用于重組人表皮生長因子發酵的培養基的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及生物技術領域，尤其設及用于重組人表皮生長因子發酵的培養基。
【背景技術】
[0002] 表皮生長因子是由Cohen等人在上世紀60年代從小鼠頌下腺發現的一種生長 調節蛋白，由53個氨基酸組成，研究證實它具有廣泛的刺激細胞增殖的作用。1975年， Starkey、Cohen等人從人尿中提取了人表皮生長因子化umanEpidermalGrowthFactor, hEGF)，與鼠表皮生長因子具有高度一致的結構，并具有一致的生物學活性。表皮生長因子 廣泛存在于人體各種組織中，可刺激多種細胞增殖，主要是上皮細胞和內皮細胞的增殖，運 是通過結合細胞膜上的表皮生長因子受體巧GFR)而起作用的。EGF通過與細胞受體的膜外 部分結合，激活其酪氨酸激酶活性，誘導蛋白憐酸化，啟動DNA合成，激活RNA、蛋白質合成， 促進細胞增生、移行。
[0003] 表皮生長因子廣泛存在于人體內各種組織，含量極微，對于維持人體各種組織器 官（如角結膜、皮膚、各種黏膜、腺體等）的正常生理功能具有重要作用。隨著年齡的增長， 體內表皮生長因子水平逐漸下降，表現為相關組織器官的衰老和退化，特別是上皮組織的 衰老，因此，及時向人體補充表皮生長因子，可維護人體正常功能并延緩衰老，運是表皮生 長因子在美容保健行業的應用基礎。另外，在肌體受損等的情況下，內源性表皮生長因子不 能滿足組織修復的大量需要，及時向受損部位補充表皮生長因子，可促進受損肌體組織的 修復，在臨床上應用非常廣泛，如用于創傷、炎癥、手術、化學燒傷及干眼癥等各種原因引起 的角膜上皮缺損修復，燒傷、創傷、外科手術、炎癥、潰瘍等各種皮膚和黏膜缺損的修復。
[0004] 目前，對表皮生長因子和重組表皮生長因子已有研究，例如中國專利97115284. 5， 公開了表皮生長因子工程菌及使用該菌制備表皮生長因子的方法，研究人員通過表皮生長 因子可W得到重組人表皮生長因子（或者稱為重組人表皮生長因子原液）。科技在不斷進 步，對于表皮生長因子和重組表皮生長因子的研究也在不斷的進行當中。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供用于重組人表皮生長因子發酵的培養基，該培養基由W下重 量比例成分制成：
[0006] 甘油： 5. 0-7. 0%-、
[0007] 酵母堿基（Y服）3.0-3.日％、 微量金屬離子：1.8-2。2%、 化物崇 0. 5-1.0%、 促進劑 0.5-1.0%、 水 余量；
[0008] 所述微量金屬離子為=氯化鐵、氯化巧、鋼酸鋼、氯化鋒、硫酸銅、棚酸、硫酸侶中 的一種；
[0009] 用憐酸鹽緩沖液調抑為5. 5-6. 5;
[0010] 所述促進劑采用W下方法制備：
[0011] 1)原料處理：將積雪草和金銀花按照等重混合、洗凈、干制、粉碎；
[0012] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa， 保壓時間維持在150-200S;
[0013] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內，再通過油水分 離器，收集精油；
[0014] 4)高剪切均質機處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質機處理，線速度 30-40m/s，時間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[0015] 進一步優選的，該培養基由W下重量比例成分制成：
[0016] 甘油： 6.0%、 酵母堿基（Y服） 3.44%、 微量金屬離子； 2.0%、 '1:.物崇 1.0%、 促進劑 0.8%、 水 余量;
[0017] 所述微量金屬離子為=氯化鐵、氯化巧、鋼酸鋼、氯化鋒、硫酸銅、棚酸、硫酸侶中 的一種；
[001引用憐酸鹽緩沖液調pH為6. 0 ;
[0019] 所述促進劑采用W下方法制備：
[0020] 1)原料處理：將積雪草和金銀花按照等重混合、洗凈、干制、粉碎；
[0021] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa， 保壓時間維持在150-200S;
[0022] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內，再通過油水分 離器，收集精油；
[002引 4)高剪切均質機處理：將步驟扣得到的精油通過高剪切均質機處理，線速度 30-40m/s，時間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[0024] 本發明所述用水符合制藥行業標準。
[00巧]本發明所述培養基按照現有技術制備。
[0026] 本發明所述積雪草、金銀花的使用量，優選粉碎后的體積相當于蒸汽爆破罐體積 的 1/4-1/3。
[0027]與現有技術相比，本發明具有如下優點：
[002引1、本發明使用的植物原料成分經過了蒸汽爆破、蒸饋、高剪切均質機處理，得到納 米乳狀的植物油性成分，和培養基中其他配方的相容性好。
[0029] 2、本發明通過在培養基中添加植物原料成分作為促進劑，和現有技術相比，表達 產量會提高30-38%。
【具體實施方式】
[0030] 下面W實施例對本發明作進一步說明，但本發明并不局限于運些實施例。
[003。 實施例1 :
[0032] 用于重組人表皮生長因子發酵的培養基，該培養基由W下重量比例成分制成：
[0033] 甘油： 5.0%、 酵母堿基（YNB) 3.5%、 微量金屬離予： 1.8%、 化物案 0.5%、 促進劑 1.0%、 水 余量；
[0034] 所述微量金屬離子為=氯化鐵；
[0035] 用憐酸鹽緩沖液調抑為5. 5;
[0036] 所述促進劑采用W下方法制備：
[0037] 1)原料處理：將積雪草和金銀花按照等重混合、洗凈、干制、粉碎；
[0038] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當于蒸汽爆破罐 體積的1/3,爆破壓力3. 5Mpa，保壓時間維持在150s;
[0039] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內，再通過油水分 離器，收集精油；
