6-叔丁基-8-二苯基磷氧基-2′-氟阿糖嘌呤核苷及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于化學與醫藥學領域，具體而言，涉及6-叔丁基-8-二苯基磷氧 基-2'-氟阿糖嘌呤核苷的制備方法及應用。
【背景技術】
[0002] 白血病是最近多發的一類造血干細胞異常的克隆性惡性疾病，其克隆中的白血病 細胞失去進一步分化成熟的能力而停滯在細胞發育的不同階段。在骨髓和其他造血組織中 白血病細胞大量增生積聚并浸潤其他器官和組織，同時使正常造血受抑制，臨床表現為貧 血、出血、感染及各器官浸潤癥狀。
[0003] 核苷類藥物在臨床上廣泛用于白血病治療，如地西他濱、氯法拉濱、阿糖胞苷、環 胞苷、6-巰基嘌呤等。這些藥物對比絲裂霉素、環磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、柔紅霉素、阿克拉 霉素等來看，效果明顯，耐藥性小。所以，核苷類的抗白血病藥物分子的合成和活性篩選是 化學和藥學領域研究的熱點。
【發明內容】
[0004] 為了解決現有技的不足，本發明提供了 6-叔丁基-8-二苯基磷氧基-2'-氟阿 糖嘌呤核苷的制備方法及應用。發明人在大量的化合物合成和活性篩選中發現，6-叔丁 基-8-二苯基磷氧基-2'-氟阿糖嘌呤核苷具有很好的抗HL-60細胞活性。這種化合物的 結構式如式I :
[0006] 同時，我們對其合成方法也進行了研究。解決了現有的合成方法存在著步驟多、收 率低、操作繁瑣等缺點，如：（1)金屬催化偶聯反應；（2)6-氫嘌呤核苷的自由基反應。這兩 類方法均使用到過渡金屬催化劑（如鈀、鎳、釕等）或者難以獲得的原料（如格利雅試劑、 有機鋅試劑等）。同時提供一種高效的6-叔丁基-8-二苯基磷氧基-2'-氟阿糖嘌呤核 苷的方法。
[0007] 本發明的技術方案是：6_叔丁基-8-二苯基磷氧基-2'-氟阿糖嘌呤核苷，其結 構式如下：
[0009] 6-叔丁基-8-二苯基磷氧基-2 ^ -氟阿糖嘌呤核苷的制備方法，其特征在于，包 括以下步驟：
[0010] 步驟1，將氟代腺苷（II)加入到醋酸酐中，加熱反應，反應完畢后，真空除去溶劑， 用乙醇重結晶，得到中間體III，具體反應方程式如下：
[0012] 步驟2,以甲苯為溶劑，中間體III與特戊酸在10倍量的亞硝酸叔丁酯和lOmol% 硝酸銀作用下，加熱到50°C，反應5小時，反應完畢，真空除去溶劑及未反應的低沸點雜質， 加入二氯甲烷溶清，水洗，分出有機相，有機相真空濃縮至干，得到中間體IV，具體反應方程 式如下：
[0014] 步驟3,以甲苯為溶劑，中間體IV與二苯基磷氫在硝酸銀催化下，加熱到90°C，反 應5小時，在8位引入二苯基磷氧基，得到中間體V，具體反應方程式如下：
[0015]
[0016] 步驟4,中間體V在用氨氣飽和的甲醇溶液中室溫氨解24小時，真空濃縮，加入甲 醇重結晶，得到目標產物I，具體反應方程式如下：
[0018] 6-叔丁基-8-二苯基磷氧基-2'-氟阿糖嘌呤核苷在制備治療白血病藥物中的 應用。
[0019] 本發明的有益之處為：（1)公開的化合物具有良好的抗HL-60細胞活性；(2)公開 的合成方法原料易得、收率高，避免了目前合成方法中苛刻的反應條件，簡化了合成操作， 適合于藥物活性的研究及進一步的大規模生產。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例對本發明做詳細說明。
[0021] 實施例1 :
[0022] 在50mL圓底燒瓶中，將脫氧腺苷（II，llg，39. 8mmol)加入到醋酸酐（50mL)中，升 溫至60°C，反應2小時，薄層板跟蹤反應進程，原料反應完全，將反應液轉移到茄形瓶中，在 旋轉薄膜蒸發器上除去溶劑，加入氯仿（50mL)溶解，水洗（20mLX3)，有機相用無水硫酸鈉 干燥，活性炭脫色，除去溶劑，得到無色油狀物，收率90%，即為中間體III。
[0023] 無色油狀物· 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ : 8. 04 (s，1H)，7. 94 (s，1H)，6. 88 (brs，2H)，6 .47 (d, Jc F= 22. 4Hz, 1H), 5. 35 (d, J = 16Hz, 1H), 5. 19 (d, J c F= 50Hz, 1H), 4. 48-4. 39 (m, 2 H),4. 27(s, 1H),2. 17(s, 3H),2. ll(s, 3H) ；13C NMR(DMS〇-d6, 100MHz) δ :170.6, 170.1 , 157. 3, 153. 9, 140. 7, 94. 0, 92. I, 82. 3, 82. I, 78. 6, 75. 8, 75. 7, 63. 5, 21. I, 21. 0 ；HRMS calcd for C14H16FN5NaO5 [M+Na+] 376. 1028, found 376. 1028.
