一種金線蓮多糖提取、初步純化及其口服液制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明是一種金線蓮多糖提取、初步純化及其口服液制備方法，屬于生物技術領 域。
【背景技術】
[0002] 金線蓮（Anoectochilus roxburghii)又稱為金線蘭、花葉開唇蘭、金絲草，素有 "神藥"、"金草"、"藥王" "烏人參"等美稱，是蘭科開唇植物花葉屬多年生珍稀中草藥，主要 分布在我國的臺灣、四川、廣東、廣西、貴州、云南等地區。多項研究表明金線蓮對糖尿病、高 血壓、心臟病、腫瘤、急性肝炎、肺炎等有良好的治療效果。
[0003] 隨著生活水平不斷提高，人們更加注重養生，營養保健成了追逐的潮流。市場上保 健品種類琳瑯滿目，然多數保健品安全性和保健功能并無保障。目前，從天然食材提取的具 有保健功能的物質，如食用菌多糖、茶多糖及金柑多糖等，深受消費者喜愛。同時，具有保健 功能的中草藥也受到消費者普遍關注。我國是中草藥大國，不僅物種豐富，而且食用歷史悠 久。但中草藥從采摘到食用過程步驟繁瑣，阻礙了其快速發展。自從加入WT0以后，我國 中草藥出口量大幅度增長，但都是以初加工的形式出口，附加值較低，成交額遠低于其他國 家。因此，開展對中草藥深加工的研究，建立安全可靠的中草藥加工體系，具有重要意義。
【發明內容】
[0004] 本發明提供一種金線蓮多糖提取、初步純化及其口服液制備方法，包括以下步 驟： 1) 制備金線蓮干粉：新鮮金線蓮~*篩選一*清洗一*晾干-^熱泵脫水一*粉碎#金線 蓮粉，取適量金線蓮粉置于圓底燒瓶中一，1 : 20比例加入石油醚，60°C回流浸提0.5h，以 脫去表面脂肪，1 : 20比例加入80%的乙醇，70°C回流lh，除去單糖、低聚糖、色素和多肽小 分子物質，同時滅酶活防止酶在提取過程中對多糖的降解4離心，殘渣用乙醇洗滌3次一* 抽濾，真空干燥金線蓮干粉，水分含量〈3% ; 2) 提取金線蓮多糖：采用水浸提法或超高壓提取法，所述的水浸提法為：金線蓮干粉 __過40篩一^熱水浸提4離心-+上清液一―濾布過濾一^蒸發濃縮至原體積的1/5 4乙 醇沉淀，濾布濾出上浮物果膠，作為副產物~*濾液離心一+得粗提物一*定容一*測定；所述 的超高壓提取法為：金線干粉一裝袋一加入一定比例的超純水一密封一超高壓處理一抽濾 -離心，4000r/min，20min -取上清液一70%乙醇醇沉一^濾液離心-?得粗提物-?定容 -定； 3) 純化金線蓮多糖：金線蓮多糖粗提液先透過截留相對分子質量為100ku的超濾膜分 級，收集截留液和透過液，透過液再經截留相對分子質量為l〇ku的超濾膜分級，收集截留 液和透過液，分別測兩次膜分離得到的截留液和透過液中蛋白質和多糖含量。
[0005] 選用熱泵脫水技術干燥金線蓮效果很好，與傳統干燥方法相比，熱泵脫水技術干 燥的金線蓮色澤鮮亮，多糖保留率高，對中草藥加工方面具有重要意義。、超高壓提取金線 蓮多糖，與傳統熱水浸提相比較，多糖得率提高到1. 66倍，為多糖提取方法體系拓寬了渠 道。以二次超濾技術純化金線蓮多糖，純化效果好，能大批量處理樣品，并且步驟簡單，耗能 少，沒有二次污染，為金線蓮多糖工廠化生產提供理論依據。目前，金線蓮產品品種單一，食 用不便。本文研制的金線蓮多糖口服液，不僅方便攜帶貯存，且營養安全，開啟了金線蓮深 加工的閘門，填補國內市場空白，對中草藥深加工利用方面有重要意義。
