一種新型酶制超低分子肝素的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及一種新型超低分子肝素，具體而言是設及使用來源于 成Ai略施e如(9/7e/7S6細菌的新型肝素酶SDhepII降解肝素獲得的超低分子肝 素產物，W及其制備和應用。
【背景技術】
[0002] 肝素于1916年被發現，后來被廣泛用于臨床抗凝血。過程中標準肝素為第一代產 品，低分子肝素為第二代產品，當前低分子肝素已取代大部分標準肝素市場。而創新藥物研 發正向第S代產品--超低分子肝素發展。
[000引肝素能與血漿白蛋白、血小板、巨瞻細胞、內皮細胞等結合，引起患者血小板減少、 骨質疏松、出血等一系列副作用。該些副作用大多是因為糖鏈過長引起（化iticalReviews ;[]1〇]1(3〇1〇肖7/化1]131:〇1〇肖7 2013;88:1-18)，故可考慮將肝素分子量減小。
[0004] 肝素抗凝血有兩條路徑；一方面通過活性中屯、的核屯、戊糖序列與抗凝血酶（AT) 結合，促進AT與凝血因子Xa結合從而抗凝血；另一方面，當肝素糖鏈> 18個糖單元， 即分子量大于5400化時，能促進AT與Ila結合，發揮抗凝血活性（T虹ombosisClinic 2008;2:8-21)。
[0005] 因此，在活性中屯、保留完整而分子量足夠小的情況下，肝素抗凝血過程中出現副 作用的風險小。此時一般抗巧a效價高而抗Flla效價低。
[0006] 基于此，低分子肝素被發明，臨床應用證明低分子肝素具強抗凝血作用且副作 用減少，低分子肝素迅速占領市場。目前有依諾肝素、達肝素、亭扎肝素、舍托肝素、那 曲肝素等（CriticalReviewsinOncology/Hematology2013; 88:1-18)，平均分子量 4500-6000Da，抗巧a/抗Flla效價在2-5。分子量減小使得抗Flla效價大幅度降低，而抗 巧a效價有所降低，則是由于制備過程中活性中屯、受到破壞導致。
[0007] 超低分子肝素是新一代產品，指平均分子量<4000Da，擁有更高的抗巧a/抗Flla 效價比的低分子肝素。抗凝血優于低分子肝素，而出血和血小板減少癥等副作用更小。
[000引 目前已報道的超低分子肝素主要有S種（T虹ombosisResearch2011; 127:292-298)，分別是由ROVI公司研發的RO-14和Bemiparin、由賽諾菲-安萬特研 發的Semuloparin，其具體特性如下表所示；
【主權項】
1. 一種新型超低分子肝素，其特征在于該新型超低分子肝素由肝素酶SDhepII降解肝 素得到。
2. 如權利要求1所述的超低分子肝素，其特征在于分子量分布在600Da-3800Da區間范 圍內。
3. 如權利要求1所述的超低分子肝素，其特征在于抗FXa效價大于150IU/mg。
4. 如權利要求1所述的超低分子肝素，其特征在于抗FIIa效價小于3IU/mg。
5. 如權利要求1所述的超低分子肝素，其制備方法包括以下步驟： (1) 將肝素配成質量百分比為2-10%的水溶液，加入氯化鈣1-lOOmM，溶解； (2) 向步驟（1)所述的肝素溶液中按1-10IU/g比例加入肝素酶SDh印II，降解反應 12-48小時； (3) 向步驟（2)所述得到的降解液加入質量百分比為1-5%氯化鈉，溶解后用截留分子 量1-5萬的超濾膜過濾； ⑷向步驟⑶得到的溶液中加入1-1. 8倍重的乙醇，沉淀靜置6-18小時，傾去上清 液； (5)將步驟（4)得到的沉淀于60-75°C烘干。
6. -種新型超低分子肝素，具有獨特抗凝血特性，可作為活性成分用于抗凝血藥物的 制造。
【專利摘要】本發明公開了一種新型超低分子肝素，使用從Sphingobacterium daejeonense細菌中得到的肝素酶SDhepⅡ，降解肝素、超濾分離、乙醇沉淀等步驟最終得到。這種超低分子肝素在抗凝血方面具有特異性，有望成為臨床抗凝血藥物的活性組分。
【IPC分類】C12P19-26, A61P7-02, C08B37-10
【公開號】CN104774279
【申請號】CN201510135193
【發明人】馬小來, 李鋰, 白佳珂, 張紫恒
【申請人】深圳市海普瑞藥業股份有限公司
【公開日】2015年7月15日
【申請日】2015年3月26日