌株保存 法，有的方法簡便，但保存時間短;有的保存時間長，但需要一定的設備。需要探索新的既簡 便又能長時間保存菌株的方法。
[0003] 擬盤多毛孢屬是半知菌類的一個無性型真菌屬，是常見的植物病原菌，它一般多 為弱寄生，少為腐生，引致各類葉斑病，間有對果實為害。同時，擬盤多毛孢也是植物內生真 菌的重要類群，是很多木本植物重要內生真菌之一。它與1'1'11]1〇3丨6113屬和36；[1^(1；[111]1屬關 系密切。擬盤多毛孢屬的子實體通常為分生孢子盤類型，分生孢子以芽殖方式產生。
[0004] 真菌菌株的保藏有其特殊性，因真菌常易發生變異，存活率低，且易受雜菌及螨類 的污染，擬盤多毛孢屬也遇到類似問題。傳統的擬盤多毛孢屬真菌保存方法較多，常用的有 傳代培養保存法、液體石蠟覆蓋保存法等。傳代培養保存法歸納起來有兩類:一類是將在培 養基中生長好的菌種(或加保護劑)移至另外的容器內進行保存，另一類保存法是在培養基 內進行，如半固體保存法、斜面保存法，或再加上礦物油等。傳代培養保存法較簡單，適用于 一般細菌的保存，但由于基本上是采用試管保存，盡管置于較低溫度下，仍避免不了培養基 內水分的不斷蒸發，導致基內鹽分濃縮，滲透壓、酸堿度發生變化，代謝產物濃度相對提高， 這樣就增加了對菌種的毒害作用，因此，保存效果較差，保存時間有限，一般認為3-6個月即 要傳種。液體石蠟保存菌種雖可以在自然條件下保存很久，但對一些菌種再次活化比較困 難，成活率較低，也易污染。此外，還有硅膠保存菌株法，該方法成活率低，耗時長，材料貴， 易污染，較少使用。
[0005] 公開于該【背景技術】部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不應 當被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已為本領域一般技術人員所公知的現有技術。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的在于提供一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，從而克服現有擬盤多毛孢 菌株保存方法過程繁瑣、易受雜菌及螨類的污染、活化成活率低的缺點。
[0007] 為實現上述目的，本發明提供了一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，包括以下步驟：
[0008] (1)將菌種接種于培養基中間位置；
[0009] (2)待菌絲長出時，將滅菌濾紙片擺放在接種位置周圍；
[0010] (3)待菌絲覆蓋濾紙片之后取下濾紙片，放在滅菌的保存管中；
[0011] (4)用密封保存管管口，分類標記，在溫度為_80°C~4°C的條件下保存。
[0012] 優選地，上述技術方案中，所述步驟(2)中，待菌絲長2~4cm時，將滅菌濾紙片擺放 在接種位置周圍。
[0013]優選地，上述技術方案中，所述保存管為EP管。
[0014]優選地，上述技術方案中，所述步驟(4)中用保鮮膜密封保存管管口。
[0015]優選地，上述技術方案中，所述步驟(1)中的培養基為PDA培養基。
[0016]與現有技術相比，本發明具有如下有益效果:本發明一種擬盤多毛孢菌種保藏方 法，采用滅菌定性濾紙片和EP管保存，避免了雜菌及螨類的污染和培養基內水分蒸發的問 題，簡便易行，4°C保存存活時間達12個月以上，經試驗證實存活率達100%，菌株污染率 0% ; -20°C保存存活時間達12個月以上，經試驗證實存活率達86 · 7 %，菌株污染率1 · 5 % -80°C保存存活時間達12個月以上，經試驗證實存活率達100%，菌株污染率0%。菌株的活化 成活率高，工序短，保存時間長，不易污染，耗材少，耗時不長，占空間小等優點。
【具體實施方式】
[0017]下面結合具體實施例，對本發明的【具體實施方式】進行詳細描述，但應當理解本發 明的保護范圍并不受【具體實施方式】的限制。
[0018] -種擬盤多毛孢菌種保藏方法，包括以下步驟：
[0019](1)將菌種接種于PDA培養基中間位置，該真菌菌種為擬盤多毛孢屬真菌；
[0020] (2)待菌絲長2~4cm時，將滅菌的5mmX5mm大小定性濾紙片用滅菌鑷子濾紙片擺 放在接種位置周圍；
[0021] (3)待菌絲覆蓋濾紙片之后(一般7天到15天)取下濾紙片，放在滅菌EP管(5毫升或 10毫升)中；
[0022] (4)用保鮮膜密封EP管口，分類標記，在溫度為_80°C~4°C的條件下保存。
[0023]將上述菌種分別置于4°C、_20°C和_80°C的溫度條件下進行保存。保存結果如表1 所示：
[0024]表1:不同溫度下菌種的保存結果
[0026] 由表1所示，采用本發明一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，4°C保存存活時間達12個 月以上，經試驗證實存活率達100 %，菌株污染率0 % ; _20°C保存存活時間達12個月以上，經 試驗證實存活率達86.7%，菌株污染率1.5% ;-80°C保存存活時間達12個月以上，經試驗證 實存活率達100%，菌株污染率〇 %。采用本發明方法保存的菌株，其活化成活率高，保存時 間長，不易污染。
[0027]前述對本發明的具體示例性實施方案的描述是為了說明和例證的目的。這些描述 并非想將本發明限定為所公開的精確形式，并且很顯然，根據上述教導，可以進行很多改變 和變化。對示例性實施例進行選擇和描述的目的在于解釋本發明的特定原理及其實際應 用，從而使得本領域的技術人員能夠實現并利用本發明的各種不同的示例性實施方案以及 各種不同的選擇和改變。本發明的范圍意在由權利要求書及其等同形式所限定。
【主權項】
1. 一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 將菌種接種于培養基中間位置； (2) 待菌絲長出時，將滅菌濾紙片擺放在接種位置周圍； (3) 待菌絲覆蓋濾紙片之后取下濾紙片，放在滅菌的保存管中； (4) 用密封保存管管口，分類標記，在溫度為-80°C~4°C的條件下保存。2. 根據權利要求1所述的一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，其特征在于，所述步驟(2)中， 待菌絲長2~4cm時，將滅菌濾紙片擺放在接種位置周圍。3. 根據權利要求1所述的一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，其特征在于，所述保存管為EP 管。4. 根據權利要求1所述的一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，其特征在于，所述步驟(4)中 用保鮮膜密封保存管管口。5. 根據權利要求1所述的一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，其特征在于，所述步驟（1)中 的培養基為PDA培養基。
【專利摘要】本發明公開了一種擬盤多毛孢菌種保藏方法，包括以下步驟：(1)將菌種接種于培養基中間位置；(2)待菌絲長出時，將滅菌濾紙片擺放在接種位置周圍；(3)待菌絲覆蓋濾紙片之后取下濾紙片，放在滅菌的保存管中；(4)用密封保存管管口，分類標記，在溫度為-80℃～4℃的條件下保存。本發明擬盤多毛孢菌株保存方法，采用滅菌定性濾紙片和EP管保存，避免了雜菌及螨類的污染，以及培養基內水分蒸發的問題，菌株的活化成活率高，保存時間長，不易污染，而且操作簡便易行，耗材少，工序短，耗時少，占空間小等優點。
【IPC分類】C12R1/645, C12N1/04
【公開號】CN105420110
【申請號】CN201511015449
【發明人】宋利沙, 韋繼光, 李麗媛, 黃榮韶, 陳蕭航
【申請人】廣西大學
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年12月29日