一種核酸提取方法及核酸提取試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明生物化學領域，尤其涉及一種核酸提取方法及核酸提取試劑盒。
【背景技術】
[0002] 近年來，核酸DNA提取方法研宄的發展將趨于用非有機溶劑提取法替代傳統的有 機溶劑提取；實現一步提取法，省去繁瑣的提取和多次離心過程，更適于批量操作；利用物 理吸附法，操作簡便、提取效率高、對基因組DNA沒有損傷作用，適宜于自動化操作；提取過 程自動化，把基因組DNA的提取與其他分子生物學技術（毛細細管電脈，PCR，基因芯片技術 等）結合起來，實現從樣品處理到基因分析過程的全部自動化操作。
[0003] 核酸DNA提取常用方法主要：酚-氯仿抽提法、堿抽提法、CTAB抽提法、硅基質離 心柱法、磁珠法和Chelex-100法。
[0004] 當檢材較少時或者基因分型只需要少量的DNA時，一般采用Chelex-100提取方法 提取。
[0005] 但是，Chelex-100提取方法中螯合樹脂Chelex-100的配制和加入不易操作且難 以控制，同時螯合樹脂溶液長期儲存會導致性能下降，不利于實際應用。
【發明內容】
[0006] 本發明提供了一種核酸提取方法及核酸提取試劑盒，結構簡單，易于操作。
[0007] 另外，本發明一種核酸提取方法及核酸提取試劑盒簡化了核酸提取的流程，有效 減少核酸提取過程中核酸的損失。
[0008] 同時，由于采用預裝螯合樹脂的方法，螯合樹脂的加入量準確易控制，成本低，有 利于推廣應用。
[0009] 本發明提供的核酸提取試劑盒包括管體、管蓋和預裝到管體中的螯合樹脂，所述 管蓋與所述管體采用螺紋、樞軸或折頁連接。
[0010] 優選的，所述管體由圓柱體和圓錐體兩部分構成，所述圓錐體的底部為弧形球面。
[0011] 優選的，所述核酸提取試劑盒的容量為l-2ml。
[0012] 優選的，所述核酸提取試劑盒還包括甘油或PVP，所述螯合樹脂為聚苯乙烯二乙烯 基苯和甘油或PVP的懸濁液，經干燥處理附著于管體底部。
[0013] 優選的，所述螯合樹脂的添加量為0. 001-0. 12g。
[0014] 本發明還提供一種核酸提取方法，所述核酸提取方法使用前述核酸提取試劑盒提 取核酸，包括：
[0015] 將細胞樣本加入到所述核酸提取試劑盒中，第一次離心；
[0016] 除去第一上清液，加入裂解緩沖液；
[0017] 加熱使細胞膜破裂，蛋白質變性；
[0018] 第二次離心；
[0019] 分離得到第二上清液。
[0020] 優選的，所述第一次離心的速率為10000轉/分-15000轉/分，離心時間為3-10 分鐘。
[0021] 優選的，所述裂解緩沖液的添加量為30-60 y L。
[0022] 優選的，所述第二次離心的速率為10000轉/分-15000轉/分，離心時間為1-5 分鐘。
[0023] 優選的，所述裂解緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液，pH為11-12,使用量為 10-200ul〇
[0024] 從以上技術方案可以看出，本發明實施例具有以下優點：本發明核酸提取試劑盒 包括管體、管蓋和預裝到管體中的螯合樹脂，所述管蓋與所述管體采用螺紋、樞軸或折頁連 接，結構簡單，操作容易，提取的DNA用于PCR反應的效果好。另外，本發明一種核酸提取方 法及核酸提取試劑盒簡化了核酸提取的流程，有效減少核酸提取過程中核酸的損失。同時， 由于采用懸浮液（包含甘油或PVP)稀釋螯合樹脂方法，螯合樹脂的加入量準確易控制，成 本低，有利于推廣應用。
【附圖說明】
[0025] 為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現 有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發明的實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據 提供的附圖獲得其他的附圖。
[0026] 圖1為本發明實施例核酸提取試劑盒與現有核酸提取試劑盒定量PCR擴增管家基 因片段效果對比；
[0027] 圖2為本發明實施例核酸提取試劑盒10個樣本提取核酸定量PCR擴增曲線圖；
[0028] 圖3為現有核酸提取試劑盒10個樣本提取核酸定量PCR擴增曲線圖；
[0029] 圖4為本發明實施例核酸提取試劑盒10個樣本提取核酸定量PCR熔解曲線圖； [0030] 圖5為現有核酸提取試劑盒10個樣本提取核酸定量PCR熔解曲線圖；
[0031] 圖6為Gapdh引物qPCR擴增靈敏度驗證圖；
