一種用于痰液標本的星狀諾卡氏菌選擇培養基的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及檢驗微生物培養領域，具體涉及一種用于痰液標本的星狀諾卡氏菌選 擇培養基。
【背景技術】
[0002] 微生物培養是一種用人工方法使微生物生長繁殖的技術，而選擇性培養基是用來 促進或抑制一定類型的生物體(如細胞或細菌等）而設計的培養基，利用這種培養基可以將 所需要的微生物從混雜的微生物中分離出來。星狀諾卡氏菌（Actinomyces印pingeri)是 需氧土壤腐生菌，屬于放線菌的一種，是條件致病菌，該菌廣泛存在于空氣、塵埃、土壤和家 畜體表，通過呼吸系統引起發病，也可經皮膚傷口或外傷創面侵入，引起人的諾卡氏菌病， 星狀諾卡菌主要通過呼吸道引起人的原發性、化膿性肺部感染，可出現肺結核的癥狀。肺部 病灶可轉移到皮下組織，形成膿腫、潰瘍和多發性瘺管，也可擴散到其他器官。臨床癥狀上 與肺結核、肺曲菌病、肺韋格氏肉芽腫相似，很容易誤診。
[0003] 近年來，星狀諾卡氏菌病已不罕見，在有或無免疫異常的人群中均可發生。早期診 斷并早期治療，可100%治愈。若診斷延誤，病死率可達30~50%，因此作為確診唯一依據的臨 床細菌檢查的正確與快速鑒定極為重要。目前，該菌屬的鑒定金標準為PCR鑒定，但是PCR 檢測設備要求和操作成本均較高，因此臨床培養多用普通血瓊脂培養板（BAP)培養。而星 狀諾卡氏菌屬于苛養菌，即對生長環境、營養要求較苛刻的細菌，在普通環境中不能或難以 生長。星狀諾卡氏菌生長緩慢，而痰液標本中金黃色葡萄球菌、肺炎球鏈菌、其他放線菌等 病原菌在目前的培養基上比星狀諾卡氏菌生長更快，很快就覆蓋了培養基，星狀諾卡菌無 法生長，陽性率低，使用傳統方法需要96小時方可有陽性表現，1周左右方能較準確地做出 鑒定，結果延誤時間，造成多處病灶轉移，如轉移至腦部極易造成死亡。
【發明內容】
[0004] 本發明的技術任務是針對以上現有技術的不足，提供一種適合于痰液標本星狀諾 卡氏菌生長的選擇培養基。
[0005] 本發明解決其技術問題的技術方案是：一種用于痰液標本的星狀諾卡氏菌選擇培 養基，其特征在，配制1000ml培養基的配方中含有： 牛肝粉5. 0~15. 0g ; 麥芽浸粉2. 0~5. 0g ; 酵母浸出粉5. 0~10. 0g ; 氯化鈉5. 0g ; 瓊脂 15. 0 ~20. 0g ; 卟啉鐵〇. 01~〇. 〇5g ; 乳酸鈣0. 01~0. 05g ; 萘啶酮酸0. 01~0. 05g ; 毛子草酮〇? 001~〇? 〇〇5g ; 維生素I 0.01~0? lg ; 無菌脫纖維綿羊血80~100ml ; 蒸餾水加至l〇〇〇ml。
[0006] 上述培養基的制備方法為：稱取牛肝粉；麥芽浸粉；酵母浸出粉；氯化鈉；瓊脂； 乳酸鈣；毛子草酮混勻蒸餾水溶解，210°C，滅菌15min，冷卻到45°C，加入滅菌卟啉鐵；滅菌 萘啶酮酸；滅菌維生素K1;無菌脫纖維綿羊血混勻，滅菌蒸餾水定容到1000ml后分裝。
[0007] 優化方案中，每1000ml培養基還含有酪蛋白磷酸肽0. 1~0. 5g。
[0008] 優化方案中，每1000ml培養基還含有天冬酰胺0.01~0.lg。
[0009] 優化方案中，每1000ml培養基還含有濃度200g/L的生地黃水煮液200~300ml。
[0010] 上述優化方案的培養基的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 取生生地黃加水煮沸30-60min，過濾，取濾液，調整體積到濃度為200g/L，得生地 黃水煮液； (2) 稱取牛肝粉；麥芽浸粉；酵母浸出粉；氯化鈉；瓊脂；乳酸鈣；毛子草酮；天冬酰胺 混勻溶于步驟（1)所得的生地黃提取液中混勻，210°C滅菌15min，冷卻到45°C，加入滅菌卟 啉鐵；滅菌萘啶酮酸；滅菌絡蛋白磷酸肽；滅菌維生素K 1;無菌脫纖維綿羊血混勻，滅菌蒸 餾水定容到l〇〇〇ml后分裝。
