一種聚乙二醇單甲醚修飾甘草次酸作為肝靶向給藥載體及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥領域，具體設及一種聚己二醇單甲離修飾甘草次酸作為肝祀向給 藥載體及其制備方法。 技術背景
[0002] 目前，肝癌在我們的發病率較高，原發性肝癌發發病率占全球的45%，死亡率在惡 性腫瘤中高達第二位，5年之內的存活率僅有5%。目前來看，治療癌癥的方法有器官移植、 放療、化療等方法。對于肝癌，器官移植收到供體的匿乏的嚴重限制并存在免疫排斥問題； 放療會直接損傷膽管，一般不用于肝癌的治療。因此，使用抗腫瘤藥物的"化療法"在肝癌 的治療中占有重要的地位。目前來看，"化療法"效果不明顯，其主要原因是大多抗腫瘤藥物 的水溶性較差，祀向性較低，毒性大，加之肝臟本身對藥物的耐受能力有限，藥物劑量小時 作用甚微；大劑量用藥無疑會嚴重損傷其它臟器導致器官衰竭。因此發展可控性肝祀向性 的給藥載體對肝臟腫瘤的治療十分必要，已成為新一代藥物傳遞系統的重點研究方向。肝 革己向給藥載體（Hepatic targeted化ug delivery System，HTODS)可將藥物高效輸送至 肝臟并在病變部位高濃度富集，減輕藥物對其它臟器的損害，減少用藥劑量和給藥次數，提 高療效。
[0003] 目前，載體膠束作為藥物載體已經顯示了較好的應用前景，其組成材料具有生 物可降解性，毒性小等特點，還可緩釋藥物，延長藥物作用時間；靜脈給藥后可由肝臟 Kuppfer細胞攝取而被動祀向于肝，使藥物達到肝器官的目的。但是普通膠束容易被調理素 識別，被肝臟W外的其他單核巨瞻細胞系統吞瞻，存在選擇性差，祀向效率低的問題。
[0004] Negishi等在證實了離體大鼠肝細胞均漿的細胞膜組分中含有多量甘草次酸 (Glycyrrhetinicacid，GA)特異結合為點，在所有臟器組織中，肝臟的GA結合位點活性 最高。GA與該結合位點的結合可成飽和性、高度特異性，且該結合位點具有蛋白質性質。國 內也有學者用投射電鏡進行觀察，證實了肝細胞表面確實存在大量GA受體。隨后國內外一 些學者紛紛報道了W甘草酸/甘草次酸修飾的脂質體或血清蛋白可W在肝臟組織中富集。
[0005] 如毛聲俊在肝細胞祀向甘草次酸表面修飾脂質體的制備[中國中藥雜志，2003 年 4 月第28 卷第4 期，323-331] W 毛聲俊在 2007 年 Pr 巧 aration，characterization and updtake by primary cultured rat hepatocytes of liposomes sufer-modofied with glycyrrhetinic acid .化armazie，[ORIGINAL，ARTICLES, 2007 年，62 卷第 8 期； 614-619]中公開了一種甘草次酸表面修飾脂質體，它是將GA與硬脂醇、班巧酸酢偶聯，合 成一新型兩親性導向分子，將其滲入脂質體中，介導該修飾脂質體與肝細胞表面的GA受體 特異結合，W期達到肝細胞主動祀向作用。該甘草次酸表面修飾脂質體簡稱LP-SM-GA。制 得的甘草次酸修飾的脂質體平均粒徑在65~79nm之間，甘草次酸修飾脂質體的摩爾含量 最高位10%。又如，中國專利申請CN101006983A公開了甘草酸修飾殼聚糖/駿化殼聚糖復 合載藥納米粒的制備方法，甘草酸修飾組可進入鼠肝實質細胞的細胞核中，相同時間內巧 光標記的甘草酸鹽修飾的納米粒在肝實質細胞的巧光強度對照組強于對照組，具體是將甘 草酸鹽為祀向基團，通過靜電相互作用制備成載藥納米粒而并未設及甘草次酸的相關內容 (文獻報道肝細胞膜上甘草次酸的結合位點多余甘草酸);中國專利申請CN1743008A公開了 甘草次酸修飾的殼聚糖納米粒子并表現出明顯的祀向性，但是甘草次酸直接修飾殼聚糖的 制備條件較為意義重大；中國專利CN101254308B制備了甘草次酸-氨基聚己二醇/殼聚糖 或殼聚糖衍生物肝祀向復合納米粒，體外細胞實驗顯示對肝細胞有很強的結合能力，可提 高給藥載體的肝祀向能力，能實現對肝臟的祀向定位。
