一種同時制備葡糖乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6’-o-反式桂皮酰梓醇的工藝方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種同時制備葡糖乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰 梓醇的工藝方法，屬于醫藥技術領域或藥物化學領域。
【背景技術】
[0002] 天然植物藥胡黃連，主產于喜馬拉雅山脈，是中國、印度、尼泊爾等國的傳統醫藥， 在印度傳統醫學中用于治療肝、肺系疾病，在中國傳統醫學中用于除胃腸濕熱，治濕熱瀉 痢。近代英國、美國、印度、中國的很多研究者研究證實胡黃連的主要藥理作用有抗乙肝病 毒、肝臟保護、利膽、降血脂、降血壓、降糖、抗炎、抗真菌、抗哮喘等作用。胡黃連中被提取 分離出多種化合物：環烯醚萜類化合物，主要有10-香莢酰梓醇(又名胡黃連苷II，英文名 PicrosideII)、6'-〇-反式桂皮酰梓醇(又名胡黃連苷I，英文名PicrosideI)等；苯乙 酮類化合物，主要有葡糖乙酰香草苷(又名草夾竹桃苷，英文名androsin)等；萌蘆素類化 合物；苯乙基苷類化合物；丹寧類化合物等。葡糖乙酰香草苷具有抗哮喘、抗炎、抗氧化作 用，還可用于治療敗血癥和動脈硬化；10-香莢酰梓醇具有高效的保肝利膽、抗過敏功效； 6' -0-反式桂皮酰梓醇具有抗糖尿病、調節血脂的作用。
[0003] 經檢索有相關化合物的制備專利，如一種胡黃連苷I的制備方法(專利號： 200710164321. 5)，胡黃連普II單體的制備方法及其治療乙型肝炎的藥物劑型（專利號： 200410096006.X)，一種從胡黃連中提取分離純化胡黃連苷I和胡黃連苷II的制備工藝 (專利號=201310618996. 8)，一種草夾竹桃苷的提純工藝（專利號：201310373779. 7)，一種 制備高純度6' -0-反式桂皮酰梓醇的方法(專利號=201510224528. 1)，高純度6' -0-反 式桂皮酰梓醇的工業化制備（專利號=201510140963.6)。然而未見一套工藝同時制備葡糖 乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6'-0-反式桂皮酰梓醇3種藥用單體物質的專利，本發明可 實現一套工藝同時制備3種藥用單體，原材料綜合利用，且工藝簡潔，能夠節約成本，保護 環境，提高效率，可滿足工業化大規模生產。
【發明內容】
[0004] 制備提取液： 胡黃連藥材粉碎過30目篩，加8- 15倍乙醇加熱回流提取。所用乙醇為75% - 95%之 間，分2次或3次回流，總共回流3- 5小時。提取液回收乙醇濃縮，濃縮后體積約為提取液 體積的1/8 -1/12。加入一定量水，置于低溫條件下冷沉。水體積約為濃縮液體積的5 -16 倍，低溫條件溫度為〇- 7 °C，冷沉時間多8小時。
[0005] 吸附過濾柱： 前述冷沉后的提取液，通過硅膠柱吸附過濾柱。硅膠粒徑100-400目。硅膠吸附過濾 柱主要起到過濾液體的作用，同時還能吸附雜質。硅膠用量不拘。
[0006] 大孔吸附柱： 將過濾后的液體上大孔樹脂柱，水一醇梯度洗脫，分別收集葡糖乙酰香草苷、10-香莢 酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇集中的部分。葡糖乙酰香草苷集中部分揮干乙醇，濃縮成 一定濃度的熱水溶液，放冷析出后過濾，得純度> 95%的葡糖乙酰香草苷。熱水溶液的濃度 約為 8% - 20%。
[0007] 硅膠層析柱： 將10-香莢酰梓醇與6'-0_反式桂皮酰梓醇集中部分拌樣后分別進行硅膠柱層析。拌 樣硅膠與干浸膏的比例大于等于1:1 ;層析硅膠與干浸膏比例大于等于5:1 ;流動相為：石 油醚、環己烷、正戊烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中的一種或兩種按一定比例配合使用。往 復栗輸送液體，流動相流速：50-200ml/min，壓力：0. 3-3MPa。雙波長紫外檢測器檢測，檢 測波長設為：254與282。