[0024] 實施例2 :
[0025] 中間體III (16g，44. 8mmol)，亞硝酸叔丁酯（53. 7mL，448mmol)，硝酸銀（0· 76g， 4. 5mmol)和甲苯（IOOmL)加入到反應瓶中，50°C反應5小時，薄層板跟蹤反應進程，顯示原 料反應完全，冷至室溫，將反應液轉移到茄形瓶中，在旋轉薄膜蒸發器上除去溶劑，加入二 氯甲烷（50mL)，攪拌至澄清，水洗，分出有機相，真空濃縮至干，得到油狀物IV，收率81 %。
[0026] 無色油狀物· 1H NMR(O)Cl3, 400MHz) δ :8. 01 (s, 1H), 7. 89 (s, 1H), 6. 45 (d, Jc F= 22. 1Hz, 1H), 5. 31 (d, J = 16Hz, 1H), 5. 18 (d, Jc F= 50Hz, 1H), 4. 42-4. 38 (m, 2H), 4. 27 (s, IH ),2. 18 (s，3H), 2. 16 (s，3H), 1.58 (s，9H) ;13C NMR (DMS0-d6, 100MHz) δ :171.0, 170.5, 157.6 ,153. 8, 140. 2, 94. I, 92. 0, 82. 5, 82. I, 78. 6, 75. 4, 75. 7, 63. 5, 38. 6, 29. 7, 21. 6, 21. 0 ；HRMS calcd for C18H23FN4NaO5[M+Na+] 417. 1545, found 417. 1547.
[0027] 實施例3 :
[0028] 中間體IV(5g，12. 7mmol)加入到甲苯（50mL)中，加入硝酸銀（2. lg，12. 7mmol)和 二苯基磷氧（3. 0g，15mmol)，加熱到90°C反應5小時，過濾，濾液水洗，分出有機相，真空濃 縮至干，得到油狀物V，收率85%。
[0029] 無色油狀物· 1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ : 8. 03 (s，1H)，7. 33-7. 27 (m，10H)，6. 43 (d，J C F= 22. 3Hz, 1H), 5. 33 (d, J = 16Hz, 1H), 5. 20 (d, J c F= 50Hz, 1H), 4. 42-4. 35 (m, 2H), 4. 21 (s, 1H), 2. 18(s, 3H), 2. 14(s, 3H), L 59(s, 9H) ；13C NMR(DMS〇-d6, l〇〇MHz) 5:170.7,170.0, 157. 8, 153. I, 140. 6, 129. 3, 121. 2, 114. 0, 94. I, 92. 9, 82. 5, 82. 0, 80. 6, 78. 3, 63. 5, 38. 7, 2 9. I, 21. 3, 21. 0 ；HRMS calcd for C30H33FN4O6P [M+H+] 595. 2116, found 595. 2116.
[0030] 實施例4 :
[0031] 中間體V(10g，16. 8mmol)和氨氣的甲醇飽和溶液（100mL)，加入到反應瓶中，密 封，室溫反應24小時。薄層板顯示原料反應完全。將反應液轉移到茄形瓶中，在旋轉薄膜 蒸發器上除去溶劑，柱層析分離純化，得到白色固體，即為目標產物（I)，收率94%。
[0032] 白色固體· m. P. 236-238 °C · 1H NMR(DMS0-d6, 400MHz) δ : 7. 98 (s, 1H)，7. 35-7. 5 2 (m, 10Η), 6. 34-6. 29 (m, 1Η), 5. 95 (d, J = 4. 8Hz, 1Η), 5. 29 (d, J = 8Hz, 1Η), 5. 08 (d, J = 5. 6Hz, 1Η), 4. 46-4. 38 (m, 1Η), 3. 84 (d, J = 4. 4Hz, 1Η), 3. 70-3. 39 (m, 2Η), 1. 38 (9Η) ；13C NMR(DMS0-d6, 100MHz) δ ： 157. 2, 153. 7, 150. 6, 140. 2, 129. 5, 121. 8, 114. 4, 117. 8, 96. 7, 94 .8, 84. 0, 83. 9, 82. 0, 81. 8, 60. 8, 32. 0, 25. 6 ；HRMS calcd for C26H29FN4O4P [Μ+Η+] 511. 1905, found 511. 1905.
