β淀粉樣蛋白結合蛋白的制作方法
【專利說明】
[0001] 本申請是國際申請日為2011年4月13日、國際申請號為PCT/US2011/032269、進 入國家階段的申請號為201180029833. 5、發明名稱為" β淀粉樣蛋白結合蛋白"的PCT申 請的分案申請。
技術領域
[0002] 本發明涉及β淀粉樣蛋白（Αβ )結合蛋白，編碼所述蛋白質的核酸，產生所述蛋 白質的方法，包含所述蛋白質的組合物和所述蛋白質在狀況例如淀粉樣變性例如阿爾茨海 默氏病的診斷、治療和預防中的用途。
【背景技術】
[0003] 阿爾茨海默氏病（AD)是特征在于認知能力的進行性喪失和特有的神經病理學特 征的神經變性病癥，所述神經病理學特征包含在腦的幾個區域中的β淀粉樣蛋白（Αβ) 肽的沉積物、神經原纖維纏結和神經元喪失（Hardy和Selkoe，Science 297 :353, 2002 ; Mattson，Nature 431 :7004, 2004。與在阿爾茨海默氏病中觀察到的那些非常類似的腦淀粉 樣蛋白沉積物和認知損害也是唐氏綜合征（21三體)的標志，所述唐氏綜合征以800次出生 約1次的頻率發生。
[0004] Αβ肽起于通過蛋白酶解加工的淀粉樣蛋白前體蛋白質（APP)。這種加工通過命 名為α-、β-和Y-分泌酶的幾種蛋白酶的合作活性實現，并且導致不同長度的許多特異 性片段。淀粉樣蛋白沉積物主要由長度40或42個氨基酸（Αβ40，Αβ42)的肽組成。除了 人變體外，這還包括存在于除人外的生物特別是其他哺乳動物尤其是大鼠中的淀粉樣蛋白 β (1-42)蛋白的同種型。在水環境中趨于聚合的這種蛋白質可以以非常不同的分子形式 存在。不溶性蛋白質的沉積與癡呆病癥例如阿爾茨海默氏病的出現或進展的簡單關聯已證 明是不可信的。（Terry 等人，Ann. Neurol. 30 :572 - 580,1991 ;Dickson等人，Neurobiol. Aging 16:285 - 298,1995)。相比之下，突觸和認知感知的喪失看起來與可溶形式的Αβ (1-42)更好地關聯（Lue 等人，Am. J. Pathol. 155 :853_862，1999 ;]\1。1^3]1等人，八1111· Neurol. 46:860-866,1999)。
[0005] 在過去已針對單體Αβ (1-42)產生的多克隆和單克隆抗體無一證明產生所需療 效，也不在動物和/或人中引起嚴重副作用。例如，來自在極老的ΑΡΡ23小鼠中的臨床前研 宄的被動免疫接種結果指示治療上相關的副作用，所述小鼠每周接受一次針對N末端的抗 Αβ (1-42)抗體，共5個月。特別地，與鹽水處理的小鼠相比較，這些小鼠顯示微出血數目 和嚴重性中的增加（Pfeifer等人，Science 298 :1379, 2002)。在出血中的相似增加也對于 極老的（>24 個月）Tg2576 和 PDAPP 小鼠描述（Wilcock 等人，J Neuroscience 23 :3745-51， 2003 ;Racke 等人，J Neuroscience 25 :629-636,2005)。在兩個品系中，抗 Αβ (1-42)的 注射導致微出血的顯著增加。
[0006] WO 2004/067561 涉及 Αβ (1-42)肽的球形寡聚體（"球聚體（globulomers)"）和 用于制備其的過程。WO 2006/094724涉及不可擴散的球形A β (X - 38 .. 43)寡聚物， 其中X選自數目I .. 24。WO 2004/067561和WO 2006/094724進一步描述球聚體的限制 性蛋白酶解獲得所述球聚體的截短形式，例如Αβ (20 - 42)或Αβ (12-42)球聚體。WO 2007/064917描述了重組形式的淀粉樣蛋白β肽(下文稱為N-Met Αβ (1-42))及其球聚 體形式的克隆、表達和分離。數據暗示存在Αβ折疊且裝配成Αβ球聚體的淀粉樣蛋白纖 絲獨立途徑，所述A β球聚體顯示一種或多種獨特表位(下文稱為球聚體表位)。因為球聚 體表位在AD患者和APP轉基因小鼠的腦中檢測出，并且球聚體與神經元特異性結合且阻斷 LTP，所以球聚體代表病理學相關的A β構象子。已發現可溶性A β球聚體基本上通過與P/ Q型突觸前鈣通道相互作用發揮其有害作用，并且這種相互作用的抑制劑因此對于淀粉樣 變性例如阿爾茨海默氏病的治療是有用的（W0 2008/104385)。