[0008] 分別收集10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分回收流動相，10-香 莢酰梓醇以適量熱水一乙醇溶解，水一乙醇比例為0 :1-4:1，濃度約為8% - 20%，6'-0_反 式桂皮酰梓醇以適量熱水一乙醇溶解，水一乙醇比例為1:1 一 1: 0，濃度約為5% - 35%。低 溫條件下，析晶后過濾，得純度> 95%的10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇。
【附圖說明】 圖1是胡黃連提取液高效液相色譜圖； 圖2是制備所得葡糖乙酰香草苷高效液相色譜圖； 圖3是制備所得6' -0-反式桂皮酰梓醇高效液相色譜圖； 圖4是制備所得10-香莢酰梓醇高效液相色譜圖。
[0009] 具體實施例。
[0010] 實施例1。
[0011] 取粉碎且過30目篩的胡黃連藥材500g，加95%乙醇5000ml加熱回流提取5小時。 提取液回收乙醇濃縮，濃縮后體積約為提取液體積的1/8。加入濃縮液體積的10倍量水，置 于0- 7°C條件下冷沉，冷沉時間12小時。
[0012] 在層析色譜柱中裝入5cm厚的300- 400目硅膠(硅膠上下有慢速濾紙，下濾紙起 過濾作用，上濾紙防止提取液將硅膠沖散亂）作為硅膠吸附過濾柱，前述冷沉后的提取液， 通過硅膠吸附過濾柱，得5800ml濾液備用，取濾液高效液相色譜法測定，如附圖1所示。
[0013] 附高效液相色譜條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，4. 6mmX320mm;乙腈一水一乙 酸（25:75:0.5)為流動相；檢測波長為27511111(下同） 。
[0014] 實施例2。
[0015] 將實施例1中過濾后的液體2900ml上大孔樹脂柱，水一醇梯度洗脫，分別收集葡 糖乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇集中的部分。
[0016] 葡糖乙酰香草苷集中部分揮干乙醇，濃縮成濃度為12%的熱水溶液，放冷析出后 過濾，冷凍干燥，得純度為99. 4%的葡糖乙酰香草苷9. 31g，高效液相色譜圖如附圖2所示。
[0017] 實施例3。
[0018] 將實施例1中過濾后的液體2900ml上大孔樹脂柱，水一醇梯度洗脫，分別收集葡 糖乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇集中的部分。
[0019] 葡糖乙酰香草苷集中部分揮干乙醇，濃縮成濃度為20%的熱水溶液，放冷析出后 過濾，冷凍干燥，得純度為95. 7%的葡糖乙酰香草苷11. 30g。
[0020] 實施例4。
[0021] 將實施例2中所收集的10-香莢酰梓醇、6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分分別拌 樣后進行硅膠柱層析。拌樣硅膠與干浸膏的比例為1:1;層析硅膠與干浸膏比例為5:1;流 動相為：乙酸乙酯；往復栗流速：80ml/min;壓力：0? 7MPa。
[0022] 分別收集10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分回收流動相，10-香 莢酰梓醇以適量熱水一乙醇溶解，水一乙醇比例為10:1，濃度為10% ;6' -〇-反式桂皮酰梓 醇以適量熱水一乙醇溶解，水一乙醇比例為1:4,濃度約為8%。低溫條件下，析晶后過濾，冷 凍干燥。得純度99. 1%的6'-0_反式桂皮酰梓醇5. 55g，高效液相色譜圖如附圖3所示；得 純度99. 7%的10-香莢酰梓醇8g，高效液相色譜圖如附圖4所示。
[0023] 實施例5。
[0024] 將實施例3中所收集的10-香莢酰梓醇、6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分分別拌 樣后進行硅膠柱層析。拌樣硅膠與干浸膏的比例為2:1 ;層析硅膠與干浸膏比例為7:1 ;流 動相為：乙酸乙酯：石油醚=50:1 ;往復栗流速：120ml/min;壓力：0? 9MPa。
