一種降低膽固醇的干酪乳桿菌及其生產益生菌酸奶的方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種降低膽固醇干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)Jl及其生產益生 菌酸奶的方法，干粉發酵劑和普通酸奶干粉發酵劑混合發酵生成益生菌酸奶，適用于發酵 乳制品中降膽固醇的益生菌酸奶、益生菌片、微生態制劑的生產。
【背景技術】
[0002] 益生菌（Probiotics)是指一類通過腸道定殖作用改善宿主特定部位微生態平衡 并兼有若干其他有益生理功能的微生物，其通過改善腸道微生物生態平衡，控制腸道感染， 降低血清膽固醇水平，提高乳糖不耐癥人對乳糖的利用，并能刺激特異性或非特異性免疫 反應，具有免疫增強的作用。益生菌制品的活菌應該代謝穩定，活性較強，通過消化道后大 量存活，進入腸道后發揮益生菌作用。目前用于生產益生菌劑的優良菌種有雙歧桿菌屬、乳 桿菌屬、乳球菌屬中的乳酸乳球菌乳酸亞種等。
[0003] 本發明所用干酪乳桿菌J1菌株是從藏靈茹中分離純化出來的一種益生乳酸菌， 可在生長代謝過程中產生大量高活力的膽鹽水解酶，經過體外牛津杯試驗和動物實驗證明 有降低機體血清膽固醇含量的功效。其降低膽固醇機理是緣于干酪乳桿菌J1菌株代謝產 生的膽鹽水解酶炬ileSaltHy化olase，BSH)，B甜是腸道中的雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、乳球 菌屬中的多種乳酸細菌在生長過程中產生的代謝產物。大量實驗證明，膽鹽水解酶能在肝 腸循環中將結合膽鹽分解，產生氨基酸與溶解度較低的游離膽鹽。后者能與膽固醇結合形 成沉淀復合物而排出體外，從而降低血清總膽固醇的含量。早在1963年人們就證實攝取含 有某種乳桿菌或雙歧桿菌發酵的酸奶具有降低血清膽固醇含量的功效。迄今為止，國內外 學者對乳酸菌降膽固醇作用機理的研究尚存在不同觀點，主要集中于W下S點；（1)乳酸 菌菌體細胞直接吸收同化膽固醇；(2)乳酸菌的膽鹽水解酶活性使結合態膽鹽降解為游離 態膽鹽，后者溶解度下降與膽固醇發生共同沉淀作用；（3)其他理論，如吸收同化與共沉淀 聯合作用。
[0004] 國內關于干酪乳桿菌的研究主要是在降血脂、抗高血壓、治療過敏性疾病等 保健功效上，如上海光明乳業股份有限公司申請的"干酪乳桿菌Bd-II菌株及其在降 低血脂方面的應用"，專利申請號為；CN03128995.9 干酪乳桿菌LC2W菌株及其在抗 高血壓方面的應用"，專利申請號為；CN03129450. 2 ;景岳生物科技股份有限公司申請 的"新的微生物株類干酪乳桿菌GM-080及其治療過敏相關疾病的用途"，專利申請 號為；CN200410038566.X。雖然國外關于干酪乳桿菌降低血清膽固醇功效的研究也 有--項專利報道：Lactobacilluscaseibd-IIstainandusedtoreduceblood cholesterol(20060127380)，但是，目前國外有關干酪乳桿菌產膽鹽水解酶的內容尚無專 利報道。雖然國內有一項"含羅伊氏乳桿菌的功能性酸奶及其制作方法（200310112715. 8)" 的專利報道，但是國內有關利用降膽固醇及高產膽鹽水解酶的干酪乳桿菌應用于益生菌酸 奶的生產尚未見相關文獻報道和專利報道。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種降低膽固醇干酪乳桿菌J1及其生產益生菌酸奶的方 法。
[0006] 本發明的技術方案是：一種降低膽固醇的干酪乳桿菌（LactobacilluscaseUjl， 分離普通家庭的藏靈茹（又稱開菲爾粒）中，具有優異的產膽鹽水解酶及耐受胃腸道逆環 境特性，可W調節腸道菌群的平衡，并有降低血清膽固醇等益生保健功效，該菌株已于2006 年9月11日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、，保藏地址為；北京市 朝陽區大屯路，保藏號；CGMCCNo. 1808。
[0007] 本發明制備益生菌酸奶是由具有高效降低膽固醇及產膽鹽水解酶的干酪乳桿菌 (Lactobacilluscasei)Jl干粉發酵劑和普通酸奶干粉發酵劑制得。
