一種提高食藥用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及β -葡聚糖領域，特別是涉及一種提高食藥用真菌β -葡聚糖的提取溶出率方法。
【背景技術】
[0002]β -葡聚糖被稱為“21世紀最新生物科技成果”。近年來，多糖的多種生物活性的發現引發了科研工作者的普遍關注，特別是隨著生物高分子研究新技術、新方法在多糖研究上的應用，使國內外對生物活性多糖的研究迅速發展。國內外學者的研究表明葡聚糖具有獨特的生理活性和藥用價值。藥用、食用菌葡聚糖作為多糖研究領域中的一個重要分支，正因其獨特的生物活性而引起越來越多的關注。自1958年Bmnde III報道了酵母細胞壁多糖具有抗腫瘤作用以來，人們對藥用、食用菌多糖的化學結構及生物活性進行了深入細致的研究并己取得了豐碩的成果。近20年來，已有大量關于食用菌β-葡聚糖生物活性的研究報道，主要集中在抗腫瘤、免疫調節、抗病毒及抗氧化等方面。因此，葡聚糖的研究具有重要的意義，β -葡聚糖因其特有的生理功能性，已受到廣大科研工作者的關注與研究，現已成功的應用于制藥業和保健品業。
[0003]葡聚糖分為2大類:1類是β-1，3-糖苷鍵連接為主，并兼有少量β_1，4或其它糖苷鍵，香菇多糖、茯苓多糖、云芝多糖等都屬于這種連接。如香菇多糖的主鏈是由β_1，3糖苷鍵連接的葡聚糖，主鏈上約有23%葡萄糖殘基通過C-6分支點連有側鏈。側鏈有3種:一是單一的非還原端葡萄糖殘基；另一種是β_1，6糖苷鍵連接的低聚葡萄糖，如杏鮑菇多糖；再一種是β_1，3糖苷鍵連接的低聚葡萄糖。另一類是β-1，6葡聚糖，如灰樹花β-組分是以β_1，6連接為主，在3位上有支鏈，支鏈的連接方式為β_1，3連接，它們長短程度不均一組分。有些葡聚糖的生物學功能需要形成蛋白復合物才能發揮提高免疫力和抗腫瘤的功效，如姬松茸子實體中含有一類抗腫瘤的堿溶性的活性多糖體，該類多糖體是一種由直鏈的β_1，6葡聚糖和蛋白組成。把這種葡聚糖-蛋白復合物用甲醛降解并分離出純多糖，發現抗腫瘤活性大為下降，可見有些多糖的蛋白部分對高的生物活性是必需的。
[0004]β-葡聚糖的提取、分離、純化，目前尚無公認、有效、統一的方法，現常用工藝主要有水提法、酸提法、堿提法以及輔酶法。這些方法無論在葡聚糖提取率、能耗與物耗，還是在葡聚糖活性控制等方面存在較顯著不足，并且所得的葡聚糖的產品科技含量較低，具體體現在一下幾方面:β -葡聚糖純度低、水溶性差、組分不均一等，制約了其高附加值應用。
[0005]現有方法主要有以下問題:水浸提法通常耗時長，能耗高，葡聚糖的提取率低。酸堿提取所使用的無機強酸、強堿用量及處理時間均不好控制。強酸強堿極易破壞β -葡聚糖的生物活性，并且在反應結束后含有強酸強堿廢液，在大規模生產時容易造成嚴重的環境污染。輔酶法技術在生產過程中應用到的酶制劑，一般價格昂貴且容易失活、使用壽命短等缺點，若將其應用于工業化生產，尚需進一步的深入研究。常用的傳統提取技術通常通過大劑量溶劑長時間浸漬，使食藥用真菌植物細胞壁充分膨脹，從而提高浸出速率及浸出量，因此傳統方式需要溶劑量較大時間較長，并且提取率不高。假如在食藥用真菌β -葡聚糖的提取過程中輔以超聲波，并且使用酸度適中的有機酸體系，就有可能通過控制工藝條件，利用超聲波的空化作用促進β -葡聚糖的浸出提取。
【發明內容】
[0006]本發明的目的在于提供一種提高食藥用真菌β -葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食藥用真菌β -葡聚糖的提取溶出率，同時還能實現工藝過程中節水、節能的目標。
[0007]本發明的目的通過以下技術方案實現:
一種提高食藥用真菌葡聚糖的提取溶出率方法，包括以下步驟:
1.將經粉碎預處理后的原料，放入加有有機酸的提取容器中，充分攪拌使其均勻潤濕；
2.向潤濕的原料中加入石油醚，待5-10min后，加熱物料，加熱溫度為90_120°C，保溫10_20min ；
3.采用與有機溶劑洗滌除去少量殘余的酸液，完成原料的有機酸處理以及脫脂；
4.經有機酸處理以及脫脂后的原料加入4-16倍體積水進行分散、調節pH值至4.5，在一定溫度下輔助以超聲波進行提取，反復提取兩次，收集兩次濾液，并將兩次濾液抽濾、合并；
5.取濾液靜置一小時后進行離心處理，上清液調pH值至7.0后加入水溶液體積的3-6倍的乙醇，使溶于水但不溶于乙醇的葡聚糖沉淀出來，收集沉淀物即粗葡聚糖；
6.沉淀物即粗β -葡聚糖用95%乙醇進行兩次脫水后進行離心處理，再經沉淀、干燥，得到β _匍聚糖。
[0008]本發明的有益效果:本發明的一種提高食藥用真菌葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食藥用真菌葡聚糖的提取溶出率，工藝過程中具有節水、節能、高效的優點。
【具體實施方式】
[0009]為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，下面結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。
[0010]實施例1
原料預處理:取1.5kg干燥、除雜的猴頭菇置于粉碎機中粉碎，待粉碎均勻將原料置于中草藥提取器中，加入10L乙醇，加熱回流提取30min，重復上述過程一次，過濾合并兩次濾液并加壓蒸餾回收乙醇，加入2L草酸溶液及石油醚，充分攪拌使其混合均勻，并將物料加熱至100°C，保溫20min后進行減壓蒸餾，直至容器中無液體，再向容器中加入6L乙醇，充分過濾、攪拌，得到酸處理猴頭菇；
提取:取上一步制得的酸處理猴頭菇，加入1L蒸餾水調節pH值至4.5后在超聲波輔助下浸提lh，以5000r/min離心30min，取上清液調節pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min離心20min，沉淀物用95%乙醇脫水，進行兩次，隨后以4500r/min離心lOmin，得到沉淀物備用；
干燥:將提取后的沉淀物在60-70°C下進行干燥，得到β -葡聚糖； 滅菌:將得到的β-葡聚糖進行巴氏殺菌。
[0011]實施例2
原料預處理:取1.5kg干燥、除雜的猴頭菇置于粉碎機中粉碎，待粉碎均勻將原料置于中草藥提取器中，加入15L乙醇，加熱回流提取20min，重復上述過程一次，過濾合并兩次濾液并加壓蒸餾回收乙醇，加入2L草酸溶液及石油醚，充分攪拌使其混合均勻，并將物料加熱至100°C，保溫20min后進行減壓蒸餾，直至容器中無液體，再向容器中加入5L乙醇，充分過濾、攪拌，得到酸處理猴頭菇；
提取:取上一步制得的酸處理猴頭菇，加入2L蒸餾水調節pH值至4.5后在超聲波輔助下浸提lh，以5000r/min離心30min，取上清液調節pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min離心30min，沉淀物用95%乙醇脫水，進行兩次，隨后以4500r/min離心lOmin，得到沉淀物備用；
干燥:將提取后的沉淀物在60-70°C下進行干燥，得到β -葡聚糖；
滅菌:將得到的葡聚糖進行巴氏殺菌。
[0012]實施例3
原料預處理:取1.5kg干燥、除雜的猴頭菇置于粉碎機中粉碎，待粉碎均勻將原料置于中草藥提取器中，加入20L乙醇，加熱回流提取30min，重復上述過程一次，過濾合并兩次濾液并加壓蒸餾回收乙醇，加入1.5L草酸溶液及石油醚，充分攪拌使其混合均勻，并將物料加熱至100°C，保溫20min后進行減壓蒸餾，直至容器中無液體，再向容器中加入5L乙醇，充分過濾、攪拌，得到酸處理猴頭菇；
