一種抗腫瘤生物多糖的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及多糖制備領域，具體涉及一種抗腫瘤生物多糖的制備方法。
【背景技術】
[0002]糖類是生物體內除蛋白質和核酸以外的一類重要生物分子，尤其是一類重要的信息分子，具有多種多樣的生物功能。其中，多糖是自然界中儲量豐富的生物聚合物，它是由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接在一起的多聚物，廣泛存在于動物細胞膜、植物和微生物細胞壁中。目前已發現的活性多糖有幾百種，有真菌多糖、高等植物多糖、藻類地衣多糖、動物多糖、細菌多糖。多糖具有能量儲存、結構支持、防御作用和抗原決定性等多方面的生物功能。
[0003]植物多糖，尤其是從中藥中提取的水溶性多糖尤為重要，已發現有多種中藥中的多糖類化合物具有豐富多彩的生物活性，如抗腫瘤、免疫調節、降血糖、抗病毒、降血脂、抗凝血以及促進傷口愈合等活性，這類多糖沒有細胞毒性，而且藥物質量通過化學手段容易控制，已經成為當今新藥的發展方向之一。
【發明內容】
[0004]為解決上述問題，本發明提供了一種抗腫瘤生物多糖的制備方法，工藝簡單，可提高多糖的提取率及其多糖含量，具有條件溫和、雜質易除和得率高等優點，所得多糖具有提高免疫力，抗疲勞、抗腫瘤等多種功效，適用于腫瘤患者。
[0005]為實現上述目的，本發明采取的技術方案為:
[0006]—種抗腫瘤生物多糖的制備方法，包括如下步驟:
[0007]S1、取干燥樹酶10?20份、鎖陽15?20份、金櫻子果實10?20份，送入超聲破碎器經超聲破碎處理，得粉體；
[0008]S2、將所得的粉體脫脂處理后，置于高壓釜中，加入粉體2?3倍的水，通入氮氣至高壓爸內壓力為0.7?1.5MPa，處理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至高壓爸內壓力為1.5?2.5Mpa，浸提1?1.5h，得提取液；
[0009]S3、將所得提取液過濾，濃縮，加入無水乙醇進行沉淀處理后，干燥，得粗多糖；
[0010]S4、將所得的粗多糖溶于0.2?0.3mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纖維素52靜態吸附30?40min，沖洗DEAE-纖維素52，過濾洗脫液，收集濾液，得脫色后的粗多糖溶液；
[0011]S5、將所得的脫色后的粗多糖溶液置于酶解罐內，按320?370克/噸的比例加入復合酶解液，30?35°C，酶解1?2小時，每半小時攪拌、充氧一次，控制PH值在3.5?6.2之間；
[0012]S6、酶解結束后，將酶解液升溫至85?100 °C，滅酶30?40分鐘；
[0013]S7、滅活完成后冷卻至室溫，過濾，濃縮后，真空干燥或低溫冷凍干燥，水分控制在7 %以下，得抗腫瘤生物多糖。
[0014]優選地，所述步驟S1所得的粉體粒度小于3 μ m0
[0015]優選地，所述復合酶解液包含以下重量份的組分:
[0016]纖維素酶3?5份、果膠酶3?6份、葡萄糖淀粉酶4?7份、木聚糖酶3?5份、漆酶3?5份、溶菌酶3?5份、中性蛋白酶3?5份、風味蛋白酶2?5份、木瓜蛋白酶2?5、原生質液10?15份、含微量元素的無機鹽3?5份、羧甲基茯苓多糖3?4份。
[0017]優選地，原生質液由山竹果汁、魚油和酪蛋白水解肽按質量比1: 2: 3混合所得。
[0018]優選地，所述的含微量元素的無機鹽包含1 %的Κ2ΗΡ04，1 %的ΚΗ2Ρ04，0.5%的
(NH4)2S04O
[0019]本發明具有以下有益效果:
[0020]工藝簡單，可提高多糖的提取率及其多糖含量，具有條件溫和、雜質易除和得率高等優點，所得多糖具有提高免疫力，抗疲勞、抗腫瘤等多種功效，適用于腫瘤患者。
【具體實施方式】
[0021]為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0022]以下實施例中，所使用的復合酶解液包含以下重量份的組分:
[0023]纖維素酶3?5份、果膠酶3?6份、葡萄糖淀粉酶4?7份、木聚糖酶3?5份、漆酶3?5份、溶菌酶3?5份、中性蛋白酶3?5份、風味蛋白酶2?5份、木瓜蛋白酶2?5、原生質液10?15份、含微量元素的無機鹽3?5份、羧甲基茯苓多糖3?4份，原生質液由山竹果汁、魚油和酪蛋白水解肽按質量比1: 2: 3混合所得，所述的含微量元素的無機鹽包含 1 % 的 Κ2ΗΡ04，1 % 的 ΚΗ2Ρ04，0.5 % 的(NH4) 2S04。
[0024]實施例1
[0025]S1、取干燥樹酶10份、鎖陽15份、金櫻子果實10份，送入超聲破碎器經超聲破碎處理，得粉體，所得的粉體粒度小于3 μ m ;
[0026]S2、將所得的粉體脫脂處理后，置于高壓釜中，加入粉體2倍的水，通入氮氣至高壓釜內壓力為0.7MPa，處理25min ;然后迅速通入蒸汽至高壓釜內壓力為1.5Mpa，浸提
1.5h，得提取液；
[0027]S3、將所得提取液過濾，濃縮，加入無水乙醇進行沉淀處理后，干燥，得粗多糖；
[0028]S4、將所得的粗多糖溶于0.2mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纖維素52靜態吸附30min，沖洗DEAE-纖維素52，過濾洗脫液，收集濾液，得脫色后的粗多糖溶液；
[0029]S5、將所得的脫色后的粗多糖溶液置于酶解罐內，按320克/噸的比例加入復合酶解液，30°C，酶解2小時，每半小時攪拌、充氧一次，控制PH值在3.5 ;
[0030]S6、酶解結束后，將酶解液升溫至85 °C，滅酶40分鐘；
[0031]S7、滅活完成后冷卻至室溫，過濾，濃縮后，真空干燥或低溫冷凍干燥，水分控制在7 %以下，得抗腫瘤生物多糖。
[0032]實施例2
[0033]S1、取干燥樹酶20份、鎖陽20份、金櫻子果實20份，送入超聲破碎器經超聲破碎處理，得粉體，所得的粉體粒度小于3 μ m ;
[0034]S2、將所得的粉體脫脂處理后，置于高壓釜中，加入粉體3倍的水，通入氮氣至高壓爸內壓力為1.5MPa，處理8min ;然后迅速通入蒸汽至高壓爸內壓力為2.5Mpa，浸提lh，得提取液；
[0035]S3、將所得提取液過濾，濃縮，加入無水乙醇進行沉淀處理后，干燥，得粗多糖；
[0036]S4、將所得的粗多糖溶于0.3mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纖維素52靜態吸附40min，沖洗DEAE-纖維素52，過濾洗脫液，收集濾液，得脫色后的粗多糖溶液；
[0037]S5、將所得的脫色后的粗多糖溶液置于酶解罐內，按370克/噸的比例加入復合酶解液，35°C，酶解1小時，每半小時攪拌、充氧一次，控制PH值在6.2 ;
[0038]S6、酶解結束后，將酶解液升溫至100°C，滅酶30分鐘；
[0039]S7、滅活完成后冷卻至室溫，過濾，濃縮后，真空干燥或低溫冷凍干燥，水分控制在7 %以下，得抗腫瘤生物多糖。
[0040]實施例3
[0041]S1、取干燥樹酶15份、鎖陽17.5份、金櫻子果實15份，送入超聲破碎器經超聲破碎處理，得粉體，所得的粉體粒度小于3 μ m ;
[0042]S2、將所得的粉體脫脂處理后，置于高壓釜中，加入粉體2?3倍的水，通入氮氣至高壓釜內壓力為1.1MPa，處理16.5min ;然后迅速通入蒸汽至高壓釜內壓力為2Mpa，浸提1.25h，得提取液；
[0043]S3、將所得提取液過濾，濃縮，加入無水乙醇進行沉淀處理后，干燥，得粗多糖；
[0044]S4、將所得的粗多糖溶于0.25mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纖維素52靜態吸附35min，沖洗DEAE-纖維素52，過濾洗脫液，收集濾液，得脫色后的粗多糖溶液；
[0045]S5、將所得的脫色后的粗多糖溶液置于酶解罐內，按345克/噸的比例加入復合酶解液，32.5°C，酶解1.5小時，每半小時攪拌、充氧一次，控制PH值在4.85之間；
[0046]S6、酶解結束后，將酶解液升溫至92.5 °C，滅酶35分鐘；
[0047]S7、滅活完成后冷卻至室溫，過濾，濃縮后，真空干燥或低溫冷凍干燥，水分控制在7%以下，得抗腫瘤生物多糖.
