一種紅澤蘭苷的提純工藝的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種紅澤蘭苷的提純工藝，屬于生物技術領域。
[0002] 鍵入技術領域描述段落。
【背景技術】
[0003] 紅澤蘭苷，分子式C22H22O9，分子量430. 40, CAS號110282-44-5,分子結構式：
紅澤蘭為雙子葉植物藥爵床科植物，以全草入藥，性味苦、微辛，溫，具有疏肝解郁，活 血化瘀，溫中利水等功效。紅澤蘭苷是紅澤蘭中主要生理活性成分。
[0004] 高速逆流色譜技術是一種不用任何同態載體的液、液色譜技術，其原理是基于組 分在旋轉螺旋管內的相對移動而互不混溶的兩相溶劑間分布不同而分離，其分離效率和速 度可以與HPLC相媲美。HSCCC分離效率高，產品純度高，不存在載體對樣品的吸附和污染， 制備量大和溶劑消耗少，操作簡單，能從極復雜的混合物中分離出特定的組分。被廣泛應用 天然產物分離制備中。
[0005] 通過文獻檢索現有制備紅澤蘭苷的方法，多采用常規試劑提取和大孔樹脂分離， 該方法提取效率低，純化步驟繁瑣，污染嚴重，生產成本高，不適合工業化生產。
【發明內容】
[0006] 本發明目的是提供一種操作簡單、所得產品純度較高的紅澤蘭苷提純工藝。
[0007] 本發明是通過以下技術方案實現的： 以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過20~60目篩，加入料液比為1 :3~5、70~90%乙醇溶 液，在pH為4~5的條件下，加入0. 1~0. 5%的纖維素酶和果膠酶按1 :1混合，酶解l~3h，酶 解完成后，在溫度為50~60°C下進行微波提取1~3次，每次300~900s，提取液上活性炭層析 柱，先用2~4倍柱體積、10~15%乙醇洗脫，再用2~5倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃 縮，濃縮液用正丁醇萃取1~2次，收集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃縮液采用高速逆流色譜 分離，根據圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。
[0008] 所述纖維素酶為5~40u/g和果膠酶為5~40u/g。
[0009] 所述微波提取功率為800~2000W。
[0010] 所述萃取時，濃縮液與正丁醇的體積比為1 :〇. 5~1。
[0011] 所述高速逆流色譜分離條件為：溶劑系統選氯仿、正丙醇、水，混合比例5-10 : I-3 :5-9，取上相做固定相，下相做流動相。
[0012] 本發明具有的優點為：1、采用了生物酶酶解輔助微波提取的提取方法，提取效率 高，溶劑用量少，對環境污染小；2、采用了高速逆流色譜法純化，方法簡便易操作，溶劑用量 小，樣品無損失，制備量大，可連續制備，而且無污染。
[0013] 下面將結合【具體實施方式】進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限 于下列實施例。
[0014]
【具體實施方式】： 實施例1 : 以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過20目篩，加入料液比為1 :3、70%乙醇溶液，在pH為 4的條件下，加入0. 1%纖維素酶（5u/g)和果膠酶（5u/g)按1 :1混合，酶解lh，酶解完成后， 在溫度為50°C，功率為800W的條件下進行微波提取1次，每次300s，提取液上活性炭層析 柱，先用2倍柱體積、10%乙醇洗脫，再用2倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮 液用正丁醇萃取1次，濃縮液與正丁醇的體積比為1 :〇. 5,收集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃 縮液采用高速逆流色譜分離，根據圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。高速逆流色譜分離條 件為：溶劑系統選氯仿、正丙醇、水，混合比例5 :1 :5,取上相做固定相，下相做流動相。經檢 測，所得產品中紅澤蘭苷的含量為90. 5%。