[0008] -種利用降膽固醇的干酪乳桿菌J1生產益生菌酸奶的方法，采用直投法添加干 粉發酵劑生產益生菌酸奶的工藝為；在發酵溫度為37~43°C，發酵時間為6~化，庶糖添 加量為5%~8% (W/V，質量體積比濃度）前提下，干酪乳桿菌J1菌株干粉發酵劑接種量為 1%。（W/V，質量體積比濃度），普通酸奶干粉發酵劑的接種量為1%。（W/V，質量體積比濃度）， 干酪乳桿菌J1菌株干粉發酵劑與普通酸奶干粉發酵劑的接種比例為1:1 (W/W，質量分數）。
[0009] 所述方法中，普通酸奶干粉發酵劑為市售保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的混合菌 粉。
[0010] 本發明的效果是：添加干酪乳桿菌J1的干粉發酵劑制備的益生菌酸奶具有良好 的降低血清膽固醇功效。在不改變普通酸奶發酵工藝基礎上，既可利用J1菌株產膽鹽水 解酶特性制備降低血清膽固醇的酸奶，又解決了酸奶乳清析出問題，還降低了酸奶后酸化 程度，提高了酸奶黏度，產品在4°C條件下貶存21天后干酪乳桿菌J1的活菌數量可達到 106CFU/gW上，仍具有保健功能。
[0011] 本發明制作益生菌酸奶的原料來源方便，發酵工藝簡單，發酵周期短，操作簡單， 對設備要求低，成本較低，適于工業化生產。
[0012] 下面結合附圖和實施例對本發明做進一步的說明。
【附圖說明】
[0013] 附圖是應用干酪乳桿菌J1(Lactobacilluscasei)Jl和普通酸奶干粉發酵劑生產 益生菌酸奶工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0014] 下述實施例對本發明作進一步說明而不限制本發明的保護范圍。
[0015] 下述實施例中的實驗方法，如無特別說明，均為常規方法。
[0016] 下述實施例中的百分含量，如無特別說明，均為質量體積比濃度（W/V)。
[0017] 一種降低膽固醇的干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)Jl，分離普通家庭的藏靈 茹（又稱開菲爾粒）中，具有優異的產膽鹽水解酶及耐受胃腸道逆環境特性，可W調節腸道 菌群的平衡，并有降低血清膽固醇等益生保健功效，該菌株已于2006年9月11日保藏于中 國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中屯、，保藏號；CGMCCNo. 1808。
[0018] 本發明制備益生菌酸奶是由具有高效降低膽固醇及產膽鹽水解酶的干酪乳桿菌 (Lactobacilluscasei)Jl干粉發酵劑和普通酸奶干粉發酵劑制得。
[0019] 一種利用降膽固醇的干酪乳桿菌J1生產益生菌酸奶的方法，采用直投法添加干 粉發酵劑生產益生菌酸奶的工藝為；在發酵溫度為37~43°C，發酵時間為6~化，庶糖添 加量為5%~8% (W/V，質量體積比濃度）前提下，干酪乳桿菌J1菌株干粉發酵劑接種量為 1%。（W/V，質量體積比濃度），普通酸奶干粉發酵劑的接種量為1%。（W/V，質量體積比濃度）， 干酪乳桿菌J1菌株干粉發酵劑與普通酸奶干粉發酵劑的接種比例為1:1 (W/W，質量分數）。
[0020] 所述方法中，普通酸奶干粉發酵劑為市售保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的混合菌 粉。
[0021] 附圖中，應用干酪乳桿菌J1(Lactobacilluscasei)Jl和普通酸奶干粉發酵劑生 產益生菌酸奶工藝流程，包括下列步驟：
[0022] (1)原料乳：制作酸奶的原料乳要求不含抗生素和消毒藥，菌數低于1〇4個/mL。
[0023] (2)凈化；W離屯、機除去牛乳中的白細胞和其他肉眼可見的雜質。
[0024] (3)標準化；原料乳的主要成分指標應符合食品衛生國家標準GB5408-85。其總 干物質應不低于11. 5%，脂肪含量1.0%~3. 2%。
[002引 （4)預熱、配料和過濾：將原料乳加熱至60°C左右，加入5%~8% (W/V，質量體積 比濃度）的庶糖，溶解后過濾除雜。
[002引 妨均質；在均質機中于8~lOMPa壓力下對預熱的原料乳進行均質處理。
[0027](6)殺菌；將原料乳加熱至90~95°C，保溫5~lOmin。
