一種peg化多肽及其制備方法和其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物制藥領域，具有涉及一種抗HIV多膚及其制備方法和其用途。
【背景技術】
[0002] 從1981年美國首次發現并報導艾滋病至今，艾滋病的防治一直沒有得到有效解 決。艾滋病由人類免疫缺陷病毒（HIV)感染引起，目前上市的HIV的治療性藥物多為針對 病毒逆轉錄酶、整合酶、蛋白酶等的一些小分子酶抑制劑，由于HIV的超高突變性，使得該 些小分子特效藥物正在逐漸退化為常效、甚至無效藥物。近年來，隨著HIV入侵宿主細胞分 子機制的逐步闡明，抑制該過程的多膚藥物逐漸成為艾滋病防治領域的研究熱點，該種多 膚藥物可特異性結合HIV囊膜上的融合蛋白從而抑制病毒進入宿主細胞，瑞± Roche和美 國Trimeris公司共同研制的T-20 (商品名：化zeon)是目前唯一上市的抗HIV多膚藥物， 與傳統的小分子抗HIV藥物相比較，T-20具有很強的對抗突變株的能力，且無毒副作用，自 2003年上市至今已在艾滋病治療中占有不可替代的位置。
[0003] 近年來，隨著生物技術的快速發展，越來越多的多膚藥物在疾病的預防和治療中 得到應用。雖然多膚類藥物的作用位點專一、療效確切，但溶解度低、免疫原性高、易被蛋白 酶降解和被腎臟清除等缺陷嚴重地制約了其臨床應用。抗HIV多膚也存在同樣問題，T-20 注射后很快會被患者體內血漿蛋白酶降解，患者通常需要1天多于2次的注射治療，在美國 注射T-20-年要花費兩萬美元，在歐洲一年要花費兩萬五千美元，昂貴的藥費使得T-20的 應用受到極大限制。因此，研究并建立延長T-20和皿212體內半衰期、提高其生物利用率 的化學修飾方法與技術對于抗HIV多膚藥物的臨床應用至關重要。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是提供一種PEG化多膚及其制備方法和其應用。
[0005] 本發明提供的一種PEG化多膚，具有式I所示結構：
[0006]
【主權項】
1. 一種PEG化多肽，具有式I所示結構：
式I中，X為1)或2)所述的多肽：1)具有序列表中SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列 的多肽；2)將序列表中的SEQ ID N2 . 1的氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取 代和/或缺失和/或添加且具有抗HIV活性的由1)衍生的多肽；Y取代基選自式I -1所 示取代基，其中PEG表示聚乙二醇，η表示PEG的平均分子量，m表示甲氧基，所述甲氧基與 PEG的另一端即與連有N-取代的馬來酰亞胺的相對一端連接： mPEGn 式 I _1 ; Z選自含有巰基的氨基酸；m為O或I ;n為O或I ;p為O或I ;q為O或I ;p和q不同 時為〇 ;m和η不同時為O ;p為O時m也為O ;q為O時η也為O ;優選的，式I中m為O或 1;]1為0或1$為0或1;9為0或1$和9不同時為1或0;1]1和11不同時為0或1 ;口為 O時，m也為O ;q為O時，η也為O ;再優選的，式I中m為I ;n為O ;p為I ;q為0。
2. 根據權利要求1所述的PEG化多肽，其特征在于：所述Y取代基中，η為2000-5000 ; 優選2000或5000 ;最優選2000。
3. 根據權利要求1或2所述的PEG化多肽，其特征在于：所述Z選自半胱氨酸。
4. 一種多肽定點PEG化修飾方法，所述方法包括：將式II所示化合物同式III所示化合 物反應即可：
式II中，Y取代基選自式I -1所示取代基，其中PEG表示聚乙二醇，η表示PEG的平均 分子量，m表示甲氧基，所述甲氧基與PEG的另一端即與連有N-取代的馬來酰亞胺的相對 一端連接： mPEGn 式 I _1 ; 式III中，X為1)或2)所述的多肽：1)具有序列表中SEQ ID Ns . 1所示的氨基酸序列的 多肽；2)將序列表中的SEQ ID N2 . 1的氨基酸殘基序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代 和/或缺失和/或添加且具有抗HIV活性的由1)衍生的多肽；Z選自含有巰基的氨基酸；p 為0或I ;q為0或I ;p和q不同為0。
5. 根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述式III中，Z選自半胱氨酸。
6. 根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述Y取代基中，η為2000-5000 ;優 選2000或5000 ;最優選2000。
7. 根據權利要求4-6任一所述的方法，其特征在于：所述式II所示化合物同式III所示 化合物反應的pH范圍為7. 2-9. 5 ;優選7. 2、8. 0或9. 5 ;最優選7. 2。
8. 根據權利要求4-7任一所述的方法，其特征在于：所述式II所示化合物同式III所示 化合物反應的反應溶劑為緩沖液。
9. 權利要求1-3任一所述的PEG化多肽或由權利要求4-8任一所述的方法制備得到的 PEG化多肽在制備下述至少一種產品中的應用： 1) 抗HIV產品 2) 治療和/或預防艾滋病的產品。
10. -種多肽，為1)或2)所述的任一多肽： 1) 具有序列表中SEQ ID Ns . 2、SEQ ID Ns . 3或SEQ ID Ns . 4所示的氨基酸序列的多 肽； 2) 將序列表中的SEQ ID Ns . 2、SEQ ID Ns . 3或SEQ ID Ns . 4的氨基酸殘基序列經過 一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有抗HIV活性的由1)衍生的多 肽。
【專利摘要】本發明公開了一種PEG化多肽及其制備方法和其應用。該PEG化多肽的結構式如式Ⅰ所示：。式Ⅰ中X基團優選抗HIV多肽T-20，Y選自PEG化合物，Z優選為含巰基的半胱氨酸。本發明的PEG化多肽與T-20相比，體內半衰期延長、藥效長、穩定性高。本發明公開的多肽定點PEG化修飾方法，可在溫和的反應條件下進行，方法簡單高效。
【IPC分類】A61P31-18, A61K47-48, A61K38-16, C07K1-107, C07K14-16
【公開號】CN104725491
【申請號】CN201310706149
【發明人】李學兵, 程水紅, 馬麗英, 邵一鳴
【申請人】中國科學院微生物研究所, 中國疾病預防控制中心性病艾滋病預防控制中心
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2013年12月19日