用電刺激活體水蛭提取水蛭素的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種通過弱直流電刺激活體水蛭，使水蛭頭部腺體釋放腺液，同時通過控制電流的強度，確保水蛭保持活體狀態，從而實現在有限的水蛭活體資源條件下，多次從活體水蛭的腺液中獲得高純度水蛭素的方法。
【背景技術】
[0002]水蛭素(hirudin)因最早從水蛭中分離得到而得名。天然水蛭素由65個氨基酸殘基組成，分子量7000道爾頓，屬水溶性動物蛋白肽。水蛭素具有使凝血酶失活的功能，功能機理是它通過與凝血酶的催化中心及纖維蛋白原結合中心發生不可逆的結合，從而達到凝血酶不能實現凝血功能。水蛭素是目前發現的、源于動物的最強有力的凝血酶抑制劑。水蛭素通過對凝血酶的失活作用，從而在人體內實現了很強的抗血栓作用，對多種實驗性血栓模型有阻抑作用。水蛭素對于各種血栓疾病如靜脈血栓、彌散性血管內凝血、腦凝血、血栓靜脈炎及冠狀動脈血栓都有預防和治療效果，尤其是靜脈血栓和彌漫性血管內凝血的治療；也可用于外科手術后預防動脈血栓的形成，預防溶解血栓后或血管成形術后再栓塞；改善體外血液循環和血液透析過程，在顯微外科手術中常因為吻合處血管栓塞而導致失敗，采用水蛭素可促進傷口愈合。所以基于上述功效，人類出于對疾病的治療和健康保健的需要，對水蛭素產生了巨大的需求。
[0003]工業化生產水蛭素的方法中除重組水蛭素的生產外，多以對水蛭活體的破壞方法獲得水蛭素，一方面影響所得水蛭素的純度，更重要的是水蛭資源的供應的嚴重依賴。在動物生理方面，弱直流電流對生物體腺體的是有刺激影響作用，可以使生物腺體產生應激反應。在水蛭素的提取上，直接使用直流弱電刺激活體水蛭，使其唾液腺體應激分泌富含水蛭素的唾液，以實現批量提取高純度水蛭素的方式并通過對電流的控制保持水蛭的活體性狀的方法，簡化了水蛭素的生產工藝，提高產品純度，保持野生水蛭資源的重復利用，降低生產成本，克服生產的季節性障礙問題的方法，至今尚未有成功實現的報道。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于提供一種用電刺激活體水蛭提取水蛭素的方法，它能解決上述水蛭素提取存在的實際問題，具有很強的針對性。
[0005]為了達到上述目的，本發明采取以下步驟:
[0006]步驟1，提取分泌物:通過弱直流電刺激活體水蛭，以獲得在電流刺激下水蛭唾液腺體應激產生的分泌物；
[0007]步驟2，配制保護劑:添加0.005?0.05%海藻糖、0.005?0.02%乙酰半膀氨酸，0.005?0.05%枸杞酸鈉為組合保護劑以保持水蛭分泌物中所含抗凝血酶的高活性；
[0008]步驟3，分泌物處理:將分泌物經過800 μ m納濾膜后續處理30?180分鐘，除去水分及鹽，添加I?15%醫用淀粉；
[0009]步驟4，干燥:減壓至0.9大氣壓下，在進口溫度為230?180°C，出口溫度90?75°C下進行噴霧干燥，獲得含800AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉；
[0010]上述所得的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉用于預防和治療脈血栓、彌散性血管內凝血、腦凝血、血栓靜脈炎及冠狀動脈血栓等疾病。
[0011]優選的，步驟I中，采用直電流為3?12mA，進行電刺激活體水蛭5?20分鐘后，獲得在電流刺激下水蛭產生的分泌物
[0012]本發明具有以下有益效果:本發明簡化了水蛭素的生產工藝，提高產品純度，保持野生水蛭資源的重復利用，降低生產成本，克服生產的季節性障礙問題的方法。另外本產品中水輕素中抗凝血酶的活性含量達到800 (干粉)或1000 (液體)AT-U/g。
【具體實施方式】
[0013]下面對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0014]實施例1:
[0015]在I?30度室溫，先將活體水蛭從飼養槽中取至貯藏槽，用去離子水漂洗20分鐘出去活體水蛭表面的雜質，濾出水分，再浸入生理鹽水漂洗20秒，使水蛭表面覆蓋電解質，濾除鹽水，置入底200目濾網的長方形不銹鋼濾槽內(濾槽與地面絕緣)平鋪，濾網下為同面積已消毒潔凈器皿，濾槽兩端分別連接直流電的兩極，調整至最小的輸出電流，合并電源開關，調整電流為I?20mA，5?30分鐘后，斷開電源，收取器皿中濾槽滴出的液體，后將水蛭從濾槽中倒回貯藏槽，再倒回飼養槽。