[0007] 與Αβ的此類球聚體形式選擇性結合的抗體已在WO 2007/064972、W0 2007/0628 52、W0 2008067464、W0 2008/150946 和 WO 2008/150949 中描述。例如，由 WO 2007/062852 和TO 2008/150949已知的幾種單克隆抗體特異性識別Aβ (20-42)球聚體。
[0008] 存在關于開發生物制品例如Αβ結合蛋白的巨大的、未滿足的治療需要，所述Αβ 結合蛋白阻止或減慢疾病的進展而不誘導對人體的負面和潛在致死的作用。考慮到一般人 群漸增的壽命，和隨著這種增加每年診斷有阿爾茨海默氏病或相關病癥的患者數目中的伴 隨增加，此類需要是特別顯而易見的。進一步地，此類Αβ結合蛋白將允許正確診斷在經歷 其癥狀的患者中的阿爾茨海默氏病，這是目前僅可在驗尸后證實的診斷。另外，Αβ結合蛋 白允許闡明負責這種衰竭性疾病的蛋白質和其他生物因子的生物學性質。
【發明內容】
[0009] 本發明提供了能夠結合可溶性Αβ球聚體例如如本文描述的Αβ (20-42)球聚 體的A β結合蛋白（或簡單地"結合蛋白"）的新家族、CDR嫁接的抗體、人源化抗體及其片 段。應當指出本發明的結合蛋白還可以與除了本文描述的Αβ球聚體外的Αβ形式反應 (即，結合)，此類Αβ形式可以存在于具有淀粉樣變性例如阿爾茨海默氏病的患者的腦中。 這些Αβ形式可以是或不是寡聚物或球聚體的。本發明的結合蛋白與之結合的Αβ形式 包括任何A β形式，其包含鼠/小鼠單克隆抗體m4D10與之反應的球聚體表位(下文稱為 "m4D10")。m4D10及其性質在引入本文作為參考的WO 2007/062852中描述。此類Αβ形式 在下文稱為"靶向Αβ形式"。進一步地，本發明還提供了用其抑制所述靶向Αβ形式的活 性的治療方法，且提供用于治療與所述靶向Aβ形式相關的疾病特別是淀粉樣變性例如阿 爾茨海默氏病的組合物和方法。
[0010] 在一個方面，本發明提供了包含下述的結合蛋白：與下述至少90%等同的第一個 氨基酸序列
【主權項】
1. 一種抗體，其包含： 與SEQ ID N0:2或SEQ ID N0:3至少90%等同的第一種氨基酸序列，其中所述第一種 氨基酸序列包含由SEQ ID NO: 17-19組成的至少三個互補決定區；和 與SEQ ID NO: 1至少90%等同的第二種氨基酸序列，其中所述第二種氨基酸序列包含 由SEQ ID N0:20-22組成的至少三個互補決定區， 其中所述抗體不結合血小板因子4 (PF-4)。
2. 根據權利要求1的抗體，其中所述第一種氨基酸序列與選自下述的氨基酸序列至少 90% 等同：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO:10 和 SEQ ID NO:11。
3. 根據權利要求1的抗體，其中所述第二種氨基酸序列與選自下述的氨基酸序列至少 90% 等同：SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15 和 SEQ ID NO: 16。
4. 根據權利要求1 - 3中任一項的抗體，其包含： 與選自下述的氨基酸序列至少90%等同的第一種氨基酸序列：SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10 和 SEQ ID NO:11;和 與選自下述的氨基酸序列至少90%等同的第二種氨基酸序列：SEQ ID N0:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15 和 SEQ ID NO:16。