[0032] 圖7為Gapdh引物標準曲線結果圖；
[0033] 圖8為本發明實施例核酸提取試劑盒與現有核酸提取試劑盒提取核酸濃度效果 對比。
【具體實施方式】
[0034] 本發明提供了一種核酸提取試劑盒，結構簡單，易于操作，能夠快速簡便地提取細 胞中的核酸。
[0035] 將螯合樹脂直接加入到小管中，制成核酸提取試劑盒，直接加入細胞樣本，離心， 離心后去上清，加入配制好的pH確定的裂解緩沖液，混勻，加熱使得細胞膜破裂，蛋白質變 性，離心分離得到上清液。本發明實施例方法可以快速完成核酸的提取。本發明核酸提取 試劑盒結構簡單，易于操作，有效減少核酸提取過程中核酸的損失。
[0036] 或者，將螯合樹脂用懸浮液（包含甘油或PVP)稀釋螯合樹脂方法，加入到小管中， 經干燥處理制成核酸提取試劑盒，加入細胞樣本，離心，離心后去上清，加入配制好的pH 確定的裂解緩沖液，混勻，加熱使得細胞膜破裂，蛋白質變性，離心分離得到上清液。本發明 核酸提取方法可以快速完成核酸的提取，試劑盒結構簡單，易于操作，提取的DNA用于PCR 反應的效果好。同時，由于懸浮液（包含甘油或PVP)稀釋螯合樹脂方法，螯合樹脂的加入 量準確易控制，成本低，有利于推廣應用。
[0037] 如圖1-8和表1-3所示，本發明核酸提取試劑盒與DNA純化試劑盒比較，同樣樣本 量提取核酸的量更高（提取DNA濃度比對比試劑盒高1倍，如表3及圖8所示），提取DNA 用于PCR反應的效果更好，但本發明核酸提取試劑盒結構簡單，生產成本為現有核酸提取 試劑盒的25%，遠低于現有DNA純化試劑盒，有利于推廣應用。
[0038] 表1本發明核算提取試劑盒與現有核酸提取試劑盒對比
【主權項】
1. 一種核酸提取試劑盒，其特征在于，所述核酸試提取劑盒包括管體、管蓋和預裝到管 體中的螯合樹脂，所述管蓋與所述管體采用螺紋、樞軸或折頁連接。
2. 根據權利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述管體由圓柱體和圓錐體 兩部分構成，所述圓錐體的底部為弧形球面。
3. 根據權利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述核酸提取試劑盒的容量 為l_2ml〇
4. 根據權利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述核酸試提取劑盒還包括 甘油或PVP，所述螯合樹脂為聚苯乙烯二乙烯基苯和甘油或PVP的懸濁液，經干燥處理附著 于所述管體底部。
5. 根據權利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述螯合樹脂的添加量為 0. 001-0. 12g〇
6. -種核酸提取方法，其特征在于，所述核酸提取方法使用權利要求1-5任一項所述 的核酸提取試劑盒提取核酸，包括： 將細胞樣本加入到所述核酸提取試劑盒中，第一次離心； 除去第一上清液，加入裂解緩沖液； 加熱使細胞膜破裂，蛋白質變性； 第二次離心； 分離得到第二上清液。
7. 根據權利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述第一次離心的速率為10000 轉/分-15000轉/分，離心時間為3-10分鐘。
8. 根據權利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述裂解緩沖液的添加量為 30_60 u L0
9. 根據權利要求1所述的核酸提取方法，其特征在于，所述第二次離心的速率為10000 轉/分-15000轉/分，離心時間為1-5分鐘。
10. 根據權利要求6所述的核酸提取方法，其特征在于，所述裂解緩沖液為三羥甲基氨 基甲烷緩沖液，pH為11-12,使用量為10-200ul。
【專利摘要】本發明公開了一種核酸提取試劑盒，結構簡單，易于操作。本發明提供的核酸提取試劑盒，所述核酸提取試劑盒包括管體、管蓋和預裝到管體中的螯合樹脂，所述管蓋與所述管體采用螺紋、樞軸或折頁連接，結構簡單，操作容易，提取的DNA用于PCR反應的效果好。本發明還提供一種核酸提取方法，簡化了核酸提取的流程，有效減少核酸提取過程中核酸的損失。同時，由于采用懸浮液(包含甘油或PVP)稀釋螯合樹脂方法，螯合樹脂的加入量準確且易控制，成本低，有利于推廣應用。
【IPC分類】C12N15-10
【公開號】CN104762297
【申請號】CN201510218707
【發明人】范靜彥, 周榮華, 李必松
【申請人】廣州鴻琪光學儀器科技有限公司
【公開日】2015年7月8日
【申請日】2015年4月30日