一種Ⅳ型膠原酶抑制劑及合成方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種IV型膠原酶抑制劑及合成方法。
【背景技術】
[0002] 基質金屬蛋白酶是一類典型的含金屬鋅離子的蛋白酶，其活性催化中心含有催化 鋅離子。基質金屬蛋白酶可由成纖維細胞、軟骨細胞、成骨細胞、中性粒細胞或巨噬細胞產 生，也可由腫瘤細胞產生。內源性組織抑制劑通過調節金屬蛋白酶的活性而維持機體的內 環境穩定。因此，基質金屬蛋白酶表達增加或基質金屬蛋白酶與組織抑制劑失衡將導致疾 病，如腫瘤轉移、類風濕性關節炎多發性硬化癥等。研究發現基質金屬蛋白酶抑制劑能抑制 腫瘤的生長及轉移。基底膜主要由IV型膠原組成并能阻止腫瘤細胞的侵襲。IV型膠原酶通 過分解基底膜血管而使腫瘤細胞發生侵襲和轉移。所以IV型膠原酶抑制劑能有效的阻止腫 瘤細胞的侵襲和轉移，IV型膠原酶抑制劑是尋找和開發抗腫瘤物的新領域。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供一種IV型膠原酶抑制劑及合成方法。
[0004] 本發明是這樣來實現的，其化學通式為：
R1=呋喃環，苯環；X=CH2, 0 ;n=0, I ;m=0,1 ;R2, R3, R4, 1?5為 F，C1，I，N02, OCH3, 1 至 5 個 碳原子的直鏈或支鏈烷烴。
[0005] 本發明的合成方法步驟是： (1) 5-(2, 4-二氯苯基）_1，3, 4-噻二唑-2-胺的制備：將2, 4-二氯苯甲酸、硫代氨基 脲、POCl3放于帶有回流裝置的圓底燒瓶中，回流反應lh，冷卻至室溫，用恒壓滴液漏斗緩慢 向圓底燒瓶中加入水，回流反應4h，冷卻至室溫，用氫氧化鈉溶液調PH值，用循環水式真空 栗趁熱抽濾，固體用乙醇重結晶，干燥后得目的物。
[0006] (2) N-[2-[5-(2, 4-二氯苯基）-1，3, 4-噻二唑]]-2-呋喃酰胺的制備：將糠酸、 氯化亞砜放于帶回流裝置的圓底燒瓶中，回流反應2h，放置室溫，旋轉蒸發器除去剩余的氯 化亞諷，用無水二氣甲燒洗2次。冰浴下緩慢滴入含有5_(2, 4_二氣苯基）_1，3, 4_噻二 唑-2-胺、無水三乙胺、二氯甲烷做溶劑的圓底燒瓶中，室溫密封反應過夜，旋干，固體依次 用水、lmol/L HC1、水、飽和碳酸氫鈉、水、乙醇洗，干燥，用DMF、水重結晶，得固體目的物。
[0007] 本發明的優點是：所設計的化合物均為小分子擬肽類化合物，合成工藝路線短，原 材料易得，生產成本低。
【具體實施方式】
[0008] 實施例： (1) 5-(2, 4-二氯苯基）-1，3, 4-噻二唑-2-胺的制備：
將 9.74g (50mmol)2,4-二氯苯甲酸、4.65g (50mmol)硫代氨基脲、13ml POCl3放于帶 有回流裝置的圓底燒瓶中，在75°C下回流反應lh，冷卻至室溫，用恒壓滴液漏斗緩慢向圓 底燒瓶中加入55ml水，于IKTC回流反應4h，冷卻至室溫，用50%氫氧化鈉溶液調PH值至 8,用循環水式真空栗趁熱抽濾，固體用乙醇重結晶，干燥后得淺黃色目的物6. 21g，產率： 50. 36% ；mp:154-156〇C . (2) N-[2-[5-(2, 4-二氯苯基）-1，3, 4-噻二唑]]-2-呋喃酰胺的制備：
將I. 71g (15mmol)糠酸、12ml氯化亞砜放于帶回流裝置的圓底燒瓶中，回流反應 2h，放置室溫，旋轉蒸發器除去剩余的氯化亞砜，用無水二氯甲烷洗2次。冰浴下緩慢滴 入含有3. 7g (15mmol) 5-(2,4-二氯苯基）-1，3,4_噻二唑-2-胺、9ml無水三乙胺、二 氯甲烷做溶劑的圓底燒瓶中，室溫密封反應過夜，旋干，固體依次用水、lmol/L HCl、水、 飽和碳酸氫鈉、水、乙醇洗，干燥，用DMF、水重結晶，得白色固體2. 9g，產率：56. 86%， mp:294-295〇C〇IR (KBr, cm : 3126, 1680, 1533, 1507, 1321, IOgij1HNMR (400MHz, DMS0) δ 13. 25(s, 1H), 8. 17 (d, J=8. 4Ηζ, 1Η), 8. 08(s, 1Η), 7. 92 (d, J=24. 4Ηζ, 1Η), 7. 76(s, 1H), 7. 62 (d, J=8. 5Hz, 1H), 6. 78 (d, J=L 6Hz, 1H) ；ESI-MS: m/z [M+H]+340. 3. (3) (2R)-N-[2-[5-苯基-1，3, 4-噻二唑]]-2-羥基-苯乙酰胺的制備
