一類吲唑鹽類化合物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種吲唑類化合物組合物，主要涉及 3-{2-[4A(2-甲基-3-氯苯基）-1，哌嗪基]乙基}-5,6_二甲氧基-If吲唑鹽類及其 制備方法，及其在制備治療乳腺癌藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] 癌癥是嚴重危害人類生命與健康的常見病、多發病。近年來具有發病率高、死亡率 高和復發率高的特點，社會和經濟負擔日趨加重。
[0003] 近年來的文獻中已介紹過3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基）-1Ν-哌嗪基]乙基}-5， 6-二甲氧基-IH-吲唑鹽酸鹽（I)可以調控心肌肥厚病理過程中的鈣調素依賴激酶和磷酸 化酶的穩態平衡（Lu YM, Shioda N, Han F, Moriguchi S, Kasahara J, Shirasaki Y, Qin ZH, Fukunaga K. Imbalance between CaM kinase II and calcineurin activities impairs caffeine-induced calcium release in hypertrophic cardiomyocytes. Biochem Pharmacol. 2007 15;74(12): 1727-37)。但該化合物水不溶解，難以制成制劑而 發揮藥物作用，且目前尚未見該物質用于抗腫瘤藥物的報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的之一是提供一類吲唑鹽類化合物，涉及可溶于水的3-{2-[4N-(2-甲 基-3-氯苯基）-IN-哌嗪基]乙基}-5，6-二甲氧基-IH-吲唑鹽類化合物，其化學通式（II) 如下：
所述酸根選用草酸根、硫酸根或硝酸根中的一種。
[0005] 本發明的另一個目的是提供3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基）-1Ν-哌嗪基]乙 基}-5,6-二甲氧基-IH-吲唑鹽類化合物的制備方法，通過以下步驟實現： 由3- {2- [4N- (2-甲基-3-氯苯基）-IN-哌嗪基]乙基} -5，6-二甲氧基-IH-吲唑和酸 在有機溶劑中反應，重結晶制得目標化合物3- {2-[4N- (2-甲基_3_氯苯基）-IN-哌嗪基] 乙基}-5,6-二甲氧基-IH-吲唑鹽。
[0006] 反應式：
所述酸包括草酸、硫酸、硝酸、枸櫞酸等。
[0007] 所述有機溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、特丁醇、2-丁醇、正戊醇、異戊 醇、甲苯、丙酮、2-丁酮、乙腈、二甲基甲酰胺（DMF)、二甲基亞砜（DMSO)等。
[0008] 所述加熱溫度范圍在60~120度。
[0009] 本發明的再一個目的是提供上述吲唑鹽類化合物（II)在制備治療乳腺癌藥物中 的應用。經過藥效學實驗證明，所述的吲唑鹽類化合物（II)具有抑制人乳腺癌細胞株的生 物活性。
[0010] 本發明的特點是（1)所述吲唑鹽類化合物的制備工藝簡單，生產成本低，便于工業 化生產；（2)所述吲唑類化合物組合物具有較好的水溶性，該鹽類化合物與其鹽酸鹽相比 水中溶解度明顯提高，易于制備注射液，具有較高的臨床用藥方便性；（3)所述的鹽類化合 物具有抑制人乳腺癌細胞株的生物活性，可在制備用于抑制腫瘤細胞生物活性的藥物中應 用。
【具體實施方式】
[0011] 本發明結合實施例作進一步說明，但并不因此將本發明限制在所述的實施例范圍 之內。
