食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于食品分析檢測技術領域，具體涉及一種食品中金黃色葡萄球菌的檢測 方法。
【背景技術】
[0002] 金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)是葡萄球菌屬的一種，廣泛存在于自 然界中，如土壤、空氣、水、物品表面以及人或動物的皮膚、鼻腔、咽部、腸道等處。
[0003] 金黃色葡萄球菌是引起細菌性食物中毒的主要病原菌之一，廣泛存在于自然界 中。金黃色葡萄球菌的致病因子與其產生的毒素和酶有關。金黃色葡萄球菌腸毒素是分子 量為24k Da~30k Da的水溶性蛋白質，已知有A、B、C1、C2、C3、D、E等12個血清型。金黃 色葡萄球菌腸毒素是一組熱穩定單純蛋白，經KKTC煮沸30min仍保持部分活性。金黃色葡 萄球菌腸毒素能抗蛋白水解酶，進入消化道后仍保持活性。食用受污染食物后，腸毒素作用 于腸壁，刺激嘔吐中樞，并產生急性胃腸炎癥狀。金黃色葡萄球菌的適應性和抵抗外界不良 環境的能力都很強，繁殖時會產生殺白細胞素、腸毒素、溶血毒素、血漿凝固酶等，可以引起 惡心、嘔吐、腹瀉等胃腸疾病，還可以引起人類化膿感染，嚴重時可以導致敗血癥。因此，食 品中金黃色葡萄球菌的檢測受到了國內外研宄學者的高度關注。
[0004] 隨著經濟的發展和報道的透明，中國國內曝光的食品安全問題呈現明顯上升趨 勢，據統計，我國2002~2011年食物中毒的事件一共有3373起，中毒人數11. 47萬人，死 亡人數2088人。引發食物中毒的原因主要是微生物性食物中毒，中毒起數和人數均最多， 分別占總起數的35. 72%和總人數的57. 04%。有效監控食品生產和流通領域的微生物污 染，已經成為人們所面臨的現實問題。
[0005] 目前金黃色葡萄球菌檢測方法主要包括傳統的平板培養法、以分子生物學為基礎 的檢測法、以免疫學位基礎的檢測法以及生物傳感器法。這些方法有的費時費力、有的成本 高，有的靈敏度低等均存在各自的不足。尋找一種快速、操作簡便的檢測方法是目前的研宄 重點。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是克服現有技術的不足而提供一種食品中金黃色葡萄球菌的檢測 方法，該方法檢測時間在3h以內，檢測限為10~107cfu/mL。
[0007] 食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，包括以下步驟：
[0008] 步驟1，取食品樣品，研磨，碎肩加至生理鹽水中混合，均質，然后過濾，濾液用去離 子水稀釋；
[0009] 步驟2,取步驟1所得稀釋液接種到選擇培養基，在37°C 120rpm下振蕩培養4h ;
[0010] 步驟3,將步驟2所得菌液稀釋，稀釋液過濾濃縮，取2 μ L濃縮液，加至微生物快速 檢測儀中進行檢測。
[0011] 作為上述發明的進一步改進，步驟1中食品樣品的用量為20~70g，生理鹽水的用 量為100~300mL。
[0012] 作為上述發明的進一步改進，步驟1中均質時間為3~8min。
[0013] 作為上述發明的進一步改進，步驟1中稀釋倍數為5~20倍。
[0014] 作為上述發明的進一步改進，步驟2中稀釋液接種量為5~10v/v%。
[0015] 作為上述發明的進一步改進，步驟2中選擇培養基的制備方法為取胰蛋白胨 17. 0g、氯化鈉5. 0g、植物蛋白胨3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氫二鉀2. 5g、梓檬酸鈉3. 2g在 1000 mL水中加熱溶化，調節pH至7. 4,121°C高壓滅菌20min，再加入氯化鈉0. 05g、亞蹄酸 鉀0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇0. 15g、氯化鋰0. 14g、硫代硫酸鈉0. 21g、吖啶黃0. 05g、 丙酮酸鈉〇. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露醇0. 17g、檸檬酸鈉0. 15g，混合，即得。
[0016] 作為上述發明的進一步改進，步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0017] 本發明提供的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法與國標GB 4789. 10-2010的檢 測方法不存在顯著差異，檢測時間在3h以內，檢測限為10~107cfu/mL。
【具體實施方式】
[0018] 實施例1
[0019] 步驟1，取食品樣品，研磨，碎肩加至生理鹽水中混合，均質，然后過濾，濾液用去離 子水稀釋；
[0020] 步驟2,取步驟1所得稀釋液接種到選擇培養基，在37°C 120rpm下振蕩培養4h ;
