一種美登葉酸的提純方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于天然藥物化學領域，特別涉及一種美登葉酸的提純方法。
【背景技術】
[0002] 美登葉酸為三萜類化合物，具有抗炎、抗癌活性，CAS號84108-17-8,分子式 CmH48O4，分子量472. 7,分子結構式如下：
衛矛為衛矛科衛矛屬植物衛矛Euonymus alatus (Thunb.)Sieb.，以根，帶翅的枝及葉 入藥，具有抗炎、抗腫瘤及降血糖等活性。
[0003] 通過文獻檢索，現有美登葉酸備方法是采用有機試劑提取和硅膠分離方法。由于 操作復雜，制備量較小，所得產品純度低，很難實現工業化生產。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是解決現有技術的不足和缺陷，提供一種操作簡便的美登葉酸的制 備方法。
[0005] 為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：一種美登葉酸的提純方法，其特征 在于以下步驟： 1) 取干燥的衛矛原料粉碎，過20~60目篩，收集粗粉備用； 2) 按0. 1~0. 5g纖維素酶/L水的比例將纖維素酶溶于蒸餾水中，攪拌均勻，滴加鹽酸 溶液，調節PH值4~5 ; 3) 將衛矛粗粉加入上述纖維素酶的水溶液中，攪拌均勻，水浴加熱到45~50°C，恒溫酶 解l~2h，而后升溫至60~80°C，加熱20~40min，進行滅酶，即得酶解混合物； 4) 在上述酶解混合物中加入料液比為1 :3~5、30%的乙醇水溶液進行超聲提取，過濾， 濾渣超聲提取1~3次，合并濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液備用； 5) 將所得濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用2~5倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用10~20%的 乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； 6) 洗脫液采用高速逆流色譜純化，根據圖譜收集目標成分，回收試劑，冷凍干燥即得美 登葉酸。
[0006] 步驟3)所述的衛矛粗粉加入與纖維素酶水溶液的質量體積比為1 :1~5。
[0007] 步驟4)所述超聲提取的頻率為20~40KHz，溫度為50~70°C。
[0008] 步驟5)中所述大孔吸附樹脂為X-5、LSA-21、WLD中的一種 步驟6)所述的高速逆流色譜分離的溶劑體系為氯仿-甲醇-正丙醇-水溶劑系統，混 合比例9-18 :12-24 :1-2 :8-16,取下相做固定相，上相做流動相。
[0009] 采用本法制備美登葉酸，工藝簡便易操作，產品純度高，易于實現工業化生產。
[0010] 下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限 于下列實施方式。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1 : 取干燥的衛矛原料粉碎，過20目篩，收集粗粉備用；按0.1 g纖維素酶/L水的比例將纖 維素酶溶于蒸餾水中，攪拌均勻，滴加鹽酸溶液，調節PH值為4 ;將衛矛粗粉按質量體積比 為1 :1加入上述纖維素酶的水溶液中，攪拌均勻，水浴加熱到45°C，恒溫酶解lh，而后升溫 至60°C，加熱20min，進行滅酶，即得酶解混合物；在上述酶解混合物中加入料液比為1 :3、 30%的乙醇水溶液在頻率為20KHz，溫度為50°C進行超聲提取，過濾，濾渣超聲提取1次，合 并濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液備用；將所得濃縮液上X-5型大孔吸附樹脂柱，先用 2倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用10%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；洗脫液以氯仿-甲醇-正 丙醇-水溶劑系統，混合比例為9 :12 :1 :8,取下相做固定相，上相做流動相，采用高速逆流 色譜純化，根據圖譜收集目標成分，回收試劑，冷凍干燥即得美登葉酸。經檢測，含量94. 7%。
