一種在體評估鵝羽毛/絨產量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種在體評估鵝羽毛/絨產量的方法，主要涉及畜牧學和分子生物學 領域。
【背景技術】
[0002] 中國是水禽生產大國，水禽產品的消費量居世界之首，養禽業在畜牧業中發展迅 速，而養鵝生產又是養禽業中發展最快的產業之一。2014年，我國鵝存欄量達1. 7億只，出 欄量接近6. 29億只。鵝羽絨作為副產品，具有輕松、柔軟、抗寒、防潮和保暖等特點。我國每 年鵝毛/絨產量約5萬噸，占世界的60%，其中2/3出口，創匯10. 5億美元，總產值超過200 億元。我國羽絨服產量從2005年的1.59億件增長至2013年2. 96億件，普及率為10%， 日本、歐美等國家羽絨普及率已達30-70%。因此，未來中國羽絨發展將面臨巨大的市場空 間。
[0003] 鵝羽毛/絨產量個體差異大，以中型鵝種為例，每只成年鵝平均產羽毛/絨 180-400g。吉林農業大學開展了吉林白鵝絨用配套系選育研宄，歷經12年，選育出絨用吉 林白鵝專門化品系1個，100日齡活拔羽毛量116. 5g，含絨率31. 8%。皖西白鵝在選育前每 只鵝羽毛平均產量為250-400g。可見，采用常規育種技術難以快速提高鵝羽毛/絨產量。種 用鵝可采用活拔羽絨技術，以評估留種效果，但對鵝體的損傷和刺激大，另外配套商品代鵝 仍然只能在屠宰后計算鵝毛/絨產量。因此，迫切需要一種新的技術，可以實現活體有效評 價鵝羽毛/絨產量和活拔羽毛/絨后的再生狀況，以加快鵝絨用品系選育世代進展，并能快 速、有效的評估商品鵝羽毛/絨產量。目前，通過獲得畜禽經濟性狀的功能基因及其標記， 并利用其來加速畜禽重要經濟性狀的育種進展是動物遺傳育種領域的重要創新。
【發明內容】
[0004] 本發明要解決的技術問題是提供一種在體評估鵝羽毛/絨產量的方法，可以通過 簡單的PCR擴增和酶切確定待測鵝的基因型，TT基因型鵝的羽毛/絨產量顯著高于AA基 因型和AT基因型（P < 0. 05)，根據檢測結果以TT基因型的鵝進行育種可獲得候選的高產 羽毛/絨鵝品系。
[0005] 本發明是通過以下技術方案來實現的。
[0006] 一種在體評估鵝羽毛/絨產量的方法，步驟包括：
[0007] (1)提取待測鵝的基因組DNA ;
[0008] (2)以待測鵝基因組DNA為模版，以
[0009] F ：ACCACAGAAGAAGCCAGCT；
[0010] R：GTCCAGGATCCAGTGCCTTT；
[0011] 為引物對，進行PCR擴增，Taa I限制性內切酶酶切PCR擴增產物；
[0012] (3)檢測限制性內切酶酶切產物的大小，若酶切產物含有一條DNA片段，不小于 l〇〇bp，則待測鵝為AA基因型；若酶切產物含有二條DNA片段，均小于100bp，則待測鵝為TT 型；若酶切產物含有三條DNA片段，分別有不大于lOObp和小于lOObp，則待測鵝為AT基因 型。
[0013] 而對于不同基因型，TT基因型的羽毛/絨產量和活拔羽毛后的再生速度優于所述 AA基因型，表現為羽毛/絨品質好、鵝毛再生速度快等。
[0014] 進一步地，（2)中使用瓊脂糖凝膠電泳檢測Taa I限制性內切酶酶切產物大小的 方法。
[0015] 進一步地，（2)中的PCR擴增體系為：總體系20yL，cDNA模板50ng，Premix TaqlOyL，引物各10ng，其余用超純水補齊。PCR擴增條件：95°C預變性5min ;35個循環： 94°C，變性30s，退火30s，72°C延伸30s ;最后72°C延伸10min，4°C保存。
[0016] 本發明的有益效果：
[0017] 方法簡單易行，檢測結果準確，精確度高，能很快地選出高產羽毛/絨的鵝品系。 通過本發明所述方法選出高產羽毛/絨的鵝，可以避免直接宰殺鵝，只需取得少量羽毛測 定待測鵝的基因型就可以知道其羽毛/絨產量如何，在待測鵝發育任何時期都可以進行， 省時省力，還可以早期選種，避免了不必要的屠宰造成的浪費，也可為養鵝產業活體按質定 價提供依據。
【附圖說明】
[0018] 圖1為PCR擴增產物Taa I酶切產物瓊脂糖凝膠電泳。
【具體實施方式】
[0019] 下面根據附圖和實施例對本發明作進一步詳細說明。
[0020] 實施例1 :一種可用于活體評估鵝羽毛/絨產量的方法，具體包括如下步驟：
[0021] 一、分別提取待測鵝群的基因組反轉錄的cDNA，鵝群羽毛發育個體差異明顯，或者 各種不同品種同一體型鶴，包括皖西白鶴、西川白鶴、浙東白鶴、吉林白鶴、豁眼鶴、長樂鵝 等。試驗所用鵝群共326只，所述待測鵝群采用同一飼養標準進行飼養。