將 1.52 g (10 mmol ) (R)-(-)-扁桃酸、1.7 mL (20.5 mmol)吡啶、20 mL 二氯甲烷 和催化劑DMAP置于干燥的圓底燒瓶中，待完全溶解后逐滴加入2. 6 mL (20. 5 mmol)三甲 基氯硅烷，室溫攪拌4 h。冷卻至0° C，加入0.75 mL (10. 3 mmol)二氯亞砜和兩滴DMF， 〇°C攪拌I h，室溫攪拌30 min。冷卻至0° C，加入1.95 g (11 mmol) 5-苯基-1,3, 4-噻 二唑-2-胺和2. 7 mL (33 mmol)吡啶，室溫攪拌2 h。將2.11 g (11 mmol)檸檬酸用20 mL甲醇溶解，加入到反應瓶中，室溫攪拌30 min后倒入分液漏斗，用乙酸乙酯稀釋，依次用 I mol/L鹽酸、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水各洗兩遍，將有機相溶劑蒸除，用乙酸乙酯 重結晶，干燥后得目標化合物。同樣方法制備。黃色固體，產率80. 6%，m.p. 232-234° C; IR (KBr, v) ： 3300, 2730, 1703, 1676, 1549, 1501 cm1; 1HNMR (DMSO-4, 400 MHz) δ： 12.75 (1H, s, NH), 7.94 - 7.89 (2H, m, Ar-H), 7.53 (5H, dd, /=9.8, 5.8 Hz, Ar-H), 7.38 (2H, t, /= 7.3 Hz, Ar-H), 7.31 (1H, dd, / = 8.4, 6.1 Hz, Ar-H), 6.42 (1H, d, /= 4.8 Hz, OH), 5.38 (1H, d, / = 4.6 Hz, 7-CH) ; ESI-MS m/z 312.1 (M)+〇
[0009] 體外抑酶活性 底物 MOCAc-Pro-Leu-Gly-Leu-Dap (Dnp) -Ala-Arg-NH2*具有焚光物質 MOCAc，可用焚 光分光光度計檢測，底物中的Dap(Dnp)為熒光熄滅物，在沒有明膠酶加入的情況下底物不 顯熒光，當在適宜的條件下加入明膠酶，明膠酶能分解底物，底物分解后Dap (Dnp)對MOCAc 的熒光熄滅作用消失，釋放出的熒光物MOCAc發出熒光，可通過熒光分光光度計檢測其熒 光的強度，從而可以確定明膠酶的活性，通過加入對明膠酶有抑制作用的目標化合物間接 的反應IV型膠原酶抑制劑的活性大小。
[0010] 96孔黑色酶標板，每孔加入20 uL (5 nmol/L)酶，然后加入5 uL (100 umol/L) 化合物，混勻，37° C孵育15分鐘。然后加入10 uL (50 umol/L)底物，再加入15 uL緩 沖液（50 mmol/L HEPES, pH 7. 5，150 mmol/L NaCl, 5 mmol/L CaCl2, 0· 01% Bri j-35， 1%DMS0)，混勻，37° C孵育15分鐘。用酶標儀檢測熒光信號，激發波長為328 nm，發射波 長為393 nm。目標化合物對酶的抑制率={1-[ (Flu化合物-Flu本底V( Flu酶-Flu本 底）]} X100%。
[0011] 表1化合物的體外抑酶活性
表2化合物的體外抑酶活性
【主權項】
1. 一種IV型膠原酶抑制劑，其特征是化學通式為：R1=呋喃環，苯環；X=CH2,Ο;n=0, 1 ;m=0,1 ;R2,R3,R4, 1?5為F，C1，I，N02, 0CH3, 1 至 5 個 碳原子的直鏈或支鏈烷烴。2. -種權利要求1所述的IV型膠原酶抑制劑的合成方法，其特征是合成方法步驟為： (1) 5_(2, 4-二氯苯基）_1，3, 4-噻二唑-2-胺的制備：將2, 4-二氯苯甲酸、硫代氨 基脲、P0C13放于帶有回流裝置的圓底燒瓶中，回流反應lh，冷卻至室溫，用恒壓滴液漏斗 緩慢向圓底燒瓶中加入水，回流反應4h，冷卻至室溫，用氫氧化鈉溶液調PH值，用循環 水式真空栗趁熱抽濾，固體用乙醇重結晶，干燥后得目的物；（2)N-[2-[5-(2, 4-二氯苯 基）-1，3, 4-噻二唑]]-2-呋喃酰胺的制備：將糠酸、氯化亞砜放于帶回流裝置的圓底燒瓶 中，回流反應2h，放置室溫，旋轉蒸發器除去剩余的氯化亞砜，用無水二氯甲烷洗2次；冰 浴下緩慢滴入含有5-(2, 4-二氯苯基）-1，3, 4-噻二唑-2-胺、無水三乙胺、二氯甲烷做溶 劑的圓底燒瓶中，室溫密封反應過夜，旋干，固體依次用水、lmo1/LHC1、7K、飽和碳酸氫鈉、 水、乙醇洗，干燥，用DMF、水重結晶，得固體目的物。
【專利摘要】一種Ⅳ型膠原酶抑制劑，化學通式如下，R1=呋喃環，苯環；X=CH2，O；n=0,1；m=0，1；R2，R3，R4，R5為F，Cl，I，NO2，OCH3,1至5個碳原子的直鏈或支鏈烷烴。本發明還涉及到該Ⅳ型膠原酶抑制劑的合成方法，所設計的化合物均為小分子擬肽類化合物，合成工藝路線短，原材料易得，生產成本低。
【IPC分類】C07D285/135, C07D417/12, A61P35/00
【公開號】CN105384736
【申請號】CN201510709786
【發明人】涂國剛, 李少華, 匡濱海, 劉亞
【申請人】南昌大學
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年10月28日