【具體實施方式】
[0006] 制備金線蓮干粉：新鮮金線蓮4篩選4清洗晾干一*熱泵脫水粉碎金 線蓮粉，取適量金線蓮粉置于圓底燒瓶中》1 : 20比例加入石油醚，60°C回流浸提0. 5h， 以脫去表面脂肪，1 : 20比例加入80%的乙醇，70°C回流lh，除去單糖、低聚糖、色素和多肽 小分子物質，同時滅酶活防止酶在提取過程中對多糖的降解4離心，殘渣用乙醇洗滌3次 4抽濾，真空干燥金線蓮干粉，水分含量〈3% ; 不同干燥方法處理的金線蓮原材料中多糖含量，得出最終多糖得率：新鮮 > 熱泵脫水 >烘干 > 曬干。干燥時間越長，多糖得率越低。從干燥環境方面考慮，烘干采用是熱鼓風處 理，曬干是高溫暴曬，在這樣的環境下，多糖遭到不同程度降解。新鮮金線蓮雖然多糖得率 最高，但在膜分離純化過程，損失率也最高，可能在提取多糖的同時，細胞內含量豐富的其 它物質如果膠等大分子物質也隨著溶出，在膜分離過程造成堵塞，影響多糖的透過，造成多 糖損失。新鮮的金線蓮雖然多糖含量豐富，但不易長時間保存，容易腐爛變質。
[0007] 提取金線蓮多糖：采用水浸提法或超高壓提取法，所述的水浸提法為：金線蓮干 粉過40篩#熱水浸提離心上清液一*濾布過濾蒸發濃縮至原體積的1/5 -^ 乙醇沉淀，濾布濾出上浮物果膠，作為副產物一*濾液離心^得粗提物#定容μ測定；據 二次回歸數學模型進行參數最優分析，獲得最高多糖提取率所需參數為提取溫度81. 56°C、 提取時間0. 93h、液固比30. 86:1、多糖得率預測值為7. 35%。經分析選提取溫度82°C、時間 lh料液比30:1為最佳提取工藝，經驗證多糖得率為7. 33%，接近預測值7. 35% ; 所述的超高壓提取法為：金線干粉一裝袋一加入一定比例的超純水一密封一超高壓處 理一抽濾一離心，4000r/min，20min -取上清液一70%乙醇醇沉一^濾液離心·^得粗提 物定容測定；最優工藝參數：提取溫度82°C，浸提時間lh，液固比30:1，在此工藝參 數下，多糖得率7. 35%。超高壓提取法，在最優工藝條件下，多糖得率12. 19%。
[0008] 純化金線蓮多糖：金線蓮多糖粗提液先透過截留相對分子質量為lOOku的超濾膜 分級，收集截留液和透過液，透過液再經截留相對分子質量為l〇ku的超濾膜分級，收集截 留液和透過液，分別測兩次膜分離得到的截留液和透過液中蛋白質和多糖含量；二次超濾 技術表現出良好的分離純化效果，篩選的技術參數如下：金線蓮多糖提取液經l〇〇ku超濾 膜分離，操作壓力〇. 4Mpa，膜通量穩定時間40min。100ku超濾膜透過液過10ku超濾膜分 離，操作壓力〇. 3Mpa，膜通量穩定時間30min。10ku超濾膜的截留液中金線蓮多糖，即為要 提取的目標物，其中多糖得率為8. 75%。
[0009] 金線蓮多糖口服液制備：金線蓮粉經按照超高壓提取法篩選的最優參數提取金線 蓮多糖，粗提液先經l〇〇ku超濾膜超濾分級，收集透過液，再經過截留相對分子質量為10ku 的超濾膜分離，收集截留液，即為純化后的金線蓮多糖溶液，最后冷凍干燥，密封備用。
