利用葡萄糖生產羥基酪醇的重組大腸桿菌及重組方法及應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物工程技術領域，具體地涉及一種利用葡萄糖生產羥基酪醇的重組 大腸桿菌及重組方法及應用。
【背景技術】
[0002] 羥基酪醇（hydroxytyrosol)，中文名稱：3, 4-二羥基苯乙醇，英文名稱： 3, 4-Dihydroxyphenylethanol。中文別名：2-(3, 4-二羥基苯基）乙醇；羥基酪醇；3, 4-二 羥基苯乙基醇。CAS號：10597-60-1。分子式！C8HltlO3。結構式：
【主權項】
1. 利用葡萄糖生產羥基酪醇的重組大腸桿菌構建方法，其特征是包括如下步驟，以序 列表SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 2為PCR引物，以大腸桿菌BW25113基因組DNA為模板，PCR擴 增HpaBC基因的開放閱讀框架，利用SacI和KpnI雙酶切將HpaBC基因連入載體pTrcHisB， 得到中間質粒pTrcHisB-HpaBC，以pTrcHisB-HpaBC為模板，利用 SEQ ID No. 3、SEQ ID NO. 2 為PCR引物，PCR擴增獲得帶有Trc啟動子的HpaBC基因片段Trc-HpaBC，KpnI單酶切連入 質粒pTrcHisB-AROlO,得到表達載體pTrcHisB-AROlO-HpaBC ;將pTrcHisB-AROlO-HpaBC與 質粒pBb3共轉入大腸桿菌菌株BMGA，得到重組大腸桿菌菌株BMGA (pTrcHisB-AROlO-HpaBC &PbB3)。
2. 權利要求1的方法構建的利用葡萄糖生產羥基酪醇的重組大腸桿菌。
3. 權利要求2的利用葡萄糖生產羥基酪醇的重組大腸桿菌發酵生產羥基酪醇的用途。
【專利摘要】本發明公開了利用葡萄糖生產羥基酪醇的重組大腸桿菌及構建方法及應用，方法為，以SEQ ID NO.1、2為引物，以大腸桿菌BW25113基因組DNA為模板，PCR擴增HpaBC基因，連入載體pTrcHisB，得到中間質粒，以中間質粒為模板，以SEQ ID No.3、2為引物，PCR擴增，連入質粒pTrcHisB-ARO10，得到表達載體pTrcHisB-ARO10-HpaBC并將該載體與質粒pBb3共轉入大腸桿菌菌株BMGA，得到重組大腸桿菌。本發明的重組大腸桿菌含有來自釀酒酵母的ARO10基因及來自大腸桿菌內源的HpaBC基因。能夠顯著提高羥基酪醇的產量。
【IPC分類】C12N15-70, C12R1-19, C12N1-21, C12P7-22
【公開號】CN104805110
【申請號】CN201510242626
【發明人】劉濤, 李曉林, 白艷芬, 畢慧萍, 莊以彬, 馬延和
【申請人】中國科學院天津工業生物技術研究所
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2015年5月13日