, 144. 25 (s), 143. 64 (s ),138. 09 (s), 137. 75 (s), 132. 12 (s), 131. 23 (s), 130. 46 (d, J = 10. 5Hz), 127. 97 (d, J = 8. 1Hz), 122. 78 (s), 122. 42 (s), 120. 49 (s), 119. 68 (d, J = 14. 5Hz), 116. 47 (s), 112. 23 (s) ,46. 25 (s), 44. 68 (s), 43. 05 (s), 36. 26 (s).
[0127] 實施例12
[0128] 化合物1-12 :N-(2-(4-溴苯基）-2-(1H-吲哚-3-基）乙基）-2-(甲基磺酰氨基） 乙酰胺
[0130]取茄形瓶，加入化合物 B-I (0· 61mmol)93. 8mg，化合物 A-Il (0· 407mmol) 127. 9mg， HOBT (0. 81 mmo I) 109. 4mg, DMAP (0. 081 mmo I) 9. 9mg，EDC (0· 81 mmo I) 156. Omg，通入氣氣，加入 無水01^，室溫攪拌過夜。扎0(001160!1=15:1)，用乙酸乙酯萃取（301^\3)，飽和食鹽水 和無水硫酸鈉干燥。濃縮，柱層析分離（DCM = MeOH= 30:1)。得產物1-12,為棕紅色固體粉 末 64. Omg，產率 36. 1%。
[0131] 1H NMR (40 0MHz, CDCl3) 58.62(s, lH),7.83-7.67 (m,2H),7.48- 7. 37 (m, 2H) , 7. 32 (d, J = 6. 8Hz, 2H) , 7. 10 (d, J = 7. 5Hz, 2H) , 6. 96 (t, J = 7. 2Hz, 1H) , 6. 84 (s, 1H) , 4. 36 (d, J = 7. 2Hz, 1H) , 4. 2 I - 4. 03 (m, 1H), 3. 95-3. 75 (m, 2H), 3. 67 (s, 1H), 2. 17 (s, 3H). 13C NMR(IOOMHz1MeOD) δ 171. 38 (s), 143. 59 (s), 138 ? 33 (s)，132. 49 (s)，131. 35 (s)，128. 40 (s)，128. 10 (s)，127. 32 (s)，122. 98 (s)，122. 69 (s)， 121. 18 (s)，119. 84 (s)，116. 43 (s)，112. 38 (s)，111. 50 (s)，46. 33 (s)，45. 29 (s)，43. 35 (s)， 40. 49 (s) ·
[0132] 實施例13
[0133] 化合物1-13 :N-(2-(4-氰基苯基）-2-(1H-吲哚-3-基）乙基）-2-((4-甲基苯 基）磺酰氨基）乙酰胺
[0135] 取茄形瓶，加入化合物 B-2 (0· 57mmol) 13L 6mg，化合物 A-8 (0· 38mmol) KKX Omg， Η0ΒΤ(0· 76mmol) 102. 3mg，DMAP(0. 076mmol)9. 3mg，EDC(0. 76mmol) 145. 7mg，通入氬氣，加入 無水01^，室溫攪拌過夜。扎0(001160!1=15:1)，用乙酸乙酯萃取（301^\3)，飽和食鹽 水和無水硫酸鈉干燥。濃縮，柱層析分離（DCM = MeOH = 30:1)。得產物1-13,為灰色固體 166. 2mg，產率 90. 5%。
[0136] 1H MlR (400MHz，CDCl3) δ 8. 59 (s，1H)，7. 60 (d，J = 8· 0Hz，2H)，7. 44 (d，J = 8. 0Hz, 2H), 7. 30 (t, J = 7. 4Hz, 3H), 7. 20 (d, J = 7. 9Hz, 3H), 7. 17 - 7. 08 (m, 2H), 6. 97 (t, J =7. 5Hz, 1H) , 6. 86 (t, J = 5. 4Hz, 1H) , 5. 79 (t, J = 5. 9Hz, IH) , 4. 42 (t, J =7. 4Hz, 1H) , 3. 87 - 3. 72 (m, 1H) , 3. 41 (d, J = 5. 9Hz, 2H) , 2. 36 (s, 3H) . 13C NMR (100MHz, CDCl3) δ 168. 73 - 168. 53 (m), 147. 72 (s), 144. 30 (s), 136. 57 (s), 135. 45 (s)， 132. 38 (s)，129. 99 (s)，128. 88 (s)，127. 09 (s)，126. 41 (s)，122. 50 (s)，122. 23 (s)，119. 69 (s)，118. 94 (s)，114. 53 (s)，111. 64 (s)，110. 35 (s)，45. 69 (s)，43. 60 (s)，42. 60 (s)，21. 58 (s) ·