[0011] 其中：所述的牛肝粉、麥芽浸粉提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白質、氨基酸、 多肽、核苷酸、維生素、生長因子、微量元素等營養成分，為微生物提供均衡營養，這些物質 對促進星狀諾卡氏菌的繁殖和生長都是很重要的因素；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂為 培養基的凝固劑；卟啉鐵為營養劑，為星狀諾卡氏菌繁殖生長提供必需的鐵元素；乳酸鈣 除了做營養增強劑外，還可以抑制革蘭氏陽性菌生長；萘啶酮酸抑制革蘭氏陰性菌的生長； 毛子草酮（2-Ethoxymethylene_3, 5-dihydroxy-y-pyrone)，實驗室研宄表明毛子草酮可以 抑制金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、卡他球菌、白喉桿菌、變 形桿菌、腸炎桿菌等雜菌的生長，但該濃度下由于對諾卡氏菌屬無抗菌抑菌作用，因此提高 了星狀諾卡氏菌的分離率。通過實驗將同一星狀諾卡氏菌接種到2個BAP培養基上，其中 一個BAP培養基添加0. 1%滅菌維生素匕于37°C下培養，48小時后觀察菌株，發現添加維生 素匕的BAP培養基有小的星狀諾卡氏菌菌落，沒有添加維生素k :的BAP培養基未發現星狀 諾卡氏菌菌落，維生素匕促進細胞生長、分化，是星狀諾卡氏菌的生長因子；無菌脫纖維綿 羊血提供能量環境；酪蛋白磷酸肽為激活劑，可以促進星狀諾卡氏菌對鐵元素、鈣元素的攝 取；天冬酰胺為營養強化劑，促進星狀諾卡氏菌對氨基酸的攝取；生地黃為玄參科植物生 地黃的新鮮或干燥塊根，現代醫學研宄表明，生地黃根莖中含有20多種苷類；8種糖類；20 余種氨基酸和20余種無機元素，生地黃水提液是良好的營養強化劑，并且有抑制金黃色葡 萄球菌生長的作用。
[0012] 本發明與現有技術相比較，具有檢出可靠、星狀諾卡氏菌分離率高的特點。
【具體實施方式】
[0013] 以下結合實際情況，對本發明的【具體實施方式】作詳細說明。
[0014] 實施例1，配制1000ml培養基的配方中含有：牛肝粉15. 0g ;麥芽浸粉2. 0g ;酵母 浸出粉5. Og ;氯化鈉5. Og ;瓊脂15. Og ;卟啉鐵0.0 lg ;乳酸鈣0. 05g ;萘啶酮酸0. 05g ;毛子 草酮0.0 Olg ;維生素& 0. lg ;無菌脫纖維綿羊血100ml ;蒸餾水加至1000ml。制備方法稱取 牛肝粉；麥芽浸粉；酵母浸出粉；氯化鈉；瓊脂；乳酸鈣；毛子草酮混勻蒸餾水溶解，210°C， 滅菌15min，冷卻到45°C，加入滅菌卟啉鐵；滅菌萘啶酮酸；滅菌維生素K 1;無菌脫纖維綿羊 血混勻，滅菌蒸餾水定容到l〇〇〇ml后分裝。
[0015] 實施例2,配制1000ml培養基的配方中含有：牛肝粉10. 0g ;麥芽浸粉5. 0g ;酵母 浸出粉8. 0g ;氯化鈉5. 0g ;瓊脂15. 0g ;卟啉鐵0.0 lg ;乳酸鈣0. 03g ;萘啶酮酸0. 03g ;毛子 草酮0. 003g ;維生素& 0.0 lg ;絡蛋白磷酸肽0. lg ;無菌脫纖維綿羊血80ml ;蒸餾水加至 1000ml。制備方法稱取牛肝粉；麥芽浸粉；酵母浸出粉；氯化鈉；瓊脂；乳酸鈣；毛子草酮混 勻，蒸餾水溶解，210°C，滅菌15min，冷卻到45°C，加入滅菌卟啉鐵；滅菌萘啶酮酸；滅菌維 生素k 1;滅菌絡蛋白磷酸肽；無菌脫纖維綿羊血混勻，滅菌蒸餾水定容到1000ml后分裝。
[0016] 實施例3,配制1000ml培養基的配方中含有：牛肝粉15. 0g ;麥芽浸粉3. 0g ;酵母 浸出粉10.〇g ;氯化鈉5. 0g ;瓊脂20. 0g ;卟啉鐵0. 02g;乳酸鈣0. 05g ;萘啶酮酸0. 05 ;毛 子草酮0. 005g ;維生素& 0. 05g ;天冬酰胺0.0 lg ;無菌脫纖維綿羊血90ml ;蒸餾水加至 1000ml。制備方法稱取牛肝粉；麥芽浸粉；酵母浸出粉；氯化鈉；瓊脂；乳酸鈣；毛子草酮； 天冬酰胺混勻，蒸餾水溶解，210°C，滅菌15min，冷卻到45°C，加入滅菌卟啉鐵；滅菌萘啶酮 酸；滅菌維生素K 1;無菌脫纖維綿羊血混勻，滅菌蒸餾水定容