[0016]器皿中濾槽滴出的液體大部分為水蛭素有效成分，經過800 μm納濾膜后續處理30?180分鐘可以除90%水，后通過添加1%?15%的醫用淀粉，減壓至0.2?0.9大氣壓噴霧干燥100?180度下獲得含高活性(800?200AT-U/g)抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0017]實施例2
[0018]在I?30度室溫，先將活體水蛭從飼養槽中取至貯藏槽，用去離子水漂洗2分鐘出去活體水蛭表面的雜質，濾出水分，再浸入生理鹽水漂洗20秒，置入底不銹鋼網的吊籃內，浸入裝有0.5?1%濃度的鹽水槽中，鹽水槽內通入直流電，使得槽中鹽水處于帶電狀態，調整至最小的輸出電流，合并電源開關，調整電流為I?20mA，5?30分鐘后，移出，后將水蛭從銹鋼網的吊籃內倒回貯藏槽，再倒回飼養槽，同時重復將新裝活體水蛭的另個銹鋼網的吊籃浸入鹽水槽中，實現活體水蛭提取水蛭素的連續生產。
[0019]鹽水槽中滴出的液體大部分為水蛭素有效成分和鹽水溶液混合物，經過800 μ m納濾膜后續處理30?180分鐘可以除90%水和鹽，后通過添加0.005?0.05%海藻糖、0.005?0.02%乙酰半膀氨酸，0.005?0.05%枸杞酸鈉配制的混合穩定劑，制成含500?1000AT-U/g抗凝血酶活性水蛭素含水混合物。可直接常溫貯藏也可以通過噴霧干燥得到水蛭素干粉。
[0020]實施例3
[0021]在I?30度室溫，先將活體水蛭從飼養槽中取至貯藏槽，用去離子水漂洗2分鐘出去活體水蛭表面的雜質，濾出水分，置入50?200升塑料桶中，再倒入0.5?1%濃度的鹽水，鹽水的量為水蛭量的體積與鹽水體積比為1:0.5?1.5，塑料桶內底部放置金屬電極，塑料桶頂端放置金屬電極到液面，分別連接直流電的兩極，調整至最小的輸出電流，合并電源開關，緩慢調整電流為I?20mA，5?30分鐘后，斷開電源，將水蛭從塑料桶中倒回貯藏槽，后將再倒回飼養槽。將塑料桶中的液體收集，這部分液體大部分為水蛭素有效成分和鹽水溶液混合物，經過800 μπι納濾膜后續處理30分鐘可以除90%水和鹽，后通過添加5%?11%的醫用淀粉，減壓至0.2?0.9大氣壓噴霧干燥100?180度下獲得含高活性(800?200AT-U/g)抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0022]以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種用電刺激活體水蛭提取水蛭素的方法，其特征在于該水蛭素活體水蛭通過電刺激提取，包括以下步驟: 步驟1，提取分泌物:通過弱直流電刺激活體水蛭，以獲得在電流刺激下水蛭唾液腺體應激產生的分泌物； 步驟2，配制保護劑:添加0.005?0.05%海藻糖、0.005?0.02%乙酰半膀氨酸，0.005?0.05%枸杞酸鈉為組合保護劑以保持水蛭分泌物中所含抗凝血酶的高活性； 步驟3，分泌物處理:將分泌物經過800 μ m納濾膜后續處理30?180分鐘，除去水分及鹽，添加I?15%醫用淀粉； 步驟4，干燥:減壓至0.9大氣壓下，在進口溫度為230?180°C，出口溫度90?75°C下進行噴霧干燥，獲得含800AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉； 上述所得的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉用于預防和治療脈血栓、彌散性血管內凝血、腦凝血、血栓靜脈炎及冠狀動脈血栓等疾病。2.根據權利要求1所述的用電刺激活體水蛭提取水蛭素的方法，其特征在于:步驟I中，采用直電流為3?12mA，進行電刺激活體水蛭5?20分鐘后，獲得在電流刺激下水蛭產生的分泌物。
【專利摘要】本發明公開一種用電刺激活體水蛭提取水蛭素的方法，其步驟如下：該提取的方法通過提取分泌物、配制保護劑、分泌物處理和干燥四個步驟，所得到的干粉，它保存了活體水蛭最主要的有效活性成分——水蛭素，可以用于預防和治療脈血栓、彌散性血管內凝血、腦凝血、血栓靜脈炎及冠狀動脈血栓等疾病。本發明能夠簡化水蛭素的生產工藝，同時保持水蛭的活體，多次提取高純度水蛭素。
【IPC分類】C07K1/14, C07K14/815
【公開號】CN105153298
【申請號】CN201510542685
【發明人】蘇國強, 刁建中
【申請人】南寧市金貝生物技術有限責任公司
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年8月31日