[0028](7)冷卻；經殺菌后的原料乳迅速冷卻至37~43°C，待接種。
[002引 做接種；干酪乳桿菌J1菌株干粉發酵劑接種量為1.0%。（W/V，質量體積比濃 度），普通酸奶干粉發酵劑的接種量為1. 0%。（W/V，質量體積比濃度），干酪乳桿菌J1菌株 干粉發酵劑與普通酸奶干粉發酵劑的接種比例為1:1 (W/W，質量分數）。
[0030] (9)分裝；分裝于塑料小容器的操作應在無菌室中快速進行。
[0031] (10)保溫發酵；將塑料小容器置于發酵室中保持發酵溫度37~43°C，發酵時間為 6 ~3h。
[003引 山）冷卻；從發酵室取出，冷卻至1(TC臥下。
[003引冷藏與后熟；經冷卻處理的酸奶，貶藏于0~5°C冷藏室中保存，直至飲用。 [0034] 1、利用降膽固醇的干酪乳桿菌J1在益生菌酸奶中應用實驗
[00巧](1)、干酪乳桿菌J1干粉發酵劑添加量對酸奶后酸化的影響
[0036] 在普通酸奶干粉發酵劑接種量為1. 0%。的前提下，干酪乳桿菌J1干粉發酵劑添加 量分別為1. 〇%。、1. 5%。、2. 0%。，經過37~43°C發酵6~化后，用0.Imol/LNaOH溶液測定 干酪乳桿菌J1干粉發酵劑添加量為1. 〇%。、1. 5%。、2. 0%。貶藏至第ld、W、l如、21d的酸奶酸 度，并W未添加干酪乳桿菌J1干粉發酵劑的普通酸奶為對照組，單位W吉爾涅耳度（°T) 表不，結果見表1。
[0037] 表1不同干酪乳桿菌J1干粉發酵劑添加量對酸奶后酸化的影響
[0038]
【主權項】
1. 一種降低膽固醇的干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)Jl，分離普通家庭的藏靈葫 中，具有優異的產膽鹽水解酶及耐受胃腸道逆環境特性，可以調節腸道菌群的平衡，并有降 低血清膽固醇等益生保健功效，該菌株已于2006年9月11日保藏于中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心，保藏號：CGMCCNo. 1808。
2. -種利用如權利要求1所述的降低膽固醇的干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)Jl 生產益生菌酸奶的方法，其特征在于：發酵溫度為37~43°C，發酵時間為6~3h，蔗糖添加 量為5%~8%，益生干酪乳桿菌Jl菌株干粉發酵劑接種量為1 %。，普通酸奶干粉發酵劑的 接種量為1%。，干酪乳桿菌Jl菌株干粉發酵劑與普通酸奶干粉發酵劑的接種比例為1:1。
3. -種如權利要求2所述的利用降低膽固醇的干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)Jl 生產益生菌酸奶的方法，其特征在于：干酪乳桿菌Jl益生菌酸奶，經動物實驗證實具有良 好的降低血清膽固醇功效，可作為功能食品開發應用。
【專利摘要】一種降低膽固醇干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)J1。技術方案是：干酪乳桿菌(Lactobacillus casei J1)分離篩選自普通家庭的藏靈菇(又稱開菲爾粒)，并已于2006年9月11日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其保藏號為：CGMCC No.1808。本發明還公開了利用干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)J1生產益生菌酸奶的方法。在不改變普通酸奶發酵工藝基礎上，既可利用J1菌株產膽鹽水解酶特性制備降低血清膽固醇的酸奶，又解決了酸奶乳清析出問題。本發明制作的益生菌酸奶的發酵工藝簡單，發酵周期短，成本較低，適于大規模工業化生產。CGMCC No. 180820060911
【IPC分類】C12N1-20, A23C9-123, C12R1-245
【公開號】CN104774783
【申請號】CN201510090444
【發明人】白永強, 劉慧 , 張紅星, 高鵬飛, 熊利霞, 張晶, 謝遠紅, 高秀芝, 金君華
【申請人】北京和美科盛生物技術有限公司
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年2月28日