[0006] 但現有技術反應收率低，反應產物純度不高，水溶解性低，肝祀向能力不足，反應 成本高，并且反應大多W化晚作為縛酸劑，中和反應中生成的鹽酸，但化晚毒性大，易損害 實驗人員健康，而且回收困難。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的是提供一種聚己二醇單甲離修飾甘草次酸作為肝祀向給藥載體及 其制備方法，具有收率高、水溶解性高、純度、肝祀向能力、毒性小、成本低和回收簡單的優 點。
[000引為解決W上技術問題，本發明采用W下技術方案： 一種聚己二醇單甲離-甘草次酸作為肝祀向給藥載體的制備方法，所述制備方法包括 W下步驟： (1)聚己二醇單甲離-對甲苯橫酸醋（mPEG-OTs)的制備； (2) 聚己二醇單甲離-鄰苯二甲酯亞胺（mPEG-PI)的制備； (3) 單端氨基聚己二醇單甲離（mPEG-NHs)的制備； (4) 聚己二醇單甲離-甘草次酸（mPEG-180-GA)的制備。
[0009] W下是對上述技術方案的進一步優化： 所述聚己二醇單甲離-甘草次酸作為肝祀向給藥載體的制備方法中采用的有機溶劑 為：無水己離，二氯甲燒和N，N-二甲基甲酯胺值MF)。
[0010] 所述聚己二醇單甲離-對甲苯橫酸醋（mPEG-OTs)的制備方法包括W下步驟： (1) 反應步驟； (2) 提純步驟。
[0011] 所述反應步驟中：聚己二醇單甲離（m陽G)與對甲苯橫酷氯（TsCn)的摩爾比為 1~3 ;3~9。
[001引所述聚己二醇單甲離-鄰苯二甲酯亞胺（mPEG-PI)的制備方法包括W下步驟： (1) 反應步驟； (2) 提純步驟。
[001引所述反應步驟中；聚己二醇單甲離-對甲苯橫酸醋（m陽G-OTs)與鄰苯二甲酯亞胺 鐘（PPI)的摩爾比為1~6 ;3~18。
[0014] 所述單端氨基聚己二醇單甲離（mPEG-NHs)的制備方法包括W下步驟： (1) 反應步驟； (2) 提純步驟。
[0015] 所述聚己二醇單甲離-甘草次酸（mPEG-18 0 -GA)的制備方法包括W下步驟： (1) 反應步驟； 其中單端氨基單甲氧基聚己二醇（mPEG-NH2)、180-GA、DCC和N服的摩爾比為；3~ 12 ;1 ~4 ;3 ~12 ;3 ~12 ; (2) 提純步驟。
[0016]所述 mPEG-OTs 收率為 84. 54% W上，mPEG-PI 收率為 88. 96% W上，mPEG-N肥收率 為 88. 72% W上，mPEG-18 0 -GA 收率為 82. 43% W上。
[0017]所述 mPEG-OTs 的純度為 95. 74% W上，mPEG-PI 的純度為 96. 88% W上，mPEG-NHa 的純度為99. 51% W上，mPEG-18 0 -GA的純度為99. 65% W上。
[001引當甘草次酸的駿基與單氨基聚己二醇單甲離反應時，得到聚己二醇單甲離-甘草 次酸（mPEG-18 0-GA);
【主權項】
1. 一種聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法，其特征在于：所 述制備方法包括以下步驟： (1)聚乙二醇單甲醚-對甲苯磺酸酯（mPEG-OTs)的制備； (2) 聚乙二醇單甲醚-鄰苯二甲酰亞胺（mPEG-PI)的制備； (3) 單端氨基聚乙二醇單甲醚（mPEG-NH2)的制備； (4) 聚乙二醇單甲醚-甘草次酸（mPEG-180-GA)的制備。
2. 如權利要求1所述的聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法， 其特征在于：所述聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法中采用的有 機溶劑為：無水乙醚，二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺（DMF)。
