一種牛樟芝誘變菌株及培育方法
【專利說明】
[0001]
技術領域： 本發明公開的一種牛樟芝誘變菌株，為一種新的菌株品種，其菌絲體干重及有效成分 腺苷、多糖和三萜化合物的產量和原始菌株相比具有顯著提高，本發明還提供了該菌株的 培育方法，屬于發酵工程技術領域。
[0002]
【背景技術】： 樟芝（Antrodiacamphorata)，又名牛樟芝或牛樟葫，屬于擔子菌綱、非裙菌目、多孔科、 多年生擔子菌，只生長在臺灣地區的牛樟樹腐朽樹干的內壁。牛樟芝在臺灣中醫藥界己使 用多年，普遍認為其氣芳香味辛苦、平。認為具有溫中散結、祜風行氣、活血化疲、解毒消 月中、鎮靜止痛、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、提升免疫力的效果；針對腹灣、胃腸疼痛、食物毒蕈中 毒、糖尿病、脂肪肝、酒精性肝硬化、肝癌等有獨特的功效。牛樟芝有許多的活性成分，如 多糖體、超氧歧化酶、三萜類化合物、腺苷、免疫蛋白、微量元素、維生素、核酸、凝集素、纖維 素、氨基酸等。其中以三萜類化合物高達200種以上使得牛樟芝具有抗癌、保肝等功效。
[0003]
【發明內容】
： 本發明的目的是提供一種牛樟芝誘變菌株，為一種新的菌株，其菌絲體干重及有效成 分腺苷、多糖和三萜化合物的產量和原始菌株相比具有顯著提高。
[0004] 本發明公開了上述菌的培育方法。
[0005] 本發明還提供了牛樟芝誘變菌株培養工藝條件優化。
[0006] 本發明公開的牛樟芝誘變菌株，命名為：牛樟芝AC09 ;Antrodiacamphorata. AC09,該誘變菌株已于2015年5月3日保藏《中國典型培養物保藏中心》，保藏號為：CCTCC NO :M 2015274,根據真菌的系統分類學和鑒定的進化樹表明，菌株屬于非褶菌目，多孔菌 科，薄孔菌屬，多年生覃菌類。
[0007] 本發明所述的高產牛樟芝誘變菌株AC09,其有以下方法誘變選育而制得，以牛樟 芝(ATCC200183)為出發菌株，采用化學誘變處理技術，選育出高產牛樟芝高產突變菌株 AC09〇
[0008] 牛樟芝誘變菌株AC09的特征為：菌絲體干重、腺苷、三萜化合物及多糖的含量均 有明顯提高，其中菌體干重較原出發菌提高了 63. 00 % ;腺苷含量提高了 41. 7% ;三萜化合 物含量提高了 74. 9% ;多糖含量提高了 53. 1%。
[0009] 本發明所述的牛樟芝誘變菌株的誘變方法，包括以下步驟完成： 1) 將牛樟芝菌株ATCC200183,以5%接種量接種至產孢培養基中，產孢培養基的培養 為：葡萄糖 15. 2471g/L，蛋白胨 8. 3179g/L，酵母浸粉 9. 7392g/L，MgSO4 · 7H20 0. 0237g/L和VB10.0 310g/L。26°C恒溫搖床中120rpm培養7天，無菌脫脂棉過濾，得 到孢子懸液； 2) 在無菌條件下取ImL步驟1)中得到的孢子懸液加入IOmLNTG (10mg/mL)中，分別 于誘變〇、1〇、15、2〇111；[11后，取0.31111^孢子懸液于2.71111^無菌蒸餾水中并逐級稀釋，涂布于種 子培養基平板上培養7天，將菌株于96孔板保存； 3) 將培養好的突變株用接種針逐個接種至種子培養基中進行活化，于26°C恒溫搖床中 150rpm培養7天，測定菌絲體干重、腺苷、多糖和三萜化合物含量，以篩選高產突變株。采用 HPLC法測定菌絲體中腺苷和三萜化合物含量；采用蒽銅一硫酸法測定總糖含量。
[0010] 本發明的積極效果在于：通過誘變得到的新牛樟芝菌株，其菌絲體干重及有效成 分腺苷、多糖和三萜化合物的產量和原始菌株相比具有顯著提高。
【附圖說明】
[0011] 圖1為原出發菌株與突變株的有效成分比較； 圖2為葡萄糖濃度和酵母浸粉濃度對D值影響的響應面和等高線圖。
【具體實施方式】
[0012] 實施例1 牛樟芝誘變株AC09的誘變和選育方法 本發明所述獲得高產牛樟芝誘變菌株AC09的誘變方法為亞硝基胍誘變。
