一種細胞揮發物收集培養器的制造方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種細胞培養器，特別涉及一種在非密閉環境下用于收集細胞揮發性生物標記物的細胞培養器。
【背景技術】
[0002]目前，腫瘤的診斷多需組織病理、穿刺活檢等有創檢查，但這些檢查時程較長，尤其是創傷性操作給患者帶來不便和痛苦。為此，亟待開發一種簡單、有效、經濟、方便、無創的診斷技術用于疾病的早期篩查和臨床診斷。近年來，人們在多種方面對實體瘤產生的揮發性有機化合物進行了研究，包括腫瘤患者的血液、尿液、呼出氣、腫瘤組織以及腫瘤細胞，試圖通過尋找揮發性標記物來作為疾病早期篩查和診斷的新方法。人體是一個包含多種臟器的復雜個體，有多種酶類及代謝系統參與機體的新陳代謝，及疾病的病理生理過程；且因受飲食等因素影響，研究人體體液及呼出氣的揮發性標記物相對較復雜。為此，在細胞水平上分析疾病的揮發性標記物將有助于進一步探究疾病產生的可能代謝機制。
[0003]目前，已有文獻公開了一種用于檢測細胞揮發性有機化合物的細胞培養及檢測裝置，應用玻璃培養瓶進行培養，但該裝置為密閉性的，此種密閉環境不利于細胞進行氣體交換，不能為細胞提供適宜的培養環境，易造成細胞的乏氧狀態，導致細胞凋亡影響細胞的正常代謝，此種環境下細胞揮發出的有機化合物很可能不是待檢測細胞正常條件下代謝產出的物質，不利于腫瘤標記物的確切分析，且其并未對此種培養環境下細胞的活性及狀態進行分析，故實驗結果的真實可靠性有待進一步考證。
[0004]另有文獻也公開了一種細胞培養裝置，用于檢測細胞的揮發性有機化合物，但該裝置構造復雜，其需與含有95% C02和5% 02的氣體罐直接相連，且需催化劑、碳氫化合物捕集器、熱分布式質量流量控制器、無菌濾器、水浴加熱電路、磁鐵、電子控制閥、稀釋管路等多種配件，故操作相對繁瑣，費用也相對較高。
【發明內容】
[0005]為解決上述技術問題，本發明的目的在于:提供一種細胞揮發物收集培養器，該培養器為簡易的、非密閉性的裝置，不僅保證了燒杯內外細胞的氣體交換，而且對細胞活性影響較小，使收集到的細胞揮發物更有研究意義，因此更有利于探究疾病的代謝機制，利于腫瘤等疾病的初步篩查和早期診斷。
[0006]為實現上述目的，本發明所采用的技術方案是:一種細胞揮發物收集培養器，其包括:
[0007]—培養皿，該培養皿內部盛裝有待檢測液體；
[0008]—長彎管和一短彎管，該長彎管和短彎管的內端均置于該培養皿中；
[0009]—燒杯，該燒杯倒扣于該培養皿的液體中且包圍該長彎管和短彎管的內端，其中，該長彎管的內端位于該燒杯的頂部且高于該液體表面，該短彎管的內端位于該燒杯的底部且低于該液體表面；
[0010]—結晶皿，該結晶皿罩扣在該燒杯上，該長彎管和短彎管的外端均彎曲伸出于該結晶皿的外部。
[0011]所述的細胞揮發物收集培養器，該結晶皿容器底部的開口低于該培養皿上部的開
□ O
[0012]所述的細胞揮發物收集培養器，該燒杯倒扣后的燒杯內的液面與該培養皿中的液面保持平齊。
[0013]所述的細胞揮發物收集培養器，該待檢測液體為待檢測細胞及培養基。
[0014]所述的細胞揮發物收集培養器，該長彎管的外端通過一硅膠管連接一收集器，該收集器與該硅膠管連接處設有一旋鈕，用于氣體收集和維持燒杯內外的壓力平衡。
[0015]所述的細胞揮發物收集培養器，該硅膠管長3cm，該收集器為0.5L的氣體采集袋。
[0016]所述的細胞揮發物收集培養器，該培養皿的規格為90mm，該燒杯的規格為250mL，該結晶皿的規格為125mm。
[0017]所述的細胞揮發物收集培養器，該燒杯的直徑小于培養皿的直徑。
[0018]所述的細胞揮發物收集培養器，該燒杯的高度高于該培養皿的高度。
[0019]所述的細胞揮發物收集培養器，該結晶皿的直徑大于該培養皿的直徑。
[0020]與現有技術相比，采用上述技術方案的本發明的優點在于:本發明克服了現有技術中細胞培養的密閉環境及操作復雜、配件冗余等缺點，提供了一種簡易的、非密閉性的、費用低廉的裝置，保證了燒杯內外細胞的氣體交換，為細胞提供了相對正常的培養環境，通過流式細胞儀檢測細胞的凋亡，結果顯示細胞于此裝置中培養24小時后活性可達92.18%
±1.26%o
【附圖說明】
[0021]圖1為本發明結構示意圖。
[0022]附圖標記說明:1_培養皿；2_待測液體；3_長彎管；4_短彎管；5_燒杯；6_結晶皿；7_硅膠管；8_收集器；81_旋鈕。
【具體實施方式】
[0023]下面結合具體實施例和附圖來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。
[0024]如圖1所示，為本發明的細胞揮發物收集培養器的立體組裝示意圖，其包括:
[0025]—培養皿1，該培養皿I內部盛裝有待檢測液體2 ;其中，在本發明的實施案例中，待檢測液體2包含待檢測細胞及培養基，也可因實驗設計需要加入相應的藥物，該培養皿I的規格為90mm，在該培養皿I內放入一長彎管3和一短彎管4，該長彎管3和短彎管4的內端均置于該培養皿I中。
[0026]再拿一規格為250ml的燒杯5倒扣于該培養皿I的液體2中，該燒杯5內的液面與該培養皿I中的液面要確保平齊。其中，該燒杯5的直徑要小于該培養皿I的直徑，但同時該燒杯5要將該長彎管3和短彎管4的內端均包圍在內，該長彎管3的內端在該燒杯5的底部環繞彎曲，并在彎曲后使其底部高于該液體2表面且一直伸長至該燒杯5的頂部，長彎管3用于收集燒杯內細胞產生的氣體，該短彎管4的內端位于該燒杯5的底部且低于該液體2表面，短彎管4用于實驗結束時吸取待測液體進行下一步的實驗。