5. 權利要求1 _ 4的抗體，其中所述抗體選自：免疫球蛋白分子、二硫鍵合的Fv、單克 隆抗體、scFv、嵌合抗體、單結構域抗體、CDR嫁接的抗體、雙抗體、人源化抗體、多特異性抗 體、Fab、雙重特異性抗體、DVD、Fab'、雙特異性抗體、F (ab'）2和Fv。
6. 權利要求1 _ 6中任一項的抗體，其進一步包含具有選自SEQ ID NO: 27和SEQ ID NO:28的氨基酸序列的免疫球蛋白輕鏈恒定區。
7. 根據權利要求1 - 7中任一項的抗體，其中所述抗體進一步包含選自下述的試劑： 免疫粘附分子；顯像劑和治療劑。
8. 根據權利要求1 _ 7中任一項的抗體，其中所述抗體具有人糖基化模式。
9. 一種分離的核酸，其編碼權利要求1 _ 8中任一項的抗體。
10. -種載體，其包含權利要求9的分離的核酸。
11. 一種宿主細胞，其包含權利要求10的載體。
12. -種產生抗體的方法，其包括在足以產生所述抗體的條件下在培養基中培養權利 要求10的宿主細胞。
13. -種抗體，其根據權利要求11的方法產生。
14. 一種藥物組合物，其包含權利要求1 - 8或14中任一項的抗體和藥學可接受的載 體。
15. 權利要求14的藥物組合物，其進一步包含至少一種另外的治療劑。
16. -種用于釋放抗體的組合物，所述組合物包含： (a) 制劑，其中所述制劑包含權利要求1 - 8中任一項的抗體和成分，其中所述抗體是 結晶的；和 (b) 至少一種聚合載體。
17. 權利要求1 - 8中任一項的抗體在制備用于治療患有選自下述的疾病 或病癥的受試者的藥物中的用途：a 1-抗胰蛋白酶缺乏、Cl-抑制劑缺乏血管性水 月中、抗凝血酶缺乏血栓栓塞性疾病、庫魯病、克雅二氏病/羊瘙癢癥、牛海綿狀腦病、 Gerstmann-Straussler-Scheinker病、家族致命性失眠癥、亨廷頓氏病、脊髓小腦性共濟失 調、Machad 0-Jos印h萎縮、齒狀紅核蒼白球肌萎縮癥、額顳癡呆、鐮狀細胞性貧血、不穩定性 血紅蛋白包涵體溶血、藥物誘發的包涵體溶血、帕金森氏病、全身性AL型淀粉樣變性、結節 性AL型淀粉樣變性、全身性AA型淀粉樣變性、前列腺淀粉樣變性、血液透析淀粉樣變性、遺 傳性(冰島）腦血管病、亨廷頓氏病、家族性內臟淀粉樣變性、家族性內臟多神經病、家族性 內臟淀粉樣變性、老年性全身性淀粉樣變性、家族性淀粉樣蛋白神經病、家族性心臟淀粉樣 變性、阿爾茨海默氏病、唐氏綜合癥、甲狀腺髓樣癌和2型糖尿病（T2DM)。
【專利摘要】本發明涉及β淀粉樣蛋白（Aβ）結合蛋白。本發明的抗體對于Aβ（20-42）球聚體或包含球聚體表位的任何Aβ形式具有高親和力。還提供了制備本發明抗體的方法和使用本發明抗體的方法。
【IPC分類】A61P25-14, C07K16-18, A61P25-20, C12N15-13, A61P35-00, A61P25-16, A61P25-00, A61P7-00, A61P7-10, A61P7-02, A61K39-395, A61P3-10, A61P25-28
【公開號】CN104744591
【申請號】CN201510136184
【發明人】S.巴格霍恩, H.希倫, A.施特里賓格, S.吉艾西, U.埃伯特, L.貝納特伊爾
【申請人】Abbvie德國有限責任兩合公司, Abbvie 公司
【公開日】2015年7月1日
【申請日】2011年4月13日
【公告號】CA2796339A1, CN102933601A, EP2558494A2, US8987419, US20110256138, US20150218261, WO2011130377A2, WO2011130377A3