提取:取上一步制得的酸處理猴頭菇，加入2L蒸餾水調節pH值至4.5后在超聲波輔助下浸提lh，以5000r/min離心30min，取上清液調節pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min離心20min，沉淀物用95%乙醇脫水，進行兩次，隨后以4500r/min離心lOmin，得到沉淀物備用；
干燥:將提取后的沉淀物在60-70°C下進行干燥，得到β -葡聚糖；
滅菌:將得到的葡聚糖進行巴氏殺菌。
[0013]實施例4
原料預處理:取1.5kg干燥、除雜的猴頭菇置于粉碎機中粉碎，待粉碎均勻將原料置于中草藥提取器中，加入25L乙醇，加熱回流提取20min，重復上述過程一次，過濾合并兩次濾液并加壓蒸餾回收乙醇，加入1.5L草酸溶液及石油醚，充分攪拌使其混合均勻，并將物料加熱至100°C，保溫20min后進行減壓蒸餾，直至容器中無液體，再向容器中加入5L乙醇，充分過濾、攪拌，得到酸處理猴頭菇；
提取:取上一步制得的酸處理猴頭菇，加入1.5L蒸餾水調節pH值至4.5后在超聲波輔助下浸提lh，以5000r/min離心30min，取上清液調節pH值至7.0后用乙醇沉淀，以4500r/min離心20min，沉淀物用95%乙醇脫水，進行兩次，隨后以4500r/min離心lOmin，得到沉淀物備用；
干燥:將提取后的沉淀物在60-70°C下進行干燥，得到β -葡聚糖；
滅菌:將得到的葡聚糖進行巴氏殺菌。
[0014]本發明實施例得到的β -葡聚糖純度高、水溶性好，并且通過此方法β -葡聚糖得率可達91.83%。
[0015]上述實施例僅為本發明的較佳實施例，只對本發明作示例性說明，而非限定本發明。本專業技術人員凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍內。
【主權項】
1.一種提高食藥用真菌β -葡聚糖的提取溶出率方法，其特征在于:包括以下步驟: 將經粉碎預處理后的原料，放入加有有機酸的提取容器中，充分攪拌使其均勻潤濕； 向潤濕的原料中加入石油醚，待5-10min后，加熱物料，加熱溫度為90-120°C，保溫10_20min ； 采用與有機溶劑洗滌除去少量殘余的酸液，完成原料的有機酸處理以及脫脂； 經有機酸處理以及脫脂后的原料加入4-16倍體積水進行分散、調節pH值至4.5，在一定溫度下輔助以超聲波進行提取，反復提取兩次，收集兩次濾液，并將兩次濾液抽濾、合并； 取濾液靜置一小時后進行離心處理，上清液調pH值至7.0后加入水溶液體積的3-6倍的乙醇，使溶于水但不溶于乙醇的葡聚糖沉淀出來，收集沉淀物即粗葡聚糖； 沉淀物即粗β -葡聚糖用95%乙醇進行兩次脫水后進行離心處理，再經沉淀、干燥，得到葡聚糖。
【專利摘要】<b>一種提高食藥用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，采用有機酸體系對食藥用真菌類植物進行處理，然后采用水提醇沉工藝，浸提過程輔助以超聲波，最后獲得β-葡聚糖。本發明的一種提高食藥用真菌β-葡聚糖的提取溶出率方法，能有效提升食藥用真菌β-葡聚糖的提取溶出率，工藝過程中具有節水、節能、高效的優點。</b>
【IPC分類】C08B37/00
【公開號】CN105384836
【申請號】CN201510939482
【發明人】陳喜軍
【申請人】黑龍江眾生生物工程有限公司
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年12月16日