一種山楂葉提取原花青素的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于天然產物加工科學領域，特別是一種山楂葉提取原花青素的制備方法。
【背景技術】
[0002]原花青素(Procyanidins，簡稱0PC)又被稱為低聚黃燒酮類，是一種新型高效抗氧化劑，是目前為止所發現的最強效的自由基清除劑，具有非常強的體內活性。實驗證明，OPC的抗自由基氧化能力是維生素E的50倍，維生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分鐘即可達到最高血液濃度，代謝半衰期達7小時之久。
[0003]原花青素是自然界酚類化合物中最豐富的種類，原花青素因在酸介質下發生典型氧化降解反應產生有色的花青素而得名。在各類原花青素中二聚體是分布最廣、研究最多的一類原花青素。國內外已經報道了很多關于原花青素的藥理學作用，例如清除自由基、強抗氧化性、抗腫瘤以及抗動脈硬化等功能；原花青素也已經用來防止糖尿病患者白內障手術后的并發癥；此外原花青素在植物防御捕食者和微生物機理方面也起到了重要作用。鑒于原花青素具有如此廣泛的作用，其提取方法也受到了國內外研究人員的極大關注。
[0004]山楂葉為薔薇科山楂屬植物山楂的葉子，其主要活性成分為黃酮類化合物。現代藥理學研究證明，山楂葉總黃酮在降血壓、調血脂和增大心臟血流量等方面療效顯著。近年來，人們對山楂葉黃酮的抗氧化活性也有了較深入的研究，研究表明:山楂葉含有抗氧化物質，其乙酸乙酯提取物抗氧化效果最好，檸檬酸對它有較好的增效作用。鑒于山楂葉黃酮具有良好的抗氧化活性，國外有學者已經對山楂花和葉中低聚原花青素進行分離鑒定，而目前國內有關山楂葉原花青素的研究報道鮮見報道。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是克服現有提取方法的不足，提出一種山楂葉提取原花青素的制備方法。此方法所得到的原花青素產品可用于醫藥保健及化妝品等行業。
[0006]本發明的一種山楂葉提取原花青素的制備方法，原料為山楂葉，試劑有果膠酶(30000IU)，纖維素酶(I5000IU)，95%乙醇(食品級)，檸檬酸(食品級)，磷酸氫二鈉(食品級)。
[0007]本發明的一種山楂葉提取原花青素的制備方法，由以下步驟組成:
(1)備料:將山楂葉進行恒溫減壓干燥，粉碎稱量后，40目過篩，得到原料干粉備用；
(2)配制緩沖溶液:將0.lmol/L檸檬酸溶液與0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液按1:1.5?2的體積比混合，再加水稀釋2倍，配制成緩沖溶液:
(3)配制酶液:混合緩沖溶液、果膠酶和纖維素酶，并充分攪拌使其完全溶解，從而形成均勻的酶液；緩沖溶液的用量按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例計算果膠酶和纖維素酶的用量為每L的緩沖溶液加入0.1?O: 3g果膠酶與0.1?0.3g纖維素酶； (4)投料:按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例，將原料干粉加入酶液中；
(5)酶解:將原料干粉與酶液攪拌均勻后，在50?55°C的恒溫水浴鍋內避光保溫，每30min攪動一次，酶解3-4h，生成酶解液和殘渣的混合物；
(6)提取:按每kg原料干粉加入15?30L的75?95%乙醇的方法，將75?95%乙醇加入上述酶解液和殘渣混合物中，在60?65°C條件下提取2?3h，經過濾，得到提取液；
(7)成品:置提取液于60?70°C的烘箱中烘至恒重，得到原花青素。
[0008]本發明的一種山楂葉提取原花青素的制備方法，以山楂葉為主要原料，采用酶制劑結合溶劑提取原花青素，其優點是原青花素產品安全性好、質量佳，原青花素提取率較醇提取法高30?40%，酶制劑的用量少，而且工藝簡單，操作方便，效率高，適合工業化生產。使用果膠酶和纖維素酶可以破壞植物原料中以纖維素為主的細胞壁結構及其細胞間相連的果膠物質，使提取傳質阻力減小，使內容物原青花素成分易于溶出。乙醇溶液作為醇溶性原青花素的提取溶劑。檸檬酸?磷酸緩沖溶液起到調節溶液PH值的作用。按本發明的方法配制的緩沖溶液，經檢測其pH=6，可以保證酶制劑作用的最佳效果。