[0021] 步驟3,將步驟2所得菌液稀釋，稀釋液過濾濃縮，取2 μ L濃縮液，加至微生物快速 檢測儀中進行檢測。
[0022] 步驟1中食品樣品的用量為20g，生理鹽水的用量為100mL。
[0023] 步驟1中均質時間為3min。
[0024] 步驟1中稀釋倍數為5倍。
[0025] 步驟2中稀釋液接種量為5v/v %。
[0026] 步驟2中選擇培養基的制備方法為取胰蛋白胨17. 0g、氯化鈉5. 0g、植物蛋白胨 3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氫二鉀2. 5g、朽1檬酸鈉3. 2g在1000 mL水中加熱溶化，調節pH至 7. 4,121°C高壓滅菌20min，再加入氯化鈉0. 05g、亞碲酸鉀0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇 0. 15g、氯化鋰0. 14g、硫代硫酸鈉0. 21g、吖啶黃0. 05g、丙酮酸鈉0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露 醇0. 17g、梓檬酸鈉0. 15g，混合，即得。
[0027] 步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0028] 實施例2
[0029] 步驟1，取食品樣品，研磨，碎肩加至生理鹽水中混合，均質，然后過濾，濾液用去離 子水稀釋；
[0030] 步驟2,取步驟1所得稀釋液接種到選擇培養基，在37°C 120rpm下振蕩培養4h ;
[0031] 步驟3,將步驟2所得菌液稀釋，稀釋液過濾濃縮，取2 μ L濃縮液，加至微生物快速 檢測儀中進行檢測。
[0032] 步驟1中食品樣品的用量為35g，生理鹽水的用量為150mL。
[0033] 步驟1中均質時間為5min。
[0034] 步驟1中稀釋倍數為8倍。
[0035] 步驟2中稀釋液接種量為7v/v %。
[0036] 步驟2中選擇培養基的制備方法為取胰蛋白胨17. 0g、氯化鈉5. 0g、植物蛋白胨 3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氫二鉀2. 5g、朽1檬酸鈉3. 2g在1000 mL水中加熱溶化，調節pH至 7. 4,121°C高壓滅菌20min，再加入氯化鈉0. 05g、亞碲酸鉀0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇 0. 15g、氯化鋰0. 14g、硫代硫酸鈉0. 21g、吖啶黃0. 05g、丙酮酸鈉0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露 醇0. 17g、梓檬酸鈉0. 15g，混合，即得。
[0037] 步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0038] 實施例3
[0039] 步驟1，取食品樣品，研磨，碎肩加至生理鹽水中混合，均質，然后過濾，濾液用去離 子水稀釋；
[0040] 步驟2,取步驟1所得稀釋液接種到選擇培養基，在37°C 120rpm下振蕩培養4h ;
[0041] 步驟3,將步驟2所得菌液稀釋，稀釋液過濾濃縮，取2 μ L濃縮液，加至微生物快速 檢測儀中進行檢測。
[0042] 步驟1中食品樣品的用量為50g，生理鹽水的用量為200mL。
[0043] 步驟1中均質時間為7min。
[0044] 步驟1中稀釋倍數為15倍。
[0045] 步驟2中稀釋液接種量為9v/v %。
[0046] 步驟2中選擇培養基的制備方法為取胰蛋白胨17. 0g、氯化鈉5. 0g、植物蛋白胨 3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氫二鉀2. 5g、朽1檬酸鈉3. 2g在1000 mL水中加熱溶化，調節pH至 7. 4,121°C高壓滅菌20min，再加入氯化鈉0. 05g、亞碲酸鉀0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇 0. 15g、氯化鋰0. 14g、硫代硫酸鈉0. 21g、吖啶黃0. 05g、丙酮酸鈉0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露 醇0. 17g、梓檬酸鈉0. 15g，混合，即得。
[0047] 步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0048] 實施例4
[0049] 步驟1，取食品樣品，研磨，碎肩加至生理鹽水中混合，均質，然后過濾，濾液用去離 子水稀釋；
[0050] 步驟2,取步驟1所得稀釋液接種到選擇培養基，在37°C 120rpm下振蕩培養4h ;