[0012] 實施例1吲唑類化合物鹽類的制備 50毫升甲醇中，加入3-{2-[4ΛΜ2-甲基-3-氯苯基）-1，哌嗪基]乙基}-5,6-二甲 氧基-IH-吲唑0. 415克（1毫摩爾)、草酸0. 09克（1毫摩爾)，混合物回流1小時。薄層層析 (TLC)檢測反應完全，旋蒸揮去過量甲醇，所得固體用甲醇/乙醚（1/10)重結晶，得土黃色 固體0. 505克。Mp :158-159°C。產物經核磁共振解析確證為目標化合物3-{2-[4A(2-甲 基-3-氯苯基）-1，哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-IH-吲唑草酸鹽。 1H NMR (600 MHz, 4-DMS0) δ 7.20 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.91 (s, 1H), 3.80 (s, 6H), 3.61-3.25 (m, 8H), 3.20-3.05 (m, 4H), 2.31 (s, 3H); 13CNMR (150 MHz, J6-DMSO) δ 164.00， 152.1, 150.9, 145.8, 140.5, 136.9, 136.88, 135.0, 130.7, 128.0, 124.8, 118.5, 114.8, 100.1, 92.1, 56.2, 56.0, 55.3, 54.9, 51.9, 49.3, 49.1, 22.0, 15.4〇
[0013] 實施例2 操作同實施例1，只是溶劑為乙醇，得目標化合物吲唑草酸鹽〇. 499克。
[0014] 實施例3 操作同實施例1，只是溶劑為丙醇，得目標化合物〇. 45克。
[0015] 實施例4 操作同實施例1，只是溶劑為異丙醇，得目標化合物〇. 465克。
[0016] 實施例5 操作同實施例1，只是溶劑為異丙醇，得目標化合物0. 465克。
[0017] 實施例6 操作同實施例1，只是溶劑為正丁醇，得目標化合物〇. 495克。
[0018] 實施例7 操作同實施例1，只是溶劑為特丁醇，得目標化合物〇. 501克。
[0019] 實施例8 操作同實施例1，只是溶劑為2- 丁醇，得目標化合物0. 40克。
[0020] 實施例9 操作同實施例1，只是溶劑為正戊醇，得目標化合物〇. 45克。
[0021] 實施例10吲唑類化合物組合物的制備 操作同實施例1，只是溶劑為異戊醇，得目標化合物〇. 25克。
[0022] 實施例11 操作同實施例1，只是溶劑為甲苯，得目標化合物〇. 225克。
[0023] 實施例12 操作同實施例1，只是溶劑為丙酮，得目標化合物〇. 499克。
[0024] 實施例13 操作同實施例1，只是溶劑為2- 丁酮，得目標化合物0. 35克。
[0025] 實施例14 操作同實施例1，只是溶劑為乙腈，得目標化合物〇. 485克。
[0026] 實施例15 操作同實施例1，只是溶劑為二甲基甲酰胺（DMF)，得目標化合物0. 50克。
[0027] 實施例16 操作同實施例1，只是溶劑為二甲基亞砜（DMS0)，得目標化合物0. 115克。
[0028] 實施例17 操作同實施例1，只是所用酸為硫酸，得目標化合物硫酸鹽0.510克。熔點：216_ 218Γ，1HNMR (600 MHz，4-DMS0) δ 9.63 (s，1H), 7.20 (s，1H), 7.09 (s，1H)， 6.93 (s，1Η), 3.81 (s，6Η), 3.75-3.60 (m, 4Η), 3.42-3.20 (m, 6Η), 3.05-2.92 (m, 2H), 2.31 (s, 3H) ; 13C (150 MHz, 4-DMSO) δ 151.9, 151.2, 146.0, 140.1, 137.0, 135.0, 130.8, 128.0, 125.0, 118.6, 114.7, 100.1, 92.1, 56.3, 56.1, 54.7，52.0，49.1，21.75，15.4。
[0029] 實施例18 操作同實施例1，只是酸為硝酸，得目標化合物硝酸鹽〇. 502克。熔點：140-141. (TC， 1H NMR (600 MHz, 4-DMS0) δ 9. 72 (s，1H)，7. 24 (s，1H)，7. 20 (s，1H)，7.08 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 3.81 (s, 6H), 3.75-3.65 (m, 2H), 3.65-3.55 (m, 2H), 3.45-3.30 (m, 4H), 3.28-3.18 (m, 2H), 3.12-2.97 (m, 2H), 2.31 (s, 3H) ; 13C (150 MHz, 4-DMS0) δ 151. 9, 151. 2, 146. 05, 140.1 , 136. 9, 135. 0, 130. 8, 128. Ο, 125.0, 118.6, 114.7, 100.1, 92.1, 56.3, 56.1, 54.8, 52.0, 49.05, 21.7, 15.4〇