[0013] 將牛樟芝菌株ATCC200183,以5%接種量接種至產孢培養基中，產孢培養基的培養 為：葡萄糖 15. 2471g/L，蛋白胨 8. 3179g/L，酵母浸粉 9. 7392g/L，MgSO4 · 7H20 0. 0237g/L和VB10.0 310g/L。26°C恒溫搖床中120rpm培養7天，無菌脫脂棉過濾，得 到孢子懸液； 2) 在無菌條件下取ImL步驟1)中得到的孢子懸液加入IOmLNTG (10mg/mL)中，分別 于誘變〇、1〇、15、2〇111；[11后，取0.31111^孢子懸液于2.71111^無菌蒸餾水中并逐級稀釋，涂布于種 子培養基平板上培養7天，將菌株于96孔板保存； 3) 將培養好的突變株用接種針逐個接種至種子培養基中進行活化，于26°C恒溫搖床中 150rpm培養7天，測定菌絲體干重、腺苷、多糖和三萜化合物含量，以篩選高產突變株。采用 HPLC法測定菌絲體中腺苷和三萜化合物含量；采用蒽銅一硫酸法測定總糖含量。
[0014] 共得到4株高產菌株分別命名為AC03、AC09、AC32和AC49,其中AC09的干重、腺 苷、多糖和三萜化合物含量均高于出發菌株，這四株突變株與出發菌株的有效成分比較見 圖1。選取40)9為高產突變株，命名為 ：牛樟芝40)9(411壯〇(1丨3〇31^11〇四七3.40)9)，該 誘變菌株已于2015年5月3日保藏《中國典型培養物保藏中心》，保藏號為：CCTCC N0:M 2015274,根據真菌的系統分類學和鑒定的進化樹表明，菌株菌株屬于非褶菌目，多孔菌科， 薄孔菌屬，多年生覃菌類。
[0015] 實施例2 牛樟芝誘變株AC09與出發菌株（ATCC200183)比較及遺傳穩定性考察 將原出發菌株（ATCC200183)與誘變菌株AC09分別再種子培養基(葡萄糖25g/L，蛋白 胨 10g/L，酵母浸粉 10g/L，KH2PO4O. 25g/L，MgSO4 · 7Η200· 2g/L，維生素 B1O. Olg/L)中，于 26°C，150rpm，培養7d進行發酵培養，牛樟芝誘變菌株菌絲體干重、腺苷、三萜化合物及多 糖的含量均有明顯提高，其中，菌體體干重達10. 3g/L，較原出發菌提高了 63. 00% ;腺苷含 量可達0. 152g/L，較原出發菌提高了 41.7% ;三萜化合物含量可達0. 126g/L，較原出發菌 提高了 74. 9% ;多糖含量可達31. 3mg/kg，較原出發菌提高了 53. 1%。
[0016] 表1原出發菌株與誘變菌株AC09有效成分含量比較
【主權項】
1. 一株牛樟芝誘變菌株，該誘變菌株已于2015年5月3日保藏《中國典型培養物保藏 中心》，命名為：牛樟芝AC09 ;Antrodia camphorata AC09,保藏號為：CCTCC NO:M 2015274。
2. 權利要求1所述牛樟芝誘變菌株的誘變方法，包括以下步驟完成： 1) 將牛樟芝菌株ATCC200183,以5%接種量接種至產孢培養基中，產孢培養基的培養 為：葡萄糖 15. 2471g/L，蛋白胨 8. 3179g/L，酵母浸粉 9. 7392g/L，MgS04 WH2O 0? 0237g/L 和 VB10.0 310g/L ;26°C恒溫搖床中120rpm培養7天，無菌脫脂棉過濾，得到孢子懸液； 2) 在無菌條件下取ImL步驟1)中得到的孢子懸液加入IOmLNTG (lOmg/mL)中，分別 于誘變〇、1〇、15、2〇1]1；[11后，取0.31]11孢子懸液于2.71]11無菌蒸餾水中并逐級稀釋，涂布于種 子培養基平板上培養7天，將菌株于96孔板保存； 3) 將培養好的突變株用接種針逐個接種至種子培養基中進行活化，于26°C恒溫搖床中 150rpm培養7天，測定菌絲體干重、腺苷、多糖和三萜化合物含量，以篩選高產突變株。
【專利摘要】本發明提供一株牛樟芝誘變菌株，已于2015年5月3日保藏《中國典型培養物保藏中心》，一種命名為：牛樟芝AC09；Antrodiacamphorata AC09，保藏號為：CCTCC NO：M2015274。該誘變菌株的菌絲體干重、腺苷、三萜化合物及多糖的含量均有明顯提高，其中菌體干重較原出發菌提高了63.00%；腺苷含量提高了41.7％；三萜化合物含量提高了74.9%；多糖含量提高了53.1%。CCTCC NO:M201527420150503
【IPC分類】C12N15-01, C12R1-645, C12N1-14
【公開號】CN104877917
【申請號】CN201510294438
【發明人】王迪, 劉燕隔, 王娟, 孟慶繁, 劉艷, 袁莉莎, 滕利榮, 逯家輝, 權宇彤
【申請人】吉林大學
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年6月2日