[0012] 實施例2: 取干燥的衛矛原料粉碎，過40目篩，收集粗粉備用；按0.3g纖維素酶/L水的比例將纖 維素酶溶于蒸餾水中，攪拌均勻，滴加鹽酸溶液，調節PH值為4 ;將衛矛粗粉按質量體積比 為1 :3加入纖維素酶的水溶液中，攪拌均勻，水浴加熱到45°C，恒溫酶解I. 5h，而后升溫至 70°C，加熱30min，進行滅酶，即得酶解混合物；在上述酶解混合物中加入料液比為1 :4、30% 的乙醇水溶液在頻率為40KHz，溫度為60°C下進行超聲提取，過濾，濾渣超聲提取2次，合 并濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液備用；將所得濃縮液上LSA-21型大孔吸附樹脂柱， 先用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用15%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；洗脫液以氯仿-甲 醇-正丙醇-水溶劑系統，混合比例為10 :15 :2 :10,取下相做固定相，上相做流動相，采用 高速逆流色譜純化，根據圖譜收集目標成分，回收試劑，冷凍干燥即得美登葉酸。經檢測，含 量 94. 9%。
[0013] 實施例3: 取干燥的衛矛原料粉碎，過60目篩，收集粗粉備用；按0.5g纖維素酶/L水的比例將 纖維素酶溶于蒸餾水中，攪拌均勻，滴加鹽酸溶液，調節PH值為5 ;將衛矛粗粉按質量體積 比為1 :5加入纖維素酶的水溶液中，攪拌均勻，水浴加熱到50°C，恒溫酶解2h，而后升溫至 80°C，加熱40min，進行滅酶，即得酶解混合物；在酶解混合物中加入料液比為1 :5、30%的 乙醇水溶液在頻率為40KHz，溫度為70 °C下進行超聲提取，過濾，濾渣超聲提取3次，合并 濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液備用；將所得濃縮液上WLD型大孔吸附樹脂柱，先用5 倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用20%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；洗脫液以氯仿-甲醇-正 丙醇-水溶劑系統，混合比例為18 :24 :2 :16,取下相做固定相，上相做流動相，采用高速逆 流色譜純化，根據圖譜收集目標成分，回收試劑，冷凍干燥即得美登葉酸。經檢測，含量為 95. 1%〇
【主權項】
1. 一種美登葉酸的提純方法，其特征在于以下步驟： 1) 取干燥的衛矛原料粉碎，過20~60目篩，收集粗粉備用； 2) 按0. 1~0. 5g纖維素酶/L水的比例將纖維素酶溶于蒸餾水中，攪拌均勻，滴加鹽酸 溶液，調節pH值4~5 ; 3) 將衛矛粗粉加入上述纖維素酶的水溶液中，攪拌均勻，水浴加熱到45~50°C，恒溫酶 解l~2h，而后升溫至60~80°C，加熱20~40min，進行滅酶，即得酶解混合物； 4) 在上述酶解混合物中加入料液比為1 :3~5、30%的乙醇水溶液進行超聲提取，過濾， 濾渣超聲提取1~3次，合并濾液減壓濃縮至無醇味，收集濃縮液備用； 5) 將所得濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先用2~5倍柱體積的蒸餾水洗脫，再用10~20%的 乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； 6) 洗脫液采用高速逆流色譜純化，根據圖譜收集目標成分，回收試劑，冷凍干燥即得美 登葉酸。2. 根據權利要求1所述美登葉酸的提純方法，其特征在于步驟3)所述的衛矛粗粉加入 與纖維素酶水溶液的質量體積比為1 :1~5。3. 根據權利要求1所述美登葉酸的提純方法，其特征在于步驟4)所述超聲提取的頻率 為 20~40KHz，溫度為 50~70°C。4. 根據權利要求1所述美登葉酸的提純方法，其特征在于步驟5)中所述大孔吸附樹脂 為 X-5、LSA-21、WLD 中的一種。5. 根據權利要求1所述美登葉酸的提純方法，其特征在于步驟6)所述的高速逆流色譜 分離的溶劑體系為氯仿-甲醇-正丙醇-水溶劑系統，混合比例9-18 :12-24 :1-2 :8-16,取 下相做固定相，上相做流動相。
【專利摘要】本發明公開了一種美登葉酸的提純方法。方法如下：取干燥的衛矛原料粉碎，過篩，加入酶解水溶液，在酸性的條件下酶解1~3h，酶解完成后加入提取溶劑超聲提取，過濾，濾渣提取1~3次，合并提取液減壓濃縮至無醇味，濃縮液上大孔吸附樹脂柱洗脫，收集洗脫液采用高速逆流色譜純化，根據圖譜收集目標成分，回收試劑，冷凍干燥即得美登葉酸。采用本發明制備美登葉酸，工藝操作簡便，成本低，易于實現工業化生產。
【IPC分類】C07J63/00
【公開號】CN104945462
【申請號】CN201510270134
【發明人】劉東鋒, 楊成東
【申請人】南京澤朗醫藥科技有限公司
【公開日】2015年9月30日
【申請日】2015年5月26日