[0027]再將一規格為125_的結晶皿6扣在該燒杯5上，由于燒杯5的高度要高于該培養皿I的高度，且結晶皿6的直徑大于培養皿I的直徑，因此當結晶皿6罩扣在燒杯5上時，容器結晶皿6底部的開口與培養皿I的底部有一定的距離，因此，培養皿I和結晶皿6之間形成一圓環狀的空間，但該結晶皿6容器底部的開口所在的水平面要低于該培養皿I上部的開口所在的水平面，保證該培養皿I中的待測液體2不受外界空氣中其他物質的污染，同時，該長彎管3和短彎管4的外端則均彎曲伸出于該結晶皿6的外部。
[0028]該長彎管3的外端通過一長3cm的硅膠管7連接一收集器8，該收集器8與該硅膠管7連接處設有旋鈕81，用于氣體收集和維持燒杯內外的壓力平衡。本發明的實施案例中，收集器8采用的是0.5L的氣體采集袋。
[0029]因此由以上內容得知，本發明裝置中培養皿I上部開口為未封閉狀態，同時，結晶皿6的直徑大于培養皿I的直徑，且容器結晶皿6底部的開口與培養皿I的底部有一定的距離，因此，培養皿I和結晶皿6之間形成一圓環狀的空間，因此，培養皿I中的細胞在非密閉環境下可與燒杯5內的細胞進行氣體交換，產生的氣體置于燒杯5的頂部，長彎管3通過收集器8收集氣體，采集后的揮發性物質進一步進行固相微萃取及氣相色譜/質譜分析等其他代謝組學分析，短彎管4用于抽取細胞用以進一步試驗檢測。如細胞凋亡、PCR等。
[0030]同時，本發明克服了現有技術中細胞培養的密閉環境及操作復雜、配件冗余等缺點，提供了一種簡易的、非密閉性的、費用低廉的裝置，保證了燒杯5內外細胞的氣體交換，對細胞活性影響較小，為細胞提供了相對正常的培養環境，通過流式細胞儀檢測細胞的凋亡，結果顯示細胞于此裝置中培養24小時后活性可達92.18% ±1.26% ;因此使細胞揮發出的有機化合物更加真實可信，因此更有利于探究疾病的代謝機制，利于疾病的初步篩查和早期診斷。
[0031]以上的說明和實施例僅是范例性的，并不對本發明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護范圍內。
【主權項】
1.一種細胞揮發物收集培養器，其特征在于，其包括: 一培養皿，該培養皿內部盛裝有待檢測液體； 一長彎管和一短彎管，該長彎管和短彎管的內端均置于該培養皿中； 一燒杯，該燒杯倒扣于該培養皿的液體中且包圍該長彎管和短彎管的內端，其中，該長彎管的內端位于該燒杯的頂部且高于該液體表面，該短彎管的內端位于該燒杯的底部且低于該液體表面； 一結晶皿，該結晶皿罩扣在該燒杯上，該長彎管和短彎管的外端均彎曲伸出于該結晶皿的外部。2.根據權利要求1所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該結晶皿容器底部的開口低于該培養皿上部的開口。3.根據權利要求1所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該燒杯倒扣后的燒杯內的液面與該培養皿中的液面保持平齊。4.根據權利要求1所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該待檢測液體為待檢測細胞及培養基。5.根據權利要求1所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該長彎管的外端通過一硅膠管連接一收集器，該收集器與該硅膠管連接處設有旋鈕，用于氣體收集和維持燒杯內外的壓力平衡。6.根據權利要求5所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該硅膠管長3cm，該收集器為0.5L的氣體采集袋。7.根據權利要求1所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該培養皿的規格為90mm，該燒杯的規格為250mL，該結晶皿的規格為125mm。8.根據權利要求1所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該燒杯的直徑小于培養皿的直徑。9.根據權利要求1所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該燒杯的高度高于該培養皿的高度。10.根據權利要求1所述的細胞揮發物收集培養器，其特征在于，該結晶皿的直徑大于該培養皿的直徑。
【專利摘要】本發明涉及一種用于疾病生物標記物研究的細胞揮發物收集培養器，其包括：一培養皿，該培養皿的內部盛裝有待檢測液體；一長彎管和一短彎管的內端均置于該培養皿中；一燒杯倒扣于該培養皿的液體中，該長彎管的內端高于該液體表面且位于該燒杯的頂部，該短彎管的內端低于該液體表面且位于該燒杯的底部；一結晶皿罩扣在該燒杯上，該長彎管和短彎管的外端均伸出于該結晶皿的外部。該培養器為簡易的、非密閉性的裝置，不僅保證了燒杯內外細胞間的氣體交換，而且對細胞活性影響較小，使收集到的細胞揮發物更有研究意義，因此更有利于探究疾病的代謝機制，利于腫瘤等疾病的初步篩查和早期診斷。
【IPC分類】C12M3/00
【公開號】CN105062889
【申請號】CN201510459096
【發明人】李丹丹, 周晉, 張卓
【申請人】哈爾濱醫科大學
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年7月30日