[0009]具體實施例:為了充分公開本發明的一種山楂葉提取原花青素的制備方法，下面結合實施例加以說明。
[0010]實施例:一種山楂葉提取原花青素的制備方法，其方法包括以下步驟:
(I)置新鮮的山楂葉于65°C烘箱中烘干，用高速組織搗碎機粉碎，40日過篩，得到原料干粉備用。
[0011](2)取0.lmol/L檸檬酸溶液160ml，0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液320ml，混合并稀釋定容至1000ml，配制成緩沖溶液。
[0012](3)取250ml的緩沖溶液，加入0.05g果膠酶與0.075g纖維素酶，攪拌使其完全溶解，形成均勻的酶液。
[0013](4)在上述的酶液中加入1g的原料干粉。
[0014](5)攪拌均勻后于50°C的恒溫水浴鍋內避光保溫，每30min攪動一次，酶解3h，生成酶解液和殘渣的混合物。
[0015](6)在酶解液和殘渣的混合物中加入250ml95%乙醇，于60°C條件下提取2h，經過濾得提取液。
[0016](7)置提取液于65°C的烘箱中烘至恒重，得到原花青素。
【主權項】
1.一種山楂葉提取原花青素的制備方法，其特征在于由以下步驟組成: (1)備料:將山楂葉進行恒溫減壓干燥，粉碎稱量后，40目過篩，得到原料干粉備用； (2)配制緩沖溶液:將0.lmol/L檸檬酸溶液與0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液按1:1.5?2的體積比混合，再加水稀釋2倍，配制成緩沖溶液； (3)配制酶液:混合緩沖溶液、果膠酶和纖維素酶，并充分攪拌使其完全溶解，從而形成均勻的酶液；緩沖溶液的用量按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例計算果膠酶和纖維素酶的用量為每L的緩沖溶液加入0.1?O: 3g果膠酶與0.1?0.3g纖維素酶； (4)投料:按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例，將原料干粉加入酶液中； (5)酶解:將原料干粉與酶液攪拌均勻后，在50?55°C的恒溫水浴鍋內避光保溫，每30min攪動一次，酶解3-4h，生成酶解液和殘渣的混合物； (6)提取:按每kg原料干粉加入15?30L的75?95%乙醇的方法，將75?95%乙醇加入上述酶解液和殘渣混合物中，在60?65°C條件下提取2?3h，經過濾，得到提取液； (7)成品:置提取液于60?70°C的烘箱中烘至恒重。2.根據權利要求1所述的一種山楂葉提取原花青素的制備方法，其特征在于由以下步驟組 成: (1)置新鮮的山楂葉于65°C烘箱中烘干，用高速組織搗碎機粉碎，40目過篩，得到原料干粉備用； (2)取0.lmol/L檸檬酸溶液160ml，0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液320ml，混合并稀釋定容至1000ml，配制成緩沖溶液； (3)取250ml的緩沖溶液，加入0.05g果膠酶與0.075g纖維素酶，攪拌使其完全溶解，形成均勻的酶液； (4)在上述的酶液中加入1g的原料干粉； (5)攪拌均勻后于50°C的恒溫水浴鍋內避光保溫，每30min攪動一次，酶解3h，生成酶解液和殘渣的混合物； (6)在酶解液和殘渣的混合物中加入250ml95%乙醇，于60°C條件下提取2h，經過濾得提取液； (7)置提取液于65°C的烘箱中烘至恒重。
【專利摘要】一種山楂葉提取原花青素的制備方法，以山楂葉為主要原料，采用酶制劑結合溶劑提取原花青素。制備方法包括以下步驟：備料、配制緩沖溶濃、配制酶液、投料、酶解、提取和成品。利用本發明的方法制備的原花青素，產品安全性好、質量佳，酶制劑的用量少，原花青素提取率較醇提取法高30-40%，而且工藝簡單，操作方便，效率高，適合工業化生產。
【IPC分類】C07D311/62
【公開號】CN105198853
【申請號】CN201510667679
【發明人】鄧小玲, 潘關榮, 寧發子
【申請人】重慶都好生物科技有限公司
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年10月16日