[0010] 取金線蓮多糖粉，分別向溶液中加入白砂糖、檸檬酸、蜂蜜。通過單因素正交試驗， 得到金線蓮口服液最佳配方為：以質量分數記，金線蓮多糖為1. 6%，白砂糖為4%，蜂蜜為 1%，檸檬酸為〇. 07%。以此配方得到的金線蓮多糖口服液，清香爽口，營養安全。
【主權項】
1. 一種金線蓮多糖提取方法，其特征在于，包括W下步驟： 制備金線蓮干粉；新鮮金線蓮一^篩選^清洗一*^瞭干一^熱泉脫水粉碎金線蓮 粉，取適量金線蓮粉置于圓底燒瓶中-*1 : 20比例加入石油離，6(TC回流浸提0.化，W脫 去表面脂肪，1 : 20比例加入80%的己醇，7(TC回流比，除去單糖、低聚糖、色素和多膚小分 子物質，同時滅酶活防止酶在提取過程中對多糖的降解離必，殘渣用己醇洗涂3次^抽 濾，真笠干燥W金線蓮干粉，水分含量<3% ; 提取金線蓮多糖；采用水浸提法或超高壓提取法，所述的水浸提法為；金線蓮干粉^ 過40篩熱水浸提離必^上清液濾布過濾蒸發濃縮至原體積的1/5己醇沉 淀，濾布濾出上浮物果膠，作為副產物一*濾液離必W得粗提物定容一*測定；所述的超 高壓提取法為：金線干粉一裝袋一加入一定比例的超純水一密封一超高壓處理一抽濾一離 必，4000r/min，20min-取上清液一 70%己醇醇沉濾液離必一*得粗提物一定容一* 測定； 純化金線蓮多糖；金線蓮多糖粗提液先透過截留相對分子質量為lOOku的超濾膜分 級，收集截留液和透過液，透過液再經截留相對分子質量為lOku的超濾膜分級，收集截留 液和透過液，分別測兩次膜分離得到的截留液和透過液中蛋白質和多糖含量。2. 根據權利要求1所述的金線蓮多糖提取方法，其特征在于：所述熱泉脫水的脫水溫 度 80〇C。3. 根據權利要求1所述的金線蓮多糖提取方法，其特征在于：所述的水浸提法的提取 溫度82°C、提取時間比，液固比30:1，己醇濃度70%。4. 根據權利要求1所述的金線蓮多糖提取方法，其特征在于：超高壓提取法的操作壓 力SOOMpa，液固比1:30,提取時間20min，提取溫度50°C。5. 根據權利要求1所述的金線蓮多糖提取方法，其特征在于；金線蓮多糖提取液經 lOOku超濾膜分離，操作壓力0. 4Mpa，膜通量穩定時間40min，lOOku超濾膜透過液過lOku 超濾膜分離，操作壓力0. 3Mpa，膜通量穩定時間30min，lOku超濾膜的截留液中金線蓮多 糖，即為要提取的目標物，其中多糖得率為8. 75%。6. -種利用權利要求1所述的金線蓮多糖制備口服液的方法，其特征在于；W質量分 數記，金線蓮多糖為1. 6%，白砂糖為4%，蜂蜜為1%，巧樣酸為0. 07%。
【專利摘要】以金線蓮為原料，采用自然曬干、烘干、熱泵脫水等干燥方法制金線蓮干品，以熱泵脫水的金線蓮為原料，熱水浸提和超高壓輔助提取法提取金線蓮多糖，用二次超濾法初步純化金線蓮多糖，以純化后的金線蓮多糖為主料，以蜂蜜、白砂糖和檸檬酸為輔料，研制出清香爽口、營養安全的金線蓮多糖口服液。金線蓮多糖、白砂糖、蜂蜜及檸檬酸質量分數分別為1.6%、4%、1%和0.07%為最優配方。
【IPC分類】C08B37/00, A61K31/715
【公開號】CN105315381
【申請號】CN201410349216
【發明人】藍炎陽, 王少峰, 陳毅勇, 常雙艷
【申請人】漳州市亞熱帶園藝技術有限公司
【公開日】2016年2月10日
【申請日】2014年7月22日