[0025]分別收集10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分回收流動相，10-香 莢酰梓醇以適量熱水一乙醇溶解，水一乙醇比例為99:1，濃度為20% ;6' -〇-反式桂皮酰 梓醇以適量熱水一乙醇溶解，水一乙醇比例為1:99,濃度約為30%。低溫條件下，析晶后過 濾，冷凍干燥。得純度96. 3%的6'-0-反式桂皮酰梓醇6. 08g，純度97%的10-香莢酰梓醇 10. 45g〇
【主權項】
1. 一種同時制備葡糖乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6' -O-反式桂皮酰梓醇的工藝方 法，其特征在于，具體方法如下： (1) .胡黃連藥材粉碎過30目篩，75% -95%乙醇分2次或3次加熱回流提取，提取液 濃縮，加入一定量水，低溫下冷沉，冷沉后，通過硅膠吸附過濾柱過濾，過濾后的液體上大孔 樹脂柱，水一醇梯度洗脫，分別收集葡糖乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰 梓醇集中的部分； (2) .葡糖乙酰香草苷集中部分揮干乙醇，濃縮成一定濃度的熱水溶液，放冷析出后過 濾，得純度> 95%的葡糖乙酰香草苷； (3) . 10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分拌樣后分別進行硅膠柱層析， 往復栗輸送流動相洗脫，以雙波長紫外檢測器檢測，分別收集10-香莢酰梓醇與6'-0_反式 桂皮酰梓醇集中部分，回收流動相，10-香莢酰梓醇以適量熱水一乙醇溶解，6' -0-反式桂 皮酰梓醇以適量熱水一乙醇溶解，放低溫下，析晶后過濾，得純度> 95%的10-香莢酰梓醇 與6' -〇-反式桂皮酰梓醇。2. 如權利要求1中所述，胡黃連藥材提取液濃縮，濃縮液體積約為提取液體積的1/8- 1/12,濃縮液加入一定量水，低溫下冷沉，膠柱吸附過濾柱過濾，加入水體積約為濃縮液體 積的5 -16倍，低溫條件溫度為0 - 7°C，冷沉時間多8小時，膠柱吸附過濾柱硅膠粒徑 100-400 目。3. 如權利要求1中所述，葡糖乙酰香草苷集中部分濃縮成一定濃度的熱水溶液，熱水 溶液的濃度約為8% - 20%。4. 如權利要求1中所述，10-香莢酰梓醇與6' -0-反式桂皮酰梓醇集中部分拌樣后分 別進行硅膠柱層析，流動相洗脫，拌樣硅膠與干浸膏的比例大于等于1:1 ;層析硅膠與干浸 膏比例大于等于5:1 ;流動相為：石油醚、環己烷、正戊烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇中的 一種或兩種按一定比例配合使用；流動相流速50-200ml/min，壓力0. 3 -3MPa ;檢測器波 長設為254nm與280nm。5. 如權利要求1中所述，10-香莢酰梓醇以適量熱水一乙醇溶解，水一乙醇比例為 0 :1-4:1，濃度約為8% - 20%，6'-0-反式桂皮酰梓醇以適量熱水一乙醇溶解，水一乙醇比 例為1:1一 1:①，濃度約為5% - 35%。
【專利摘要】本發明涉及一種同時制備葡糖乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6’-O-反式桂皮酰梓醇的工藝方法，以胡黃連藥材為原料，經過乙醇提取，純化精制，同時得到葡糖乙酰香草苷、10-香莢酰梓醇與6’-O-反式桂皮酰梓醇3種藥用單體化合物。本發明的工藝方法可實現一次工藝過程得到3種藥用單體化合物，工藝簡潔，生產成本低，適用于工業化大規模生產。
【IPC分類】C07H15/203, C07H17/04, C07H1/08
【公開號】CN105111257
【申請號】CN201510599363
【發明人】張志東, 劉培冉, 賀靈劍, 楊濤, 劉文卉, 孫士青
【申請人】濟南同生生物醫藥科技有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月19日