[0040] 4)高剪切均質機處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質機處理，線速度40m/ S，時間3min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[00川 實施例2:
[0042] 用于重組人表皮生長因子發酵的培養基，該培養基由W下重量比例成分制成：
[0043] 甘油： 7.0%、 藤母堿基（YNB) 3.0%、 微量金屬離子； 2.2%、
[0044] 物崇 1.0%、 '足進劑 0. 5%、 水 余量；
[0045] 所述微量金屬離子為氯化巧；
[0046] 用憐酸鹽緩沖液調抑為6. 5;
[0047] 所述促進劑采用W下方法制備：
[0048] 1)原料處理：將積雪草和金銀花按照等重混合、洗凈、干制、粉碎；
[0049] 2)蒸汽爆破處理：將步驟I)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當于蒸汽爆破罐 體積的1/4,爆破壓力3. OMpa,保壓時間維持在200s ;
[0050] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內，再通過油水分 離器，收集精油；
[005。 4)高剪切均質機處理：將步驟扣得到的精油通過高剪切均質機處理，線速度30m/ S，時間5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
[005引實施例3:
[0053] 用于重組人表皮生長因子發酵的培養基，該培養基由W下重量比例成分制成：
[0054] 甘油； 6.0%、 酵母堿基（Y服） 3.44%、 微量金屬離子： 2. 0〇/〇、 化物素 1.0%、 巧進劑 0.8%、 水 余量；
[0055] 所述微量金屬離子為鋼酸鋼、氯化鋒、硫酸銅、棚酸、硫酸侶中；
[0056] 用憐酸鹽緩沖液調抑為6.0 ;
[0057] 所述促進劑采用W下方法制備：
[005引1)原料處理：將積雪草和金銀花按照等重混合、洗凈、干制、粉碎；
[0059] 2)蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，體積相當于蒸汽爆破罐 體積的1/3,爆破壓力3. OMpa,保壓時間維持在180s ;
[0060] 3)蒸饋處理：將步驟2)得到的物料放入蒸饋器，在蒸饋器底部，加熱燃燒或通入 蒸汽，當炙熱的蒸氣充滿在蒸饋器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內，再通過油水分 離器，收集精油；
[006。4)高剪切均質機處理：將步驟扣得到的精油通過高剪切均質機處理，線速度35m/ S，時間4min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。
【主權項】
1. 用于重組人表皮生長因子發酵的培養基，其特征在于，該培養基由以下重量比例成 分制成：所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中的一 種； 用磷酸鹽緩沖液調pH為5. 5-6. 5 ; 所述促進劑采用以下方法制備： 1) 原料處理：將積雪草和金銀花按照等重混合、洗凈、干制、粉碎； 2) 蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa，保壓 時間維持在150-200s; 3) 蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入蒸汽， 當炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內，再通過油水分離器， 收集精油； 4) 高剪切均質機處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質機處理，線速度30-40m/ s，時間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。2. 根據權利要求1所述的用于重組人表皮生長因子發酵的培養基，其特征在于，該培 養基由以下重量比例成分制成：所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中的一 種； 用磷酸鹽緩沖液調pH為6.0; 所述促進劑采用以下方法制備： 1) 原料處理：將積雪草和金銀花按照等重混合、洗凈、干制、粉碎； 2) 蒸汽爆破處理：將步驟1)得到的物料放入蒸汽爆破罐，爆破壓力3. 0-3. 5Mpa，保壓 時間維持在150-200s; 3) 蒸餾處理：將步驟2)得到的物料放入蒸餾器，在蒸餾器底部，加熱燃燒或通入蒸汽， 當炙熱的蒸氣充滿在蒸餾器里，水蒸氣通過冷凝管，被引入冷凝器內，再通過油水分離器， 收集精油； 4)高剪切均質機處理：將步驟3)得到的精油通過高剪切均質機處理，線速度30-40m/s，時間3-5min，制成納米乳，并用微孔濾膜過濾除菌得到。3.根據權利要求1或2所述的用于重組人表皮生長因子發酵的培養基，其特征在于： 所述積雪草、金銀花的使用量，粉碎后的體積相當于蒸汽爆破罐體積的1/4-1/3。
【專利摘要】本發明公開了用于重組人表皮生長因子發酵的培養基，該培養基由以下重量比例成分制成：甘油5.0-7.0％、酵母堿基(YNB)3.0-3.5％、微量金屬離子1.8-2.2％、生物素0.5-1.0％、促進劑0.5-1.0％、水余量；所述微量金屬離子為三氯化鐵、氯化鈣、鉬酸鈉、氯化鋅、硫酸銅、硼酸、硫酸鋁中的一種；用磷酸鹽緩沖液調pH為5.5-6.5。本發明使用的植物原料成分經過了蒸汽爆破、蒸餾、高剪切均質機處理，得到納米乳狀的植物油性成分，和培養基中其他配方的相容性好。本發明通過在培養基中添加植物原料成分作為促進劑，和現有技術相比，發酵液的產量會提高30-38％。
【IPC分類】C12P21/02
【公開號】CN105296572
【申請號】CN201510837150
【發明人】韋忠明, 黃啟斌, 莫冬海, 馬沖, 包能創, 唐申秀
【申請人】桂林華諾威基因藥業有限公司
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年11月26日