[0051] 步驟3,將步驟2所得菌液稀釋，稀釋液過濾濃縮，取2 μ L濃縮液，加至微生物快速 檢測儀中進行檢測。
[0052] 步驟1中食品樣品的用量為60g，生理鹽水的用量為240mL。
[0053] 步驟1中均質時間為7min。
[0054] 步驟1中稀釋倍數為12倍。
[0055] 步驟2中稀釋液接種量為9v/v %。
[0056] 步驟2中選擇培養基的制備方法為取胰蛋白胨17. 0g、氯化鈉5. 0g、植物蛋白胨 3. 0g、葡萄糖2. 5g，磷酸氫二鉀2. 5g、朽1檬酸鈉3. 2g在1000 mL水中加熱溶化，調節pH至 7. 4,121°C高壓滅菌20min，再加入氯化鈉0. 05g、亞碲酸鉀0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇 0. 15g、氯化鋰0. 14g、硫代硫酸鈉0. 21g、吖啶黃0. 05g、丙酮酸鈉0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露 醇0. 17g、梓檬酸鈉0. 15g，混合，即得。
[0057] 步驟3中過濾濃縮的過濾器孔徑為0. 45 μ m。
[0058] 將實施例1至4所得結果與國標金黃色葡萄球檢測方法中的第二法Baird-Parker 平板計數法結果進行比較，結果如下：
[0059]
[0060] 由上表可知，本發明提供的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法與國標GB 4789. 10-2010的檢測方法不存在顯著差異。
【主權項】
1. 食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟： 步驟1，取食品樣品，研磨，碎肩加至生理鹽水中混合，均質、過濾，濾液用去離子水稀 釋； 步驟2,取步驟1所得稀釋液接種到選擇培養基，37°C、120rpm振蕩培養4h; 步驟3,將步驟2所得菌液稀釋，稀釋液過濾濃縮，取2ML濃縮液，加至微生物快速檢測 儀中進行檢測。2. 根據權利要求1所述的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，其特征在于：步驟1中 食品樣品的用量為20~70g，生理鹽水的用量為100~300mL。3. 根據權利要求1所述的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，其特征在于：步驟1中 均質時間為3~8min。4. 根據權利要求1所述的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，其特征在于：步驟1中 稀釋倍數為5~20倍。5. 根據權利要求1所述的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，其特征在于：步驟2中 稀釋液接種量為5~10v/v%。6. 根據權利要求1所述的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，其特征在于：步驟2中 選擇培養基的制備方法為取胰蛋白胨17.Og、氯化鈉5.Og、植物蛋白胨3.Og、葡萄糖2. 5g， 磷酸氫二鉀2. 5g、檸檬酸鈉3. 2g在1000 mL水中加熱溶化，調節pH至7. 4,121 °C高壓滅菌 20min，再加入氯化鈉0. 05g、亞蹄酸鉀0. 12g、萘啶酮酸0. 03g、苯乙醇0. 15g、氯化鋰0. 14g、 硫代硫酸鈉〇. 21g、吖啶黃0. 05g、丙酮酸鈉0. 14g、甘氨酸0. 23g、甘露醇0. 17g、檸檬酸鈉 〇? 15g，混合，即得。7. 根據權利要求1所述的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，其特征在于：步驟3中 過濾濃縮的過濾器孔徑為〇. 45Mm。
【專利摘要】本發明提供了一種食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法，先取食品樣品，研磨，碎屑加至生理鹽水中混合，均質，然后過濾，濾液用去離子水稀釋；再取所得稀釋液接種到選擇培養基，在37℃ 120rpm下振蕩培養4h；然后將所得菌液稀釋，稀釋液過濾濃縮，取2μL濃縮液，加至微生物快速檢測儀中進行檢測。本發明提供的食品中金黃色葡萄球菌的檢測方法與國標GB 4789.10-2010的檢測方法不存在顯著差異，檢測時間在3h以內，檢測限為10～107cfu/mL。
【IPC分類】C12R1/445, C12Q1/04
【公開號】CN104928344
【申請號】CN201510368441
【發明人】熊開勝, 張海防, 謝建庭
【申請人】蘇州東辰林達檢測技術有限公司
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年6月29日