[0022] 二、基因型鑒定：以提取的基因組DNA為模板，以序列表中SEQ ID N0:1和SEQ ID NO: 2所示的DNA分子為引物對進行PCR擴增。PCR擴增體系：總體系20 y L，cDNA模板50ng， Premix TaqlOyL，引物各10ng，其余用超純水補齊。PCR擴增條件：95°C預變性5min ;35個 循環：94°C，變性30s，退火30s，72°C延伸30s ;最后72°C延伸10min，4°C保存。
[0023] 用Taa I限制性內切酶在37°C條件下過夜消化PCR擴增產物，酶切消化產物 2. 5 %瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀分析和拍照，統計基因型。
[0024] 三、檢測限制性內切酶酶切產物的大小，確定待測鵝的基因型：凝膠成像結果如圖 1所示，酶切后的PCR產物，在瓊脂糖凝膠上呈現一條帶，大小在100bp以上，該鵝為TT基因 型（圖1的泳道2)，酶切后的PCR產物，在瓊脂糖凝膠上呈現兩條帶，兩條帶的大小在100 以內，該鵝為AA基因型（圖1的泳道3);酶切后的PCR產物，在瓊脂糖凝膠上呈現三條帶， 三條帶的大小分別在l〇〇bp以上和小于100bp，該鵝為AB基因型（圖1的泳道1、4)。檢測 結果見表1，可以看出，所用試驗群體均存在3種基因型；AA基因型占21. 74%，AT基因型占 49. 46%，IT 基因型占 28. 80%。
[0025] 四、基因型與鵝羽毛/絨產量的相關性用步驟（一）的方法鑒定基因型，每只鵝各 固定胸側5 X 5cm2皮膚區，用剪刀沿毛根部（貼皮膚）剪下羽毛/絨，稱重后數絨朵數，具體 結果見表2。結果表明，在同樣的飼養條件下，試驗的各個品種的鵝群，其基因型都與羽毛/ 絨產量緊密相關，TT基因型鵝的羽毛/絨產量顯著高于AA基因型和AT基因型（P〈0. 01)。 在實際的鵝育種中，采用上述方法檢測待測鵝的基因型，選擇TT基因型的鵝進行育種可獲 得候選的高產羽絨的鵝品系。
[0026] 表2不同基因型與鵝羽毛/絨產量相關性
【主權項】
1. 一種在體評估鵝羽毛/絨產量的方法，其特征在于，步驟包括： (1) 提取待測鵝的基因組DNA ; (2) 以待測鵝基因組DNA為模版，以 F：ACCACAGAAGAAGCCAGCT ； R：GTCCAGGATCCAGTGCCTTT ； 為引物對，進行PCR擴增，Taa I限制性內切酶酶切PCR擴增產物； (3) 檢測限制性內切酶酶切產物的大小，若酶切產物含有一條DNA片段，不小于lOObp， 則待測鵝為AA基因型；若酶切產物含有二條DNA片段，均小于lOObp，則待測鵝為TT型；若 酶切產物含有三條DNA片段，分別有不大于IOObp和小于lOObp，則待測鵝為AT基因型。 而對于不同基因型，TT基因型的羽毛/絨產量和活拔羽毛后的再生速度優于所述AA基 因型，表現為羽毛/絨品質好、鵝毛再生速度快等。
2. 根據權利要求1所述的在體評估鵝羽毛/絨產量的方法，其特征在于，⑵中使用瓊 脂糖凝膠電泳檢測Taa I限制性內切酶酶切產物大小的方法。
3. 根據權利要求1所述的在體評估鵝羽毛/絨產量的方法，其特征在于，（2)中的PCR 擴增體系為：總體系20 y L，cDNA模板50ng，Premix TaqlO y L，引物各10ng，其余用超純水 補齊。PCR擴增條件：95°C預變性5min ;35個循環：94°C，變性30s，退火30s，72°C延伸30s ; 最后72°C延伸10min，4°C保存。
【專利摘要】本發明公開了一種在體評估鵝羽毛/絨產量的方法，步驟包括：(1)提取待測鵝的基因組DNA；(2)以待測鵝基因組DNA為模版，以序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2為引物對，進行PCR擴增，TaaⅠ限制性內切酶酶切PCR擴增產物；(3)檢測限制性內切酶酶切產物的大小，若酶切產物含有一條DNA片段，不小于100bp，則待測鵝為AA基因型；若酶切產物含有二條DNA片段，均小于100bp，則待測鵝為TT型；若酶切產物含有三條DNA片段，分別有不大于100bp和小于100bp，則待測鵝為AT基因型。本發明的有益效果在于可以通過簡單的PCR擴增和酶切確定待測鵝的基因型。
【IPC分類】C12Q1-68
【公開號】CN104745704
【申請號】CN201510159104
【發明人】陳興勇, 耿照玉
【申請人】安徽農業大學
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2015年4月3日