一種橄欖苦苷的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于天然植物提取技術領域，涉及一種橄欖苦苷的制備方法。
【背景技術】
[0002]橄欖苦苷是一種重要的苯酚類裂環烯醚萜苷，屬于植物多酚。裂環烯醚萜類化合物是環戊烷單萜衍生物中的一類化合物，一直被認為是木樨欖屬植物化合物分類學上的標記化合物，在多種天然產物生成途徑中顯得尤為重要。橄欖苦苷因含有多個酚羥基，所以具有極強的抗氧化能力，能減輕低密度脂蛋白的氧化程度，預防冠心病、動脈粥樣硬化的發生，也能舒緩血管平滑肌和降低血壓，并有很強的抗菌抗病毒的效果。橄欖苦苷還多用于護膚品中保持肌膚的彈性和柔嫩，防止老化現象，重現肌膚的光滑，抵御由氧化導致的肌膚破壞，國外已有很多知名化妝品中均有添加。
[0003]目前國內研宄橄欖苦苷提取方面的報道較少，主要集中在從植物小葉丁香中提取橄欖苦苷，提取方法多為有機溶劑萃取。國內工業化生產，主要是利用木犀欖屬植物油橄欖葉，采用傳統水提醇沉得到苦苷粗制品。由于物種和環境的差異，橄欖葉中橄欖苦苷含量相差較大，加上傳統提取工藝，有機溶劑消耗大，產品含量低，生產成本較高。
[0004]本發明采用超臨界萃取法提取、大孔吸附樹脂富集與高效逆流色譜分離純化相結合的方法制備橄欖苦苷。該方法溶劑用量少、提取率高，無污染，且工藝簡單、操作方便。
【發明內容】
[0005]本發明要解決的技術問題是提供一種橄欖苦苷的制備方法。
[0006]本發明的目的是通過如下技術方案實現的:
(1)取油橄欖葉干燥、粉碎，置于萃取釜中，以總溶劑體積5%的乙醇為夾帶劑，設置萃取溫度為50~60°C，待溫度穩定后通入CO2氣體，流量為20~30L/h，并調節壓力到30~40MPa，進行萃取2~3h后，收集萃取物；
(2)將所得萃取物濃縮至無醇味，上大孔吸附樹脂，先用2~3BV的蒸餾水洗脫，再用2-3BV的20~30%的乙醇洗脫，后用4~6BV的70~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得濃縮物；
(3)將濃縮物采用高速逆流色譜法分離純化，以氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系統，取上相做固定相、下相為流動相，主機轉速800-1000rpm，流速為3~4mL/min，收集目標流分，回收試劑，真空干燥得產品。
[0007]步驟(2)中所述的大孔吸附樹脂類型為AB-8、D-101、XDA-1中的任意一種。
[0008]步驟(2)中所述的樹脂用量與原料的質量比為1:1。
[0009]步驟(3)中所述的氯仿-甲醇-水體積比為10:5:7。
[0010]本發明的有益效果在于:采用超臨界流體提取，提取時間短、提取效率高，無毒、無味，廉價易得；采用大孔樹脂柱層析富集純化，可除去多種雜質，減輕了后面工序的工作量；采用高速逆流色譜分離效果好，產品純度高。
【具體實施方式】
[0011]實施例1:
取油橄欖葉干燥、粉碎，置于萃取釜中，以總溶劑體積5%的乙醇為夾帶劑，設置萃取溫度為50°C，待溫度穩定后通入CO2氣體，流量為20L/h，并調節壓力到30MPa，進行萃取2h后，收集萃取物；將所得萃取物濃縮至無醇味，上與原料等質量的AB-8大孔吸附樹脂，先用2BV的蒸餾水洗脫，再用2BV的20%的乙醇洗脫，后用4BV的70%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；以氯仿-甲醇-水(10:5:7)為兩相溶劑系統，置于分液漏斗中混合均勻，取上相為固定相，下相為流動相，取上述濃縮物溶于流動相中備用，開啟高速逆流色譜儀，設定流動相流速為3mL/min，同時開啟主機電機，自流動相流出時開始進樣，轉速控制為800rpm，通過檢測器收集橄欖苦苷流分，濃縮并干燥得橄欖苦苷，高效液相檢測含量為88.9%。
[0012]實施例2:
取油橄欖葉干燥、粉碎，置于萃取釜中，以總溶劑體積5%的乙醇為夾帶劑，設置萃取溫度為60°C，待溫度穩定后通入CO2氣體，流量為25L/h，并調節壓力到35MPa，進行萃取3h后，收集萃取物；將所得萃取物濃縮至無醇味，上與原料等質量的XDA-1大孔吸附樹脂，先用3BV的蒸餾水洗脫，再用3BV的25%的乙醇洗脫，后用5BV的75%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；以氯仿-甲醇-水(10:5:7)為兩相溶劑系統，置于分液漏斗中混合均勻，取上相為固定相，下相為流動相，取上述濃縮物溶于流動相中備用，開啟高速逆流色譜儀，設定流動相流速為3.5mL/min,同時開啟主機電機，自流動相流出時開始進樣，轉速控制為lOOOrpm，通過檢測器收集橄欖苦苷流分，濃縮并干燥得橄欖苦苷，高效液相檢測含量為92.3%。
[0013]實施例3:
取油橄欖葉干燥、粉碎，置于萃取釜中，以總溶劑體積5%的乙醇為夾帶劑，設置萃取溫度為55°C，待溫度穩定后通入CO2氣體，流量為30L/h，并調節壓力到40MPa，進行萃取3h后，收集萃取物；將所得萃取物濃縮至無醇味，上與原料等質量的D-101大孔吸附樹脂，先用3BV的蒸餾水洗脫，再用3BV的30%的乙醇洗脫，后用6BV的80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得濃縮液；以氯仿-甲醇-水(10:5:7)為兩相溶劑系統，置于分液漏斗中混合均勻，取上相為固定相，下相為流動相，取上述濃縮物溶于流動相中備用，開啟高速逆流色譜儀，設定流動相流速為4mL/min，同時開啟主機電機，自流動相流出時開始進樣，轉速控制為900rpm，通過檢測器收集橄欖苦苷流分，濃縮并干燥得橄欖苦苷，高效液相檢測含量為87.4%。
【主權項】
1.一種橄欖苦苷的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取油橄欖葉干燥、粉碎，置于萃取釜中，以總溶劑體積5%的乙醇為夾帶劑，設置萃取溫度為50~60°C，待溫度穩定后通入CO2氣體，流量為20~30L/h，并調節壓力到30~40MPa，進行萃取2~3h后，收集萃取物； (2)將所得萃取物濃縮至無醇味，上大孔吸附樹脂，先用2~3BV的蒸餾水洗脫，再用2-3BV的20~30%的乙醇洗脫，后用4~6BV的70~80%的乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得濃縮物； (3)將濃縮物采用高速逆流色譜法分離純化，以氯仿-甲醇-水為兩相溶劑系統，取上相做固定相、下相為流動相，主機轉速800-1000rpm，流速為3~4mL/min，收集目標流分，回收試劑，真空干燥得產品。2.根據權利要求1所述的一種橄欖苦苷的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的大孔吸附樹脂類型為AB-8、D-101、XDA-1中的任意一種。3.根據權利要求1所述的一種橄欖苦苷的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述的樹脂用量與原料的質量比為1:1。4.根據權利要求1所述的一種橄欖苦苷的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述的氯仿-甲醇-水體積比為10:5:7。
【專利摘要】本發明涉及一種橄欖苦苷的制備方法，其步驟如下：1）取油橄欖葉干燥、粉碎，置于萃取釜中，以總溶劑體積5%的乙醇為夾帶劑，設置萃取溫度為50~60℃，待溫度穩定后通入CO2氣體，流量為20~30L/h，并調節壓力到30~40MPa，進行萃取2~3h后，收集萃取物；2）將所得萃取物濃縮至無醇味，上大孔吸附樹脂，乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得濃縮物；3）將濃縮物進行高效逆流色譜分離，得高含量橄欖苦苷。本發明方法樣品損耗少，分離效果好，成本低廉，能得到含量高、品質好的橄欖苦苷。
【IPC分類】C07H17/04, C07H1/08
【公開號】CN104910223
【申請號】CN201510270831
【發明人】劉東鋒, 楊成東
【申請人】南京澤朗醫藥科技有限公司
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年5月26日