[0137] 藥理活性篩選實驗
[0138] 我們對所合成的化合物進行了如下的抗癌活性測試，以上化合物普遍表現出一定 的抗癌活性。
[0139] 抗癌活性測試采用的是 MTT 法（J. Med. Chem. 2015, 58 (11)，4550-4572.)。MTT 是 一種粉末狀化學試劑，全稱為 3_ (4, 5)-dimethylthiahiazo (_z_yl) _3, 5-di-phenytetrazo Iiumromide，漢語化學名為3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴鹽，是一種黃顏 色的染料。MTT法可用于細胞增殖及細胞活性的測定。
[0140] MMT法的檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水 不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan)并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜 (DMSO)能溶解細胞中的甲瓚，用酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值，在一定細胞數范 圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。根據測得的吸光度值（OD值），來判斷活細胞數 量，OD值越大，細胞活性越強（如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越小）。
[0141] MTT法實驗步驟：（1)收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，每孔加入100uL，鋪板 使待測細胞調密度至1000-10000孔，（邊緣孔用無菌PBS填充）；（2)5% C02,37°C孵育，至 細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板），加入濃度梯度的藥物，原則上，細胞貼壁后即可加藥，或 兩小時，或半天時間，但我們常在前一天下午鋪板，次日上午加藥.一般5-7個梯度，每孔 100uL，設3-5個復孔.建議設5個，否則難以反應真實情況；（3) 5% C02, 37°C孵育16-48小 時，倒置顯微鏡下觀察；(4)每孔加入20uLMTT溶液（5mg/mL，即0. 5% MTT)，繼續培養4h。 若藥物與MTT能夠反應，可先離心后棄去培養液，小心用PBS沖2-3遍后，再加入含MTT的 培養液；（5)終止培養，小心吸去孔內培養液；（6)每孔加入150uL二甲基亞砜，置搖床上低 速振蕩l〇min，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀0D490nm處測量各孔的吸光值；（7) 同時設置調零孔（培養基、MTT、二甲基亞砜），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培 養液、MTT、二甲基亞砜）。
[0142] IC5。(half maximal inhibitory concentration)是指被測量的詰抗劑的半抑制 濃度。它能指示某一藥物或者物質（抑制劑）在抑制某些生物程序（或者是包含在此程序 中的某些物質，比如酶，細胞受體或是微生物）的半量。在凋亡方面，可以理解為一定濃度 的某種藥物誘導腫瘤細胞凋亡50%，該濃度稱為50%抑制濃度，即凋亡細胞與全部細胞數 之比為50%時所對應的濃度。IC 5。值越小，說明藥物對腫瘤的抑制活性越好。