[0048]以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以作出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。
【主權項】
1.一種抗腫瘤生物多糖的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 51、取干燥樹酶10?20份、鎖陽15?20份、金櫻子果實10?20份，送入超聲破碎器經超聲破碎處理，得粉體； 52、將所得的粉體脫脂處理后，置于高壓釜中，加入粉體2?3倍的水，通入氮氣至高壓爸內壓力為0.7?1.5MPa，處理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至高壓爸內壓力為1.5?2.5Mpa，浸提I?1.5h，得提取液； 53、將所得提取液過濾，濃縮，加入無水乙醇進行沉淀處理后，干燥，得粗多糖； 54、將所得的粗多糖溶于0.2?0.3mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纖維素52靜態吸附30?40min，沖洗DEAE-纖維素52，過濾洗脫液，收集濾液，得脫色后的粗多糖溶液； 55、將所得的脫色后的粗多糖溶液置于酶解罐內，按320?370克/噸的比例加入復合酶解液，30?35°C，酶解I?2小時，每半小時攪拌、充氧一次，控制PH值在3.5?6.2之間； 56、酶解結束后，將酶解液升溫至85?100°C，滅酶30?40分鐘； 57、滅活完成后冷卻至室溫，過濾，濃縮后，真空干燥或低溫冷凍干燥，水分控制在7%以下，得抗腫瘤生物多糖。2.根據權利要求1所述的一種抗腫瘤生物多糖的制備方法，其特征在于，所述步驟SI所得的粉體粒度小于3 μ m。3.根據權利要求1所述的一種抗腫瘤生物多糖的制備方法，其特征在于，所述復合酶解液包含以下重量份的組分: 纖維素酶3?5份、果膠酶3?6份、葡萄糖淀粉酶4?7份、木聚糖酶3?5份、漆酶3?5份、溶菌酶3?5份、中性蛋白酶3?5份、風味蛋白酶2?5份、木瓜蛋白酶2?5、原生質液10?15份、含微量元素的無機鹽3?5份、羧甲基茯苓多糖3?4份。4.根據權利要求1所述的一種抗腫瘤生物多糖的制備方法，其特征在于，原生質液由山竹果汁、魚油和酪蛋白水解肽按質量比1: 2: 3混合所得。5.根據權利要求1所述的一種抗腫瘤生物多糖的制備方法，其特征在于，所述的含微量元素的無機鹽包含I %的K2HPO4,1 %的KH2PO4,0.5 %的(NH4) 2S04。
【專利摘要】本發明公開了一種抗腫瘤生物多糖的制備方法，包括如下步驟：將干燥樹酶、鎖陽、金櫻子果實超聲破碎處理后，置于高壓釜中浸提，將所得提取液過濾，濃縮，沉淀處理，干燥，脫色處理后置于酶解罐內進行酶解，酶解結束后，滅酶，冷卻至室溫，過濾，濃縮后，真空干燥或低溫冷凍干燥，得抗腫瘤生物多糖。本發明工藝簡單，可提高多糖的提取率及其多糖含量，具有條件溫和、雜質易除和得率高等優點，所得多糖具有提高免疫力，抗疲勞、抗腫瘤等多種功效，適用于腫瘤患者。
【IPC分類】A61P37/04, C08B37/00, A61P35/00
【公開號】CN105254773
【申請號】CN201510726431
【發明人】岳麗玲
【申請人】齊齊哈爾醫學院
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年10月27日