用于具有抑菌作用的生物發酵麩皮的工業化生產 及相關領域中，應用前景十分廣闊。
【具體實施方式】
[0026] 下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但并不因此將本發明限制在所述的實 施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商 品說明書選擇。本發明中所述的"室溫"是指進行試驗的操作間的溫度，一般為15~25°C。 實施例中所使用的試劑若未加說明，均為分析純試劑，購買自國藥集團。
[0027] 實施例1生物發酵麩皮的制備與抑菌活性的檢測
[0028] 1、材料與方法
[0029] 種子（發酵菌種）的制備：將類芽孢桿菌（Paenibacillus sp.)(所述類芽孢桿菌 的保藏編號為CGMCC No. 8333,該菌株的來源請參見公開號為CN 103740618A的中國專利） 的凍干粉用少量無菌蒸餾水溶解，用接種環取一環劃線于TYC固體培養基（購買自0X0ID Co.，英國），30°C好氧培養48h取出，用接種環挑取單菌落放入10mL TYC液體培養基（購買 自OXOID Co.，英國），運用渦旋震蕩器將菌落均勻分散于液體培養基內，30°C、180rpm震蕩 培養24h取出，以2% (體積百分比）接種量接種于TYC液體培養基（購買自OXOID Co.， 英國），30°C、180rpm震蕩培養24h后，培養物15, OOOrpm離心10分鐘，棄去上清，菌體用無 菌蒸餾水洗滌2次后，用原培養體積的無菌蒸餾水懸浮，得到發酵用的種子。
[0030] 小麥麩皮購買自山東荷澤（淘寶店名：黃河灘農戶人家，http://item.taobao. com/item.htm?spm=a230r.1.14. 34. 6aY7qR&id= 23590856555&ns=l&abbucket= 5#detail)〇
[0031] 指示菌株：金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus)CGMCC1. 879、藤黃微球菌 (Micrococcusluteus)CGMCC1. 1848、單增李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes)CGMCC 1. 9136,以上指示菌株都購自CGMCC。
[0032]指示菌液的制備：將金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)、藤黃微球菌 (Micrococcus luteus)、單增李斯特氏菌（Listeria monocytogenes)的凍干粉用少量無菌 蒸餾水溶解，用接種環取一環劃線于LB固體培養基（購買自OXOID Co.，英國），30°C好氧 培養48h取出，用接種環挑取單菌落放入10mL LB液體培養基（購買自OXOID Co.，英國）， 運用渦旋震蕩器將菌落均勻分散于液體培養基內，30°C、180rpm震蕩培養24h取出，以2 % (體積百分比）接種量接種于LB液體培養基（購買自OXOID Co.，英國），30°C、180rpm震 蕩培養20h后，即得相應的指示菌液。
[0033] 指示平板的制備：將上述方法制備的指示菌液進行稀釋，使其細菌濃度約為 107cfu/mL，以體積比1 :150的比例吸取稀釋的指示菌液注入45°C無菌LB固體培養基中， 充分混勻后迅速倒平板，待平板凝固且表面水分蒸發完全后即可。
[0034] 抑菌活性的檢測方法：以點種法在指示平板上滴加20yL待測樣品，置于30°C培 養20h后測量并記錄抑菌圈直徑。
[0035] 發酵培養基的制備：將小麥麩皮與蒸餾水按所需比例混合均勻，118 °C滅菌 15min，冷卻至室溫，即得無菌的發酵培養基。
[0036] 2、生物發酵麩皮的制備
[0037] 將類芽抱桿菌（Paenibacillus sp. )CGMCC No. 8333菌株以5% (體積百分比）接 種量接種于無菌的麩皮培養基中，25°C好氧培養72h獲得發酵物，將上述發酵物于100°C烘 干，即得生物發酵麩皮A。其中，麩皮培養基的料液比為1 :1. 5,所述的料液比為麩皮與水的 質量比。
[0038] 3、生物發酵麩皮抑菌活性的檢測
[0039] 向生物發酵麩皮A加入無菌蒸餾水配制成50mg/mL的發酵麩皮溶液，混合均勻后， 15, OOOrpm離心10min取上清，測定其抑菌活性。結果如下表所示：
[0040] 表1生物發酵麩皮的抑菌效果
【主權項】
1. 一種具有抑菌作用的生物發酵麩皮的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以 下步驟： (1) 將類芽孢桿菌（Paenibacillussp.)接種于麩皮培養基中，好氧培養獲得發酵物； (2) 將步驟（1)所得發酵物烘干即得。
2. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述類芽孢桿菌的保藏編號為 CGMCCNo. 8333。
3. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述麩皮培養基的料液比為 1 :1~I:1. 5,所述的料液比為麩皮與水的質量比。
4. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述的類芽孢桿菌的接種量 為1~5%，所述百分比為體積百分比，所述好氧培養的溫度為25°C~37°C，所述好氧培養 的時間為72小時~120小時。
5. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述的烘干的溫度為80°C~ KKTC0
6. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述的類芽孢桿菌的接種量 為2~4%，所述百分比為體積百分比，所述好氧培養的溫度為30°C~35°C，所述好氧培養 的時間為96小時~118小時。
7. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1)所述的類芽孢桿菌的接種量為 3%，所述百分比為體積百分比，所述好氧培養的溫度為33°C，所述好氧培養的時間為98小 時。
8. 如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（2)所述的烘干的溫度為85°C~ 95。。。
9. 如權利要求1~8任一項所述的制備方法所得具有抑菌作用的生物發酵麩皮。
10. 如權利要求9所述的具有抑菌作用的生物發酵麩皮在制備功能性動物飼料中的應 用。
【專利摘要】本發明公開了一種具有抑菌作用的生物發酵麩皮及其制備方法和應用。其中所述具有抑菌作用的生物發酵麩皮的制備方法包括以下步驟：(1)將類芽孢桿菌(Paenibacillus sp.)接種于麩皮培養基中，好氧培養獲得發酵物；(2)將步驟(1)所得發酵物烘干即得。本發明所述制備方法采用固態發酵方法，菌種與原料單一，工藝簡單，成本低廉，有利于發酵麩皮品質的標準化與工業大規模生產的成本控制。本發明制備所得具有抑菌作用的生物發酵麩皮用于動物飼料產業后可有效緩解甚至可以從根本上改變現有動物養殖行業抗生素濫用的現狀。
【IPC分類】A23K1-16, C12P21-00
【公開號】CN104762350
【申請號】CN201510174003
【發明人】韓瑨, 郭本恒, 吳正均, 高彩霞, 劉振民
【申請人】光明乳業股份有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年4月13日