[0143] 下面主要針對DU-145和MCF-7兩種細胞進行活性測試（測試單位：武漢大學藥學 院）。從表一化合物的活性測試結果中，我們發現苯并氮雜環為吲哚時，苯環上含2個氟原 子的化合物1-2對DU-145的活性最好），其IC50為13. 45uM。而苯環上含溴的化合物1-10 對MCF-7的抑制活性最好，其IC50為10. 96uM，活性最好。對于DU-145,磺酰胺基團上苯環 含有-Me時，活性一般都比較好，例如化合物1-1、化合物1-2、化合物1-3和化合物1-5 (化 合物1-4、1-8和1-12例外）；對于MCF-7細胞系，磺酰胺基團上苯環含有Me時，活性也一 般都比較好，例如化合物1-6、1-7、1-9、1-10、I-Il和1-13。化合物1-3的苯并氮雜環為氮 雜吲哚時，同時對DU-145和MCF-7細胞具有較好的活性。
[0144] 由于前列腺癌與乳腺癌有著極其密切的聯系，該類化合物對DU-145和MCF-7細胞 均具有較好的活性，因此我們可以預測出該類化合物對膀胱癌、宮頸癌、卵巢癌等也有一定 的抑制活性。
[0145] 表一、化合物活性測試結果
[0146]
[0149] 測試單位：武漢大學藥學院
[0150] 在本說明書的描述中，參考術語"一個實施例"、"一些實施例"、"示例"、"具體示 例"、或"一些示例"等的描述意指結合該實施例或示例描述的具體特征、結構、材料或者特 點包含于本發明的至少一個實施例或示例中。在本說明書中，對上述術語的示意性表述不 一定指的是相同的實施例或示例。而且，描述的具體特征、結構、材料或者特點可以在任何 的一個或多個實施例或示例中以合適的方式結合。
[0151] 盡管已經示出和描述了本發明的實施例，本領域的普通技術人員可以理解：在不 脫離本發明的原理和宗旨的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本 發明的范圍由權利要求及其等同物限定。
【主權項】
1. 一種化合物，其特征在于，所述化合物為式I所示化合物或式I所示化合物的對映異 構體、非對映異構體、外消旋體、藥學上可接受的鹽、結晶水合物或溶劑合物，其中， R1為任選取代的苯基； R2為對甲基苯基、甲基； X為C或N。2. 根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，R 1為苯基，至少一個鹵素取代的苯基， 氰基取代的苯基。3. 根據權利要求2所述的化合物，其特征在于，所述鹵素為F、Cl或Br。4. 根據權利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物為下列化合物或者所述下 列化合物的對映異構體、非對映異構體、外消旋體、藥學上可接受的鹽、結晶水合物或溶劑 合物：5. -種制備權利要求1~4任一項所述化合物的方法，其特征在于，包括： (1) 使式Al所示化合物與硝基甲烷進行接觸，以便獲得式A2所示化合物； (2) 使所述式A2所示化合物與式A3所示化合物進行接觸，以便獲得式A4所示化合物； (3) 使所述式A4所示化合物進行還原反應，以便獲得式A所示化合物； (4) 使式Bl所示化合物與甘氨酸乙酯鹽酸鹽進行接觸，以便獲得式B2所示化合物； (5) 使所述式B2所示化合物進行水解反應，以便獲得式B所示化合物； (6) 使所述式A所示化合物與所述式B所示化合物進行接觸，以便獲得式I所示化合 物；其中R1、R2、X是如權利要求1~4任一項中所定義的。6. -種藥物組合物，其特征在于，包括：權利要求1~4任一項所述的化合物。7. 權利要求1~4任一項所述的化合物或權利要求6所述的藥物組合物在制備藥物中 的用途，所述藥物用于治療癌癥。8. 根據權利要求7所述的藥物組合物的制備藥物中的用途，所述癌癥為腦癌、肺癌、卵 巢癌、膀胱癌、宮頸癌、結腸癌、乳腺癌和前列腺癌。
【專利摘要】本發明提供了化合物及其制備方法和用途，該化合物為式I所示化合物或其對映異構體、非對映異構體、外消旋體、藥學上可接受的鹽、結晶水合物或溶劑合物，其中，R1為任選取代的苯基；R2為對甲基苯基、甲基；X為C或N。該化合物能夠用于治療癌癥相關疾病。
【IPC分類】C07D209/20, A61K31/437, A61K31/4045, C07D209/14, C07D471/04, A61P35/00
【公開號】CN105061288
【申請號】CN201510483896
【發明人】邢莉, 周海兵
【申請人】武漢華素康生物科技有限公司
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年8月7日