3. 如權利要求1所述的聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法， 其特征在于：所述聚乙二醇單甲醚-對甲苯磺酸酯（mPEG-OTs)的制備方法包括以下步驟： (1) 反應步驟； (2) 提純步驟。
4. 如權利要求3所述的聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法， 其特征在于：所述反應步驟中：聚乙二醇單甲醚（mPEG)與對甲苯磺酰氯（TsCl)的摩爾比 為1~3 :3~9〇
5. 如權利要求1所述的聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法， 其特征在于：所述聚乙二醇單甲醚-鄰苯二甲酰亞胺（mPEG-PI)的制備方法包括以下步 驟： (1) 反應步驟； (2) 提純步驟。
6. 如權利要求5所述的聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法， 其特征在于：所述反應步驟中：聚乙二醇單甲醚-對甲苯磺酸酯（mPEG-OTs)與鄰苯二甲酰 亞胺鉀（PPI)的摩爾比為1~6:3~18。
7. 如權利要求1所述的聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法， 其特征在于：所述單端氨基聚乙二醇單甲醚OiiPEG-NH2)的制備方法包括以下步驟： (1) 反應步驟； (2) 提純步驟。
8. 如權利要求1所述的聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法， 其特征在于：所述聚乙二醇單甲醚-甘草次酸（mPEG-18 0 -GA)的制備方法包括以下步驟： (1) 反應步驟； 其中單端氨基單甲氧基聚乙二醇（mPEG-NH2)、180-GA、DCC和NHS的摩爾比為：3~ 12 :1 ~4 :3 ~12 :3 ~12; (2) 提純步驟。
9. 如權利要求1所述的聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法， 其特征在于：所述mPEG-OTs收率為84. 54%以上，mPEG-PI收率為88. 96%以上，mPEG-NH2收 率為88. 72%以上，mPEG-18 0 -GA收率為82. 43%以上。
10. -種聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法制備的聚乙二醇 單甲醚-甘草次酸，其特征在于：所述mPEG-OTs的純度為95. 74%以上，mPEG-PI的純度為 96. 88% 以上，mPEG-NHd^純度為 99. 51% 以上，mPEG-18 0-GA的純度為 99. 65% 以上。
【專利摘要】本發明公開了一種聚乙二醇單甲醚-甘草次酸作為肝靶向給藥載體的制備方法，所述制備方法包括以下步驟：（1）聚乙二醇單甲醚-對甲苯磺酸酯(mPEG-OTs)的制備；（2）聚乙二醇單甲醚-鄰苯二甲酰亞胺(mPEG-PI)的制備；（3）單端氨基聚乙二醇單甲醚(mPEG-NH2)的制備；（4）聚乙二醇單甲醚-甘草次酸（mPEG-18β-GA）的制備；該給藥載體，具有水溶解性高、肝靶向能力高和純度高的優點；所述mPEG-OTs的收率為84.54%以上，純度為95.74%以上，mPEG-PI的收率為88.96%以上，純度為96.88%以上，mPEG-NH2的收率為88.72%以上，純度為99.51%以上，mPEG-18β-GA收率為82.43%以上，純度為99.65%以上。
【IPC分類】A61K47-34, C08G65-48, A61P1-16
【公開號】CN104725631
【申請號】CN201510073481
【發明人】鄭增娟, 張維芬, 于英杰, 管宇
【申請人】鄭增娟
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年2月12日