[0015] 實施例2: 以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過40目篩，加入料液比為1 :4、80%乙醇溶液，在pH為 5的條件下，加入0. 3%的纖維素酶（20u/g)和果膠酶（20u/g)按1 :1混合，酶解2h，酶解完 成后，在溫度為55°C功率為1000W的條件下，進行微波提取2次，每次600s，提取液上活性 炭層析柱，先用3倍柱體積、10%乙醇洗脫，再用3倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮， 濃縮液與正丁醇的體積比為1 :1，濃縮液用正丁醇萃取2次，收集正丁醇萃取液，減壓濃縮， 濃縮液采用高速逆流色譜分離，根據圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。高速逆流色譜分離 條件為：溶劑系統選氯仿、正丙醇、水，混合比例8 :2 :7,取上相做固定相，下相做流動相。經 檢測，所得產品中紅澤蘭苷的含量為91. 5%。
[0016] 實施例3: 以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過60目篩，加入料液比為1 :5、90%乙醇溶液，在pH為 5的條件下，加入0. 5%纖維素酶（40u/g)和果膠酶（40u/g)按1 :1混合，酶解3h，酶解完成 后，在溫度為60°C功率為2000W條件下，進行微波提取3次，每次900s，提取液上活性炭層 析柱，先用4倍柱體積、15%乙醇洗脫，再用5倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮 液用正丁醇萃取2次，濃縮液與正丁醇的體積比為I : 1，收集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃縮 液采用高速逆流色譜分離，根據圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。高速逆流色譜分離條件 為：溶劑系統選氯仿、正丙醇、水，混合比例10 :3 :9,取上相做固定相，下相做流動相。經檢 測，所得產品中紅澤蘭苷的含量為92. 2%。
【主權項】
1. 一種紅澤蘭苷的提純工藝，其特征在于包含以下步驟：以紅澤蘭干燥全草為原料， 粉碎，過20~60目篩，加入料液比為1 :3~5、70~90%乙醇溶液，在pH為4~5的條件下，加入 0. 1~0. 5%的纖維素酶和果膠酶按1 :1混合，酶解l~3h，酶解完成后，在溫度為50~60°C下進 行微波提取1~3次，每次300~900s，提取液上活性炭層析柱，先用2~4倍柱體積、10~15%乙 醇洗脫，再用2~5倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮液用正丁醇萃取1~2次，收 集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃縮液采用高速逆流色譜分離，根據圖譜收集流分，流分減壓 干燥即得。2. 如權利要求1所述的一種紅澤蘭苷的提純工藝，其特征在于：所述纖維素酶為 5~40u/g和果膠酶為5~40u/g。3. 如權利要求1所述的一種紅澤蘭苷的提純工藝，其特征在于：所述微波提取功率為 800~2000ff〇4. 如權利要求1所述的一種紅澤蘭苷的提純工藝，其特征在于：所述萃取時，濃縮液與 正丁醇的體積比為1 :〇.5~1。5. 如權利要求1所述的一種紅澤蘭苷的提純工藝，其特征在于：所述高速逆流色譜分 離條件為：溶劑系統選氯仿、正丙醇、水，混合比例5-10 :1-3 :5-9,取上相做固定相，下相做 流動相。
【專利摘要】本發明公開了一種紅澤蘭苷的提純工藝，方法是以紅澤蘭干燥全草為原料，粉碎，過篩，加入乙醇溶液，在酸性的條件下，加入纖維素酶和果膠酶酶解，酶解完成后進行微波提取，提取液上活性炭層析柱，先用2~4倍柱體積、10~15%乙醇洗脫，再用3~5倍柱體積的蒸餾水洗脫，洗脫液減壓濃縮，濃縮液用正丁醇萃取1~2次，收集正丁醇萃取液，減壓濃縮，濃縮液采用高速逆流色譜分離，根據圖譜收集流分，流分減壓干燥即得。本發明所述方法的實用價值和先進性在于，應用本方法所制備的紅澤蘭苷純度高，方法簡便實用，易于工業化生產。
【IPC分類】C07H15/26, C07H1/08
【公開號】CN104926893
【申請號】CN201510270140
【發明人】劉東鋒, 楊成東
【申請人】南京澤朗醫藥科技有限公司
【公開日】2015年9月23日
【申請日】2015年5月26日