[0033] 實施例5 :
[0034] HL-60細胞培養：
[0035] 用含10%胎牛血清的RPMI 1640培養基在37°C，5% CO2條件下培養。
[0036] 懸浮細胞MTT實驗：
[0037] 收集對數生長期HL-60細胞，用完全RPMI1640培養基懸浮，細胞計數，并調整細 胞濃度為2 X 105/mL，接種96孔細胞培養板，90 μ L/孔。加入不同濃度待測化合物，10 μ L/ 孔，每個濃度設3個復孔；空白孔加入1640培養基10 μ L/孔；本底孔加入不含細胞的培養 基100 μ L/孔。置37°C，5% C0J?育48小時。加入MTT溶液（終濃度0. 05% )，繼續置培 養箱孵育4h。加入三聯液（10% SDS+5%異丙醇+12mM HC1)，37°C孵育12小時。在酶標儀 檢測各孔OD值，檢測波長570nm。
[0038] 抑制率計算方法：（空白-加藥V(空白-本底）X 100%
[0039] 測試結果：
[0041] 結果顯示，樣品對HL-60細胞有很強的抑制作用，IC5。= I. 43 μ m，接近臨床上普遍 使用的阿霉素（ic5。= 1. 73 μ m)，顯示出較好的抗HL-60細胞活性，顯示出在制備治療白血 病藥物中的應用的前景。
[0042] 以上顯示和描述了本發明的基本原理和主要特征和本發明的優點。本行業的技術 人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本 發明的原理，在不脫離本發明精神和范圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這些變 化和改進都落入要求保護的本發明范圍內。本發明要求保護范圍由所附的權利要求書及其 等效物界定。
【主權項】
1. 6-叔下基-8-二苯基憐氧基-2氣阿糖嚷嶺核巧，其特征在于，其結構式如下：2. 6-叔下基-8-二苯基憐氧基-2'-氣阿糖嚷嶺核巧的制備方法，其特征在于，包括 W下步驟： 步驟1，將氣代腺巧（II)加入到醋酸酢中，加熱反應，反應完畢后，真空除去溶劑，用乙 醇重結晶，得到中間體III，具體反應方程式如下：步驟2,W甲苯為溶劑，中間體III與特戊酸在10倍量的亞硝酸叔下醋和lOmol%硝酸 銀作用下，加熱到50°C，反應5小時，反應完畢，真空除去溶劑及未反應的低沸點雜質，加入 二氯甲燒溶清，水洗，分出有機相，有機相真空濃縮至干，得到中間體IV，具體反應方程式如 下：步驟3,W甲苯為溶劑，中間體IV與二苯基憐氨在硝酸銀催化下，加熱到90°C，反應5 小時，在8位引入二苯基憐氧基，得到中間體V，具體反應方程式如下：步驟4，中間體IV在用氨氣飽和的甲醇溶液中室溫氨解24小時，真空濃縮，加入甲醇重 結晶，得到目標產物I，具體反應方程式如下：3. 6-叔下基-8-二苯基憐氧基-2'-氣阿糖嚷嶺核巧在制備治療白血病藥物中的應 用。
【專利摘要】本發明提供了6-叔丁基-8-二苯基磷氧基-2′-氟阿糖嘌呤核苷的制備方法及應用。發明人在大量的化合物合成和活性篩選中發現，6-叔丁基-8-二苯基磷氧基-2′-氟阿糖嘌呤核苷具有很好的抗HL-60細胞活性。這種化合物的結構式如式I：同時，我們對其合成方法也進行了研究。解決了現有的合成方法存在著步驟多、收率低、操作繁瑣等缺點，如：(1)金屬催化偶聯反應；(2)6-氫嘌呤核苷的自由基反應。這兩類方法均使用到過渡金屬催化劑(如鈀、鎳、釕等)或者難以獲得的原料(如格利雅試劑、有機鋅試劑等)。同時提供一種高效的6-叔丁基-8-二苯基磷氧基-2′-氟阿糖嘌呤核苷的方法。
【IPC分類】C07H19/20, C07H1/00, A61P35/02
【公開號】CN105399789
【申請號】CN201510953584
【發明人】孫莉萍, 夏然, 張家洋
【申請人】新鄉學院
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年12月18日