[0030] 實施例19 化合物3-{2-[4Ν-(2-甲基-3-氯苯基）-IN-哌嗪基]乙基}-5,6-二甲氧基-IH-吲 唑草酸鹽以及硫酸鹽對人乳腺癌細胞株MCF-7的增殖抑制測定 (1)樣品的準備：取樣品各I mg用20 yL DMSO溶解，取2 yL用1000 yL培養液 稀釋，使濃度為100 μ g/mL，再用培養液連續稀釋至使用濃度。
[0031] ⑵細胞的培養 1)培養基的配制：每1000 HiL培養基中含80萬單位青霉素，1.0 g鏈霉素，10%滅活 胎牛血清。
[0032] 2)細胞的培養：將MCF-7細胞接種于培養基中，置37°C，5% CO2培養箱中培養， 3~5d傳代。
[0033] ⑶測定樣品對腫瘤細胞生長的抑制作用 將細胞用Η)ΤΑ-胰酶消化液消化，并用培養基稀釋成I X 105/mL，加到96孔細胞培養板 中，每孔100 uL，置37°C，5% CO2培養箱中培養。接種24 h后，加入用培養基稀釋的樣品， 每孔100 μ L，每個濃度加3孔，置37°C，5% CO2培養箱中培養，72 h后在細胞培養孔中 加入5mg/mL的MTT，每孔10 yL，置37°C孵育4h，加入DMS0,每孔150 yL，用振蕩器振 蕩，使甲臢完全溶解，用酶標儀在570 nm波長下比色。以同樣條件用不含樣品，含同樣濃度 DMSO的培養基培養的細胞作為對照，計算樣品對腫瘤細胞生長的半數致死濃度（IC 5。）。
[0034] (4)實驗結果： 本實驗中采用順鉑作為陽性對照藥物，測得化合物吲唑草酸鹽、吲唑硫酸鹽及對照組 對MCF-7細胞株的抑制結果如表1所示。
[0035] 從表1中可以看出，化合物吲唑草酸鹽的IC5。為22.5 uM，稍低于對照組順鉑 (IC5。為29. 2 uM)，對MCF-7腫瘤細胞具有較好的抑制作用；化合物吲唑硫酸鹽的IC 5。為 11. 8 μ M，約為對照組順鉑的50%，對MCF-7腫瘤細胞具有更好的抑制作用。
[0036] 附錄：Π引挫鹽類溶解度。
【主權項】
L 一類吲唑鹽類化合物，涉及可溶于水的3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基）-IN-哌嗪 基]乙基}-5,6-二甲氧基-IH-吲唑鹽類化合物，其化學通式（II)如下：其中：所述酸根選用草酸根、硫酸根或硝酸根中的一種。
2. 根據權利要求1所述的一類吲唑鹽類化合物的制備方法，其特征在于，通過以下步 驟實現： 由3- {2- [4N- (2-甲基-3-氯苯基）-IN-哌嗪基]乙基} -5，6-二甲氧基-IH-吲唑和酸 在有機溶劑中反應，重結晶制得目標化合物3- {2-[4N- (2-甲基_3_氯苯基）-IN-哌嗪基] 乙基}-5,6-二甲氧基-IH-吲唑鹽；反應式：其中所述酸選用草酸、硫酸、硝酸或枸櫞酸； 所述有機溶劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇、特丁醇、2-丁醇、正戊醇、異戊醇、甲 苯、丙酮、2-丁酮、乙腈、二甲基甲酰胺或二甲基亞砜中的一種； 所述加熱溫度范圍在60~120度。
3. 根據權利要求1所述的一類吲唑鹽類化合物在制備治療乳腺癌藥物中的應用。
【專利摘要】本發明提供一類吲唑鹽類化合物（II），通過在甲醇等有機溶劑中加入3-{2-[4N-(2-甲基-3-氯苯基)-1N-哌嗪基]乙基}-5，6-二甲氧基-1H-吲唑和等摩爾數的酸加熱，反應完全后冷卻，濾取析出固體即得。本發明的制備方法簡單，生產成本低，便于工業化生產；所述吲唑鹽類化合物具有較好的水溶性，該鹽類化合物與其鹽酸鹽相比水中溶解度明顯提高，易于制備注射液，具有較高的臨床用藥實用性；具有抑制人乳腺癌細胞株的生物活性，可在制備用于抑制乳腺癌細胞生物活性的藥物中應用。本發明分子式：
【IPC分類】C07D231/56, A61P35/00
【公開號】CN105061317
【申請號】CN201510527995
【發明人】張辰, 韓峰, 杜永忠, 王再紅
【申請人】浙江大果